Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Работа 7. Влияние температуры на активность амилазы
Цель: изучить влияние температуры на активность амилазы в растительном материале
Объекты, реактивы, оборудование: проросшие семена ячменя, 0,2 % крахмальный клейстер, раствор йода, разбавленный в 10 раз, пробирки, пипетки на 1 мл с делениями, пипетки на 5 мл, цилиндры на 10 мл, ступки фарфоровые, воронки, штативы для пробирок, стаканы со снегом, стаканы с водой 450С, термометры, бумажные фильтры, держатели для пробирок, спиртовки, водяные бани, кварцевый песок.
Краткие сведения Зависимость активности ферментов от температуры обычно выражается одновершинной кривой с максимум в пределах 40–600С. Эти температуры оптимальны для большинства ферментов, хотя температурный оптимум для каждого в отдельности лежит в более узком пределе. Восходящий отрезок кривой свидетельствует о том, что с увеличением температуры скорость ферментативной реакции, как и любой химической реакции, возрастает. Причиной этого является увеличение кинетической энергии молекул субстрата и фермента, а, следовательно, числа их соударений и взаимодействий. Но если для обычной химической реакции при увеличении температуры на 100С скорость возрастает примерно в 2 раза, то для ферментативных реакций не существует постоянного значения Q10, так как в данном случае эта зависимость несколько сложнее. При нагревании свыше 600С наступает постепенная денатурация пространственной структуры белковой части фермента, в связи с чем он теряет активность. Вместе с тем, имеются очень устойчивые к нагреванию ферменты, например рибонуклеазы, пероксидаза корней хрена, ферменты термофильных сине-зеленых водорослей. Обнаружение температурной зависимости активности амилазы и сахарозы основано на том, что равные количества реакционной смеси (вытяжка фермента и субстрат) выдерживаются одинаковое время при различных температурах. По характеру образованных продуктов гидролиза судят о глубине расщепления субстрата, которая находится в прямой зависимости от активности фермента.
Ход работы Приготовить вытяжку амилазы из проросших семян ячменя. Растереть в фарфоровой ступке примерно 5 г семян ячменя с небольшим количеством кварцевого песка. Насыпать в пробирку (на 1,5 см), залить 10 мл теплой воды (35–400С), смешать с 1–2 каплями глицерина, встряхнуть содержимое и настоять 30 мин. По истечении указанного времени вытяжку профильтровать через увлажненный складчатый фильтр в чистую пробирку.
Затем в 3 чистые пробирки налить по 5 мл 0,2% крахмального клейстера и первую пробирку поставить в стакан со снегом (0оС), вторую оставить при комнатной температуре (22–230C), третью поместить в водяную баню (400C) на 10 мин. Пока крахмальный клейстер приобретает температуру окружающей среды, в четвертую пробирку налить 3 мл вытяжки амилазы, прокипятить 3 мин на спиртовке (1000C), чтобы инактивировать фермент, и добавить 5 мл клейстера для получения реакционной смеси. Через 10 мин в подготовленные раннее 3 пробирки с клейстером, выдержанные при различных температурах, добавить по 3 мл вытяжки фермента и встряхнуть для получения реакционной смеси. Далее подготовить 4 пробирки и заполнить их по 5 мл слабого раствора йода. Через 5 мин после добавления фермента к крахмальному клейстеру из пробирок с реакционной смесью, находящихся при разных температурах, взять по 1,0 мл и внести в пробирки с йодом. Пробирки с реакционной смесью должны все время находиться в заданных температурных условиях. В связи с тем, что за исследуемое время полный гидролиз может не произойти, об активности фермента следует судить по окраске содержимого пробирках с раствором йода: фиолетовая __ 1 балл, красная __ 2, оранжевая __ 3, желтая __ 4 балла. Полученные данные записать по форме табл. 1
Таблица 1
Используя данные таблицы, вычертить кривую зависимости активности фермента от температуры и сделать вывод о положении ее температурного оптимума.
|
|||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-12-30; просмотров: 765; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 13.58.197.25 (0.008 с.) |