Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Структура бактериальной клетки.
Бактериальная клетка состоит из оболочки или клеточной стенки, цитоплазматической мембраны и цитоплазмы с нуклеоидом и включениями (рис. 12 – см. приложение). У отдельных видов бактерий имеются жгутики (органы движения), пили (реснички, фимбрии), капсулы, споры. Оболочка обеспечивает форму бактерии, защищает ее от неблагоприятных внешних воздействий и высокого внутреннего осмотического давления. Она имеет многослойную структуру и сложный химический состав, отличающийся у грамположительных и грамотрицательных бактерий. В состав оболочек всех бактерий входит ригидный слой (пептидогликан), в состав которого входят уникальные вещества, не обнаруженные у других видов живых существ – D (правовращающие) аминокислоты, диаминопимелиновая кислота. У грамположительных бактерий клеточная стенка содержит особые тейхоевые кислоты, она толще и содержит меньше липидов, чем у грамотрицательных бактерий. Оболочка грамотрицательных бактерий содержит полипептидные и полисахаридные слои. Снаружи клеточной стенки расположен слизистый слой, который у ряда бактерий может набухать, увеличиваясь в размерах, образуя капсулу. Капсула состоит из полисахаридов, реже – из полипептидов, обладает малым сродством к красителям, поэтому для ее выявления применяют негативные методы окраски, например, метод Гинса-Бурри. У некоторых патогенных бактерий (пневмококк, сибиреязвенная палочка) капсула образуется исключительно в организме животного или человека, тогда как у других видов бактерий (клебсиеллы) капсулообразование наблюдается при культивировании на питательных средах. Капсула защищает бактерию от действия неблагоприятных воздействий внешней среды и факторов иммунитета. Имеются непатогенные виды бактерий, которые при размножении в растворе сахара образуют капсулы, при этом растворы приобретают слизистую консистенцию. Цитоплазма бактерий может быть гомогенной, равномерно окрашивающейся, или содержать разнообразные включения органической и минеральной природы (включения волютина, фосфатов, серы, липидов и т.д.), выполняющие функции резервных веществ. Зерна волютина являются запасными питательными веществами и для некоторых видов бактерий (дифтерийная палочка) могут быть дифференциально-диагностическим признаком. Для выявления зерен волютина применяют специальный метод окраски по Нейссеру. Цитоплазма прокариотов покрыта цитоплазматической мембраной – аналогом митохондрий эукариотов, играющей жизненно важную роль в обменных (окислительно- восстановительных) реакциях у бактерий
При электронной микроскопии срезов бактериальной клетки в цитоплазме отчетливо видны нуклеоид (аналог ядра эукариотов), рибосомы и мезосомы – выпячивания внутреннего слоя цитоплазматической мембраны. Мезосомы принимают участие в делении бактерий и создании их оболочки. Величина бактерий измеряется в микрометрах. Большинство кокков имеют диаметр около 0,5—1 мкм, у палочковидных форм поперечный размер составляет 0,5— 2 мкм, а длина варьирует в широких пределах. Длинные формы (до 500 мкм) могут наблюдаться среди спирохет. Некоторые виды палочковидных бактерий в неблагоприятных условиях существования образуют споры. Спорообразующие палочковидные бактерии называют бациллами или клостридиями, а неспорообразующие - бактериями. Из патогенных бактерий спорообразующими являются сибиреязвенная палочка, возбудители столбняка, газовой гангрены, ботулизма. Спорообразование обеспечивает сохранение вида в неблагоприятных условиях. Спора по своей устойчивости к различным факторам внешней среды значительно превосходит вегетативную форму, из которой она образовалась. От вегетативной формы спора отличается меньшим содержанием воды и плотной, многослойной оболочкой, содержащей липиды, а также наличием особого вещества – дипиколината кальция, что обеспечивает высокую устойчивость спор к действию неблагоприятных факторов, в том числе, высыханию, повышенной или пониженной температуре и проч. в течение длительного промежутка времени. Процесс спорообразования заканчивается отмиранием и лизисом вегетативной формы. Попадая в благоприятные условия, спора быстро прорастает, вновь превращаясь в вегетативную форму. Спора, образующаяся внутри цитоплазмы бактериальной клетки, может иметь круглую или овальную форму, располагаясь в центре (центрально), на конце (терминально) или ближе к одному из концов (субтерминально) (рис. 13). Форма, величина и расположение споры являются характерной особенностью вида бактерий.
