Короткий по сравнению с более длительный срок лечения

Два испытания (Thin 1979, Hager 1980) сравнивали разовая 2 г пероральной дозы метронидазола с 5-7 - дневного курса метронидазола. Паразитологии излечение было достигнуто у 88% и 92% женщин с короткими и длинными лечения, соответственно.Побочные эффекты были в основном желудочно - кишечного тракта (тошнота, рвота) и чаще с одной дозой (15% против 7%). Хотя суд Hager был относительно большой (468 женщин, обучающихся), только 38% присутствовали следить за визит.

Hager 1980 также сравнили частоту неудач в подгруппах женщин, которые сказали, что их партнеры взяли лечение по сравнению с теми, чьи партнеры не сделали, а те, кто допущен к половой акт (они советовали против него) по сравнению с теми, кто не сделал. Никаких различий не было найдено в одном сравнения (7-21 дней после обработки). Тем не менее, высокие потери следить вызывает озабоченность по поводу сопоставимости двух групп.

Два исследования (Aimakhu 1975, Найгаард 1977) сравнили стандартный недельный курс метронидазола с коротким курсом тинидазол и орнидазола, соответственно.

В целом, короткое лечение было сравнимо с длительного лечения с точки зрения не паразитологической лечения (ОР 1,12, 95% ДИ от 0,58 до 2,16). Побочные эффекты, однако, особенно тошнота / рвота и головокружение, достоверно чаще встречались с короткими лечения.

Оральный по сравнению с интравагинального лечения

Два испытания (Тидвелл 1994, DuBouchet 1998) по сравнению по сравнению с устной интравагинального лечения. Тидвелл поступил только с положительной культурой женщин, которые (как они должны были быть отозваны) привело к потере одной трети женщин, имеющих право. DuBouchet также потерял 27% участников первой прослеживания визита, и 44% второго последующего визита. Были использованы данные из первого последующего визита. Наш анализ показал, что пероральное лечение было более успешным в достижении паразитологическое лечения.

Одно исследование (Forster 1963) по сравнению с оральное лечение метронидазол с оральным и интравагинального лечения вместе (как долгосрочной перспективе) и обнаружили, комбинированный режим более эффективным.

Оральный по сравнению с оральным плюс интравагинального лечения

Четыре испытания (Chung 1978, Diwald 1971, Forster 1963, Gummerus 1983) посравнению оральный по сравнению с оральным плюс интравагинального лечения. Все исследования, кроме одного (Diwald 1971) обнаружили, комбинированные оральные и интравагинального лечение более эффективным.

Лечение партнера по сравнению с отсутствием лечения партнера

Одно исследование (Lyng 1981) рандомизированное партнеры женщин с трихомониазом (которые получали стандартное лечение с тинидазол 2 г) для лечения (тинидазол 2 г разовая доза) или плацебо. Несмотря на то, что не было никакой разницы в паразитологических результатов на первом следить, значительно больше женщин (3/59 против 14/59), чьи партнеры получили плацебо были трихомонады положительный результат второго наблюдения примерно в два месяца по сравнению с женщинами, чьи партнеры были обработаны. История полового акта не влияет на результаты.

Не найдено испытаний было выявлено, что рассматривали и другие стратегии лечения различны партнера, такие как зрение, слух или консультирование партнеров по отдельности.

Простой и быстрый метод криоконсервации трихомонад

· Джунджи Мацуо

Оригинальная бумага

Первый Интернет:

13 мая 2007

DOI: 10.1007 / s00436-007-0559-й

Cite эту статью:

Мацуо, J. Parasitol Res (2007) 101: 907. DOI: 10.1007 / s00436-007-0559-у

· Цитирование: 1

Абстрактные

Способ замораживания гранул, один тип протокола быстрого замораживания, была создана для трихомонад. Криопротекторов, 5-20% диметилсульфоксиде (ДМСО), этиленгликоль, пропиленгликоль и глицерин использовались. Из них, ДМСО показали высокий защитный эффект, с максимальным эффектом при концентрации 20%.Никакого эффекта от времени для уравновешивания не была признана ни с одной из криопротекторов. Таким образом, оптимальное условие было признано 20% ДМСО без уравновешивания. Метод гранула замораживание также по сравнению с обычным протоколом медленным охлаждением. Выживаемость составила 73 ± 8% с медленным протоколом охлаждения и 48 ± 4% с методом гранул замораживания. Задержка роста с методом замораживания гранул было не больше, чем 5,4 ч по сравнению с медленным протоколом охлаждения, предполагая его справедливость как метод криоконсервации T.влагалищной.

