Ифа с нейлоновыми нитями или бусами

Нити или шарики помещаются в лунки планшета и используются в качестве твердой фазы. Благодаря увеличению площади связывания иммунных реагентов повышается чувствительность ИФА, однако возникают большие неудобства при постановке анализа, в частности, при проведении процедур отмывания от не связавшихся компонентов.

Дот-ИФA

ИФА можно проводить на листах или узких полосках мембран, обладающих адсорбционной активностью, в частности, - нитроцеллюлозной с применением нерастворимого субстрата. Лучшими реагентами для тест-систем, основанных на данной модификации, служат высокоаффинные моноклональные антитела. Методика точечной реакции на нитроцеллюлозной мембране получает все более широкое распространение под названием «дот» - ИФА. При осуществлении «дот» - ИФA АГ (АТ) в очень небольшом объеме ~ 1-2 мкл адсорбируют в виде пятен на нитроцеллюлозной мембране.

В качестве диагностикума в дот-ИФА используется тот же ферментный конъюгат, что и в планшетном варианте. Однако ферментные метки имеют ряд недостатков: значительная потеря активности фермента и лиганда в процессе получения конъюгата; необходимость хранения самого фермента и препаратов на его основе при низких температурах или в консерванте; подверженность результатов анализа влиянию примесей в исследуемом образце, способных инактивировать фермент или провоцировать спонтанную реакцию; токсичность отдельных компонентов проявляющей системы.

В связи с этим все более широкое распространение в настоящее время приобретают в качестве альтернативы ферментным меткам неорганические хромогенные маркеры: металлы - платина, золото, серебро, медь, кобальт, железо, палладий и неметаллы - селен, теллур, сера, кремний, углерод и др. Преимуществом указанных меток являются простота получения коллоидных частиц, связывание золя с иммунореагентами щадящим сорбционным способом, стабильность в относительно широком диапазоне физико-химических условий, безопасность для здоровья персонала.

 

Иммунохроматография. Иммунохроматографический метод анализа, появившийся в конце 1980-х годов (ZukR.F. etcd., f978), хорошо зарекомендовал себя как экспресс-метод выявления возбудителей инфекционных заболеваний и токсинов. Небольшое время анализа (несколько минут), отсутствие промежуточных стадий подготовки образца, возможность визуальной регистрации результатов анализа, высокая специфичность метода и достаточно высокая чувствительность делают его весьма привлекательным.

На основе иммунохроматографического (ИХ) метода с использованием частиц коллоидного золота разработаны иммунохроматографические индикаторные элементы для выявления спор сибирской язвы, возбудителей чумы, туляремии, сапа, холеры, ботулинического токсина типа A и других инфекционных болезней. Создана производственная технологическая линия на базе Государственного научного центра прикладной микробиологии и биотехнологии. Прошли процесс госрегистрации в ФС Росздравнадзора РФ иммунохроматографические индикаторные тест-системы для лабораторной диагностики чумы (2), туляремии, сибирской язвы (споры). Данные наборы тест-систем выпускаются в виде хаузенг-стрипов (индивидуальная пластиковая упаковка для каждого анализа) или готовых к использованию мембранных ИХ - полосок, упакованных по 10-20 штук в пластиковую пробирку.

ИХ - простой и удобный метод определения патогенных микроорганизмов, в отличие от традиционного ИФА, не требующий проведения процедур отмывки и других манипуляций. Основная проблема практического использования ИХ-тестов связана с повышением их чувствительности. С этой целью проводятся исследования по использованию систем концентрирования образца с применением магноиммуносорбентов, иммунофильтрации, а также использованию флуоресцентных маркеров иммунных реагентов с соответствующей детекцией флуоресценции специальными индикаторами. Параллельно идут исследования по разработке детектирующего оборудования для документирования результатов и программного обеспечения ИХ-исследований.