Сложные методы окраски Применяются для выявления некоторых структурных элементов микробной клетки, для окраски бактерий, не поддающихся окраске простыми методами, для дифференциально-диагностических целей. Наиболее часто, помимо окраски по Граму, применяются методы Циля-Нильсена, Гинса-Бурри, Нейссера, Ауески, Романовского-Гимзы. Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена. Бактерии, содержащие большое количество липидов, например, микобактерии туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), не окрашиваются простыми методами. Для их окраски применяют концентрированные спиртовые растворы красителей, содержащие протравы (фенол), проводя окрашивание при подогревании. Методика окраски: · на фиксированный мазок накладывают соответствующего формата листок фильтровальной бумаги, на которую наносят несколько капель карболового фуксина Циля; · препарат нагревают над пламенем спиртовки 2-3 раза до появления паров, наблюдая сбоку, на уровне предметного стекла; · препарату дают остыть, удаляют бумажку с фуксином, промывают мазок водой; · обесцвечивают препарат 3% соляно-кислым спиртом до прекращения отхождения красных струек, промывают водой; · докрашивают в течение 3-5 мин. раствором метиленового синего. Препарат промывают, высушивают, микроскопируют. Кислотоустойчивые туберкулезные микобактерии при микроскопии рубиново-красные, тонкие, но могут быть изогнутыми, ветвящимися, зернистыми. Другие элементы мокроты окрашиваются в синий цвет. Окраска спор по методу Ауески. В связи с многослойной структурой и особенностями химического состава споры они не окрашиваются обычными методами. Поэтому, как и при окраске по методу Циля-Нильсена, применяют концентрированный карболовый фуксин Циля. Окраска модифицированным методом Ауески выполняется по методу Циля-Нильсена, однако обесцвечивание проводится 0,5% HCl. Необходимо избегать грубой фиксации мазка над пламенем. Вегетативные клетки бактерий окрашиваются в голубой цвет, споры - в ярко-малиновый. Негативный метод Бури. Каплю культуры или другого материала (например, зубной налет для обнаружения спирохет) смешивают с каплей туши и из этой смеси делают препарат по типу мазка крови. Выявление капсул по методу Гинса у Klebsiella pneumonae. Капсула не выявляется при окрашивании обычными методами, так как входящие в ее состав слизистые вещества полисахаридной природы, окрашиваются плохо или не окрашиваются совсем. Для выявления капсул (например, у пневмококка - Streptococcus pneumoniae) можно использовать простые или сложные (по Граму, Гинсу-Бурри) методы окраски, при этом в мазке, окрашенном простыми методами, на фоне окрашенной ткани органа видны мелкие неокрашенные капсулы, внутри которых попарно (диплококки) или одиночно располагаются грамположительные ланцетовидные пневмококки. Методика окраски капсул по методу Гинса-Бурри заключается в следующем: · на предметное стекло наносят каплю жидкой натуральной туши и небольшую каплю воды, в которой эмульгируют исследуемую культуру;
· уголком шлифованного стекла обе капли перемешивают и по поверхности предметного стекла плоскостью шлифованного угла делают мазок. После подсушивания мазок осторожно фиксируют в пламени спиртовки, окрашивают в течение 1-2 мин. разбавленным 1:3 фуксином Циля, высушивают и микроскопируют. При микроскопии фон препарата темно-бурый, клетки бактерий красные. Капсулы выглядят в виде бесцветных овалов вокруг красных клеток бактерий (рис. 7). Окраска зерен волютина по методу Нейссера. Зерна волютина, являющиеся важным дифференциально-диагностическим признаком дифтерийной палочки (Corynebacterium diphtheriae) обладают метахромазией, т.