Введение

Криоконсервация микроорганизмов является важнейшим методом для предотвращения изменения биологических особенностей, потеря штаммов, а также бактериального загрязнения, а также экономия времени, труда и материалов (McEntegart 1954; Miyata1973; Miyake и др. 2004; De Paoli 2005). Способ также альтернативный способ уменьшения, уточнения, и замена экспериментальных животных, используемых для прохождения паразитов (Eckert 1997). Успешное криоконсервации сообщается с простейшими, таких как дизентерийная амёба (Samarawickrema и др. 2001), трихомонады (McEntegart 1954, 1959; Даймонда 1964; Лумсден и др. 1966; Wasley и Рейнер 1970; Мията 1973, 1975; Miyake и др. 2004), и Blastocystis Hominis (Suresh и др.1998), а также с личинками гельминтов, таких как Angiostrongylus cantonensis (Wang идр. 1999), Тохосага Canis (Ramp и др. 1987), и трихинеллы Spiralis (Росси и Pozio 1988).

Соответствующая скорость охлаждения, криопротектор, время установления равновесия, и скорость оттаивания, как известно, необходимы для успешной криоконсервации клеток (Diamond, 1964; Hubalek 2003; Miyake и др. 2004). Из них, скорость охлаждения является одним из наиболее важных факторов, влияющих на жизнеспособность клеток и, если подходит, может привести к различным травмам клеток. Например, внеклеточный замораживание вызывает чрезмерное обезвоживание и соли токсичности, в то время как внутриклеточное замораживание вызывает механическое разрушение (Mazur 1980). Последнее происходит при быстром замораживании и приводит клетальному исходу. Следовательно, медленный протокол охлаждения, который считается маловероятным, чтобы привести к образованию внутриклеточного льда, широко используется для различных паразитов (Алмазные 1964; Экертом 1997; Wang и др. 1999; Miyake и др. 2004; Де Паоли 2005). Хотя этот протокол может достичь высокой жизнеспособности, завершение криоконсервации отнимает много времени. Быстрый протокол замораживания поэтому был разработан для ооцитов, эмбрионов и спермиев человека и животных (Otoi и др. 2000). Способ замораживания гранул один такой быстрый протокол замораживания, и в основном используется для криоконсервации сперматозоидов скота (Otoi и др. 2000). Как криогенный флакон может содержать несколько гранул, выгодно тем, что способ позволяет экономить пространство в контейнере с жидким азотом, а также быть простым и легким.

В целом, в просвете протозойных паразитов, таких как T.влагалищной, как полагают, имеют низкую толерантность замерзания по сравнению с кровепаразитов, такими как Plasmodium SPP. и Trypanosoma SPP. (Miyake и др. 2004). Тем не менее, Samarawickrema и др. (2001) разработали быстрый протокол замораживания с участием прямой погружении флакона в бане с температурой -70 ° для кишечника простейшими E.гистолитика, что предполагает потенциал для криоконсервации T.влагалищной. Цель данного исследования состояла в том, чтобы установить быстрый протокол замораживания с использованием метода замораживания гранул и выявить его применимость для криоконсервации T.влагалищной.

Материалы и методы

Протозоа

Т.влагалищной штамм был получен из Кобе школы медицины университета, Япония (Miyake и др. 2004). Он пересевали в Триптиказно-дрожжевой экстракт-солодовый сахар (TYM) среде, дополненной 10% инактивированной нагреванием лошадиной сыворотки и антибиотиков (100 ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина) при 37 ° C (Clark и алмазную 2002).

