Тема14. Производство лечебно-профилактических сывороток

 

Лечебно-профилактические и диагностические иммунные сыворотки используют для профилактики инфекционных заболеваний, лечения больных, а также для серологических методов диагностики болезней.

Гипериммунные сыворотки представляют собой сыворотки крови животных, систематически иммунизированных бактериальными или вирусными антигенами, содержащие антитела, обладающие строго специфическим действием на бактериальные токсины, патогенные бактерии или вирусы, против которых иммунизировали животных.

Изготовление лечебно-профилактических гипериммунных сывороток представляет сложный, длительный и многогранный технологический процесс, в котором участвуют врачи-микробиологи, биотехнологи, биохимики, зооинженеры, рабочие- аппаратчики, работники электротехнической службы.

Технология производства гипериммунных сывороток объединяет ряд подразделений биопредприятий, главным из которых является сывороточный цех.

Структура сывороточного цеха включает:

1. Карантинное отделение

2.Иммунизационные клиники

3. Антигенные лаборатории

4. Отделения получения, концентрирования и очистки сывороток. При создании гипериммунных сывороток требуются стерильные условия. Боксы должны обеспечиваться притоком стерильного воздуха. Рабочие места, стены, потолок, пол подвергаются влажной уборке с дезрастворами и УФ-облучения. Остальные помещения должны иметь приточно-вытяжную вентиляцию. Сжатый воздух, вакуум, холодная, горячая, дистиллированная, деминерализованная вода подаются по системе трубопроводов.

В сывороточном цехе должны иметься автоклавные, термостатные, рефрижераторные помещения, холодильники.

Основными задачами иммунизационных отделений являются:

1. Отбор животных

2. Иммунологическая подготовка животных-продуцентов

3. Содержание и кормление животных

4. Иммунизация животных

5. Кровопускание

6.Ветеринарно-санитарное и зоотехническое обслуживание животных.

Для приготовления гипериммунных сывороток чаще всего используют лошадей и крупный рогатый скот (волы). При производстве сыворотки против рожи используют свиней.

Животные, применяемых для получения сывороток, завозят из стационарно благополучных по инфекционным болезням районов. Они должны быть клинически здоровыми, средней и выше средней упитанности, свободными от накожных паразитов.

На получение высокоэффективных лечебно-профилактических сывороток влияют:

-качество применяемых антигенов (в частности, их чистота, объем и концентрация);

-неспецифические раздражители и адьюванты;

-индивидуальные особенности животных-продуцентов (в частности, их способность к иммунобиологической перестройке при создании у них грундиммунитета, для чего необходим тщательный отбор животных-продуцентов);

-метод и схемы гипериммунизации;

-содержание и кормление животных в период их подготовки и
эксплуатации.

Существует прямая связь между качеством антигена, силой антигенного раздражения и уровнем накопления специфических антител в крови животных.

Для приготовления антигенов должны использоваться штаммы микроорганизмов, обладающие хорошо выраженными антигенными и иммуногенными свойствами.

Качество антигенов зависит от следующих факторов:

1. Чистота (неконтаминированность посторонней микрофлорой);

2. Степень очистки антигенов от балластных белков;

3. Концентрация.

При изготовлении гипериммунных сывороток применяют антигены, специфическое действие которых усилено адъювантными веществами, в качестве которых используют гель гидроокиси алюминия, алюминиевые квасцы и др.

В практике производства антитоксических сывороток широко используют хлористый кальций, алюмокалиевые квасцы, адьюванты типа Фрейда, тапиока.

Контроль качества сывороточных препаратов. Контроль за качеством сывороток осуществляют на всех стадиях их изготовления.

После производственного контроля каждая серия сыворотки проверяется по физическим показателям (цвет и консистенция), на стерильность, безвредность, правильность объема расфасовки в разные емкости (ампулы или флаконы), герметичность их укупорки, качество этикетировки, маркировки и упаковки, а также специфическую активность после 20-дневного выдерживания при (37 ± 1) °С.

Проводят также контроль сывороточных препаратов на содержание белка, водородных ионов (рН), электрофоретическую чистоту и др. (апирогенность, остаточное содержание солей).

Сывороточные препараты должны быть стерильными (не контаминированы бактериями и вирусами), безвредными и высокоактивными специфическими препаратами.

Контроль бактериальной стерильности проводят по общепринятой методике высевами из препарата на питательные среды МПА, МПБ с глюкозой, МППБ под маслом, на агар Сабуро или среду Чапека для исключения грибковой микрофлоры.

Безвредность каждой серии сывороточных препаратов проверяют на морских свинках массой по 300 - 400 г (беременных свинок в опыт не берут), которым подкожно вводят 10 мл сыворотки (по 5 мл с обеих сторон); иногда безвредность проверяют на кроликах. Животные должны оставаться здоровыми и не иметь заметной местной и общей реакции в течение 10-дневного наблюдения.

Специфическую активность сывороточных препаратов определяют биологическим и серологическим методами. Для определения биологической активности используют восприимчивых лабораторных животных, эмбрионы птиц или культуры клеток. Разведения для РН на животных делают 1/15 М фосфатным буферным или физиологическим растворами при рН 7,4 (с 0,2 % желатина).

Серологические исследования проводят в соответствующих реакциях (РН, РДП в агаровом геле, РТГА, PGK, РИГА и др.) с использованием в качестве контроля заведомо известных позитивных и негативных сывороток (референс-препаратов).

Активность сывороточных препаратов определяют по сравнению со стандартными (эталонными) референс-препаратами. Для этого сыворотку с неизвестной активностью используют параллельно со стандартной сывороткой, а затем рассчитывают дозу испытуемой сыворотки, эквивалентную по эффекту единице активности стандарта. Это позволяет исключать влияние на результаты оценки таких факторов, как особенности тест-агентов, чувствительность подопытных животных, сезонность и др., т.к. эти факторы в равной степени будут влиять на результаты, получаемые со стандартной и испытуемой сыворотками, и активность испытуемой сыворотки относительно стандартной будет оставаться постоянной.

Дальнейшие интенсивные исследования в области стандартизации сывороточных препаратов, усиление требований к системам лабораторного и биологического контроля вновь разрабатываемых и модифицируемых препаратов, выделение этого направления в самостоятельную проблему несомненно будут способствовать еще большему улучшению качества лечебно-профилактических и диагностических сывороточных препаратов.