Методы создания анаэробных условий для микроорганизмов

1. физич метод, закл-ся в удалении воздуха из эксикатора с помощью насора; для предот­вращения контакта жидкой среды с воздухом на ее пов-ть наносят слой вазелин, масла

2. хим метод, основан на применении поглотителей ктслорода

3. биологич Фортнера, основан на выращи­вании анаэробов в присутствии аэробов в одной чашке Петри.

4. комбинир-й - используют физич и хим метады нередко удается ослабить или полностью нейтрал-ть вредное для бак действие кислорода, путем прибавления к пит среде восстановит (аскорбин к-та, цистеин).

Рост и размножение бактерий.

Рост -увеличение цитоплазматич массы от­дельной кл или гр бак, в рез-те синтеза кле­точного мат-ла. Достигнув опред-х размеров кл прекращает рост и нач-ет делиться. Раз­множение -увеличение числа особей микроб­ной популяции. Бак разм-ся простым попереч-ым делением в разллч-х плоскостях: новые кл расп-ся в виде грозди винограда- стафилокок­ки, цепочки- стрептококки. Деление нач-ся с образ-ем в средней части кл попереч-ой пере­городки, кот делит цитоплазму материнской кл на 2 дочерние, параллельно с этим синтез-ся кл стенка, репликация ДНК (удвоение) осущ-ся ферментами ДНК-полимеразой. Типы деления кл бак: 1.клеточное деление опережает разделение, что приводит к образ-ю многокл-х палочек и кокков. 2.синхронное кл-ое деление при кот деление нуклеоида сопров-ся образ-ем однокл-ых орг-ов. 3.деление нуклеоида опережает кл-ое деление, обусловливая образ-е многонуклео-идных бак. Способы разделения бак: Разла­мывающее - 2 индвид-ые кл перела­мываясь в месте сочленения, разрывают цито-плазм-ий мостик и отталкиваются друг от друга, формир-ся цепочки; скользящее - после деления, кл обособл-ся и одна из них скользит по поверхности другой; секущие - одна из разд-ся кл сво­бодным концом описывает дугу круга, цен­тром кот служит место ее контакта с др кл, образуя римскую пятерку (листерии). Отмирание – переход в состояние покоя

Фазы развития бакт. популяции

1. исходная (покоя) - период от момента посева бак на пит.среду до их роста. Число живых бак не увелич, а может даже уменьшиться.

2. задержка размножения- бак кл интенсивно растут, но слабо размн-ся.

3.логарифмнческая- скорость размножения кл и увелич-е бак популяций максимальны.

4. отрицательное ускорение- скорость разм-я бак сниж-ся, число делящихся особей уменьшается, а число погибших увелич-ся

5. стационарная фаза максимума - число новых бак почти равяо числу отмерших

6. фаза ускорения гибели- число погибших кл больше числа нарождающихся

7. фаза логарифмической гибели- отмирание кл происходит с постоянной скоростью

8. фаза уменьшения ск-ти отмирания- живые кл переходят в состояние покоя

Основные принципы культив-я бактерий на пит средах

Культивирование - получ-е роста бак на пит-х средах. Пит.среды по консистенции бывают: жидкие-МПБ, полужидкие- МПЖ, плотные-МПА;по происхожд-ю- животного, растит-гo и синте-тич происх-я; по назначению-обычные-(МПБ,МПЖ, МПА), дифференц-ые- для оп-ред-я видовых и родовых особ-ей (кровяной агар, среда Гисса, эндо), эллективные- для роста опред-х видов бак и подавляют рост др-х (яичные среды), среды обогащения- накопи­тельные, в кот подавл-ся рост сопутствующих бак, специал-е- для выращ бак не размно­жающихся на универс-х средах (МППБ, сыво­роточный агар). Среда д.б стериль-нойц, оптимальная р-я среды (рН), налич. необход. пит.в-в.

На плотных_пи т. средах микробы обр-ют различные по форме и вели­чине колонии, кот пред-ют собой скопление особей одного вида в рез-те размн-я.

У куль­тур выращенных на жидких пит средах обращ-т внимание на поверх-ный рост, помутнение, осадок, цвет, запах.

 

 

Генетика м-о и изменчивость основных признаков м-о

Генетика - наука о наслед-ти и изменч-тн орг-ов, цель- изучение я анализ зак-ов передачи насле-х признаков от поколения поколе­нию. Наследственность св-во живых орг-ов воспроизводить одни и теже морфологич-ие св-ва в ряду поколений, благодаря передачи генов от родителей к потомкам. Учение было основано Дарвином о наслед-ти и изменчиво­сти, Менделем были открыты законы генети­ки. Изменение морф. признаков под влияни­ем выше перечисл-х факторов, у многих микробов набл-ся измен-е форм и величины бак (при добавлении тетретомецина к пит. ср сальмонеллы удлиняются) К ультуральные изменения: одна из форм изменчивости дис­социация- разъединение и образ-е R,S форм. R-шереховатые с неровными краями, S-гладкие колонии, М- слизистые, О-переходная форма. В основе диссоциации лежат мута-ции.

Изменение фермент-ных (биохим св-в): бак каждого вида имеют опред-ый набор ферментов, благодаря кот усваив-ся различ пит-ые в-ва. Эти ферменты вырабатываются на опред-х пит субстратах и предопределе­ны генотипом. Обычно функц-ют не все гены, ответст-ые за синтез соответ-щих ферментов, всегда им-ся запасные гены, опред-ие выра­ботку адаптивных фермнтов. Адаптивные ферменты позволяют микробам присп-ся к опред-ым условиям существоваеия. Изменчивость биологич св-в. Пастер в 1880 показал, что патогенная культура возб-ля холеры кур после длит-ого выдерж-я в усло­виях термостата потеряла патог-ые св-ва, но сохранила иммуногенные св-ва, что было использовано с целью прфилактич-ой вакци­нации. В 1881 Пастер провел успешную вак­цинацию против сиб.язвы КРС, путем выращ-ия возб-ля при темп-ре 42,5 в теч 12-24 суток, что привело к сниж-ю его патогенности. В 1885 Пастер путем 133 послед-х интроце ребр-х заражений кроликов изменил св-ва возб-ля бешенства, вирус оказ-ся авирулент-ным при подкожном введении и предупреж­дал развитие заб-я у людей. Фенотипическая изменчивость, проявление наследуемых морф, признаков и физ-их процессов у индивидуумов - фенотип. Фен-ие различия м/у м-о, одинаковыми по генотипу наз-ся модификациями. Модиф-ции сущ-ют до тех пор, пока действ-ют вызвавший их специфический фактор окр-щей среды; они не передаются потомкам и не наследуются ими. Это адаптивная р-ция на внешние раздражители. Роль фенотипических изменений сводится к обесп-ию выживаемо­сти микробных популяции в изминившихся условий среды. Фенот-ие изменения выраж-ся в изменениях формы и размера бактерий, биохимической акт-ти.

Формы изменчивости м-о

У бак различают фенотипич и генетич изм-ия. Проявление наследуемых морф. признаков и физ процессов у индивидуумов - феногип. Роль фенотип. изменений сво­дится к обесп. выживаемости микроб. популяций в изменившихся условиях среды. Фен. изменения выраж-ся в изменениях формы и размера бактерий, биохимической акт-ти. Различия между микробами одинако­вых по генотипу- модификации (фенотипиче ская адаптация). Генотипическая изменч-ть: изменениям подвержен так же и генотип, эта изменчивость играет большую роль в эволю­ции