Криопротекторы

Криопротекторов, диметилсульфоксиде (ДМСО, Wako Pure Chemical, Осака, Япония), этиленгликоль (WAKO), пропиленгликоль (WAKO) и глицерин (WAKO), были использованы. Эти реагенты были химически чистый класс (Hubalek 2003).

Криоконсервация

Для получения гранул замораживания, 2-дневных трихомонады были охлажденным на льду в течение 10 мин, собирали путем центрифугирования при 750 × г в течение 5 мин, и доводили до 2 × 10 ⁶ трихомонадами / мл в свежей среде, дополненной TYM с сывороткой. Суспензию смешивают с равным объемом TYM среды в том числе 10-40% (об / об) криопротектора, так что конечная концентрация T.влагалищной был 1 × 10 ⁶трихомонад / мл. После уравновешивания в течение 0-4 ч, добавляли 50 мкл суспензии непосредственно уронить на сухой лед блок, содержащий отверстия (диаметром 4 мм, и глубину, как показано на рис. 1 а). Каждая капля сразу же образуется осадок в течение примерно 1 мин (максимальная скорость замораживания:. Примерно 150 ° С / мин; рис 1б). Затем гранулы были помещены в криогенной ампуле (Simport, Quebec, Canada) и выдерживают при температуре -80 ° С в течение не менее 24 ч.

Инжир. 1

Схематическое изображение и кривой охлаждения методом гранул замораживания. Отверстие (около 4 мм в диаметре и 4 мм в глубину) была сделана на сухой лед блока, а затем 50 мкл суспензии, в том числе T.влагалищной был понижен в него. Падение сразу образуется осадок в течение примерно 1 мин.Осадок затем встраивают в криогенном флакон с помощью щипцов ().Максимальная скорость замораживания составляла приблизительно 150 ° С / мин (б)

Для сравнения, криоконсервация с использованием протокола медленного охлаждения также была проведена. Т.влагалищной суспензию, содержащую 10% ДМСО получали,как описано выше, и замораживают с помощью крио 1 ° C замораживания контейнер (Nalgene Nunc International, Нью - Йорк, США) в -80 ° C морозильная камера всоответствии с инструкциями изготовителя.

Жизнеспособность анализ

Для оценки метода гранул замораживания, жизнеспособность T.влагалищной после оттаивания оценивали с использованием следующего метода: один осадок засевают в 5 мл TYM среде, дополненной сыворотки и антибиотики затем культивировали при 37 ° С втечение 48 ч. Затем труба охлаждалась, как упомянуто выше, и инвертированный покрайней мере, в десять раз. Повторяющиеся подсчеты T.влагалищной затем были проведены с использованием счетной камеры Нейбауера. Для сравнения метода гранула по замораживанию и медленный протокол охлаждения, отсчеты проводились черезкаждые 12 ч, и вычисляли задержка роста с медленным протоколом охлаждения.

Число трихомонад аппроксимирует к экспоненциальной функции следующим образом:

Y= П ⋅ 2NИксилижурнал10Y= войти10п + (журнал102) ⋅ N⋅ хYзнак равноN⋅2NИксилижурнал10⁡Yзнак равножурнал10⁡N+(журнал10⁡2)⋅N⋅Икс

где п есть число трихомонад в нулевой момент времени и (вход ₁₀ 2) · N является свойственное значение простейших в зависимости от распространения и является обратным временем генерации. Задержка роста с медленным протоколом охлаждения затем рассчитывается по формуле:

1N⋅ журнал10NмедленныйNгранула1N⋅журнал10⁡NмедленныйNгранула

Кроме того, проверка выживаемости проводилось как показатель моторики после оттаивания.

Статистика

Статистическая оценка криопротекторов проводили с однофакторной дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим Шеффе F тест специальной пост. Сравнение между методом гранул замораживания и медленного охлаждения протокола проводили с Стьюдента т теста. Статистическая значимость была определена как р  <0,05.

Результаты