е. окрашиваются некоторыми красителями иначе, чем цитоплазма клетки, и поэтому могут быть легко выявлены при применении специальных методов окраски. Методика окраски: · фиксированный мазок окрашивают в течение 2-3 мин раствором уксусно-кислого метиленового синего Нейссера, после чего промывают водой; · обрабатывают раствором Люголя в течение 20-30 сек.; · не промывая водой, препарат окрашивают раствором везувина в течение 10-15 сек.; · мазок промывают, высушивают, микроскопируют. Клетки коринебактерий окрашены везувином в золотисто-коричневый цвет, зерна волютина - в темно-коричневый, почти черный. Окраска риккетсий по методу Здородовского представляет собой модифицированный метод Циля—Нильсена. Для этого 10-15 капель карболового фуксина Циля разводят в 10 мл дистиллированной воды, препарат окрашивают 5 мин, обесцвечивают его 0,01% раствором соляной кислоты в течение 1—3 сек., промывают водой и докрашивают 1% раствором метиленового синего. Риккетсии, содержащие высокое содержание липидов, сохраняют окраску фуксином, в то время как клетки, в которых паразитируют риккетсии, обесцвечиваются кислотой, окрашиваясь в синий цвет. Окраска по методу Романовского-Гимзы. Краситель Романовского-Гимзы состоит из азура (продукта окисления метиленового синего и эозина). Краситель перед употреблением разводят нейтральной дистиллированной водой из расчета одна капля красителя на 10 мл дистиллированной воды. Краситель наносят на препарат, предварительно фиксированный жидким фиксатором (обычно смесью Никифорова), на 1 ч, после чего препарат промывают водой и высушивают. При микроскопии ядра клеток красно-фиолетового цвета, цитоплазма – голубого. Метод Романовского-Гимзы используется для окраски спирохет, простейших, риккетсий. Спирохеты, в зависимости от их химического состава (содержания нуклеопротеидов), окрашиваются в сине-фиолетовый (боррелии, лептоспиры) или розовый цвет (трепонемы).
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ 1. Выявление включений волютина у дифтерийной палочки – Corynebacterium diphtheriae(окраска по Нейссеру – рис.14, см. приложение). Микробные клетки желто-зеленого цвета, на полюсах видны включения волютина темно-синего, почти черного цвета; расположение микроорганизмов в виде пальцев растопыренной кисти, римских цифр V и X. 2. Изучение клеточной стенки у дрожжей (Saccharomyces сerevisiae - демонстрационный препарат). Окраске мазка дрожжей концентрированным раствором генциан-фиолетового красителя предшествовал плазмолиз клеток в гипертоническом растворе NaCl и протрава танином. Клеточная стенка выглядит темным двуконтурным розовато-сиреневым ободком вокруг светлой цитоплазмы (рис. 15, см. приложение). З. Бактериальный нуклеоид у сенной палочки (Bacillus subtilis - демонстрационный препарат – рис. 16, см. приложение). Окраска по Романовскому - Гимза. Зернышки хроматина полиморфные, рубиново-красного цвета; цитоплазма - лилово-синего цвета. 4. Выявление капсул у Klebsiella pneumonae. Окраска препарата по Гинсу-Бурри (рис. 17, см. приложение). Видны окрашенные в красный цвет диплококки, окруженные прозрачной зоной неокрасившейся цитоплазмы. 5. Окраска кислотоустойчивых бактерий (возбудитель туберкулеза – Mycobacterium tuberculosis). Окраска по Цилю-Нильсену (рис. 18, см. приложение). На голубоватом фоне препарата видны ядра клеток и микобактерии, окрашенные в рубиново-красный цвет. 6. Окраска спор Bacillus cereus. Окраска модифицированным методом Ауески. Выполняется окраска по методу Циля-Нильсена, однако обесцвечивание проводится 0,5% HCl. Необходимо избегать грубой фиксации мазка над пламенем. Вегетативные клетки бактерий окрашиваются в голубой цвет, споры - в ярко-малиновый (рис. 19, см. приложение).
|
||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-08-14; просмотров: 285; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.217.194.39 (0.036 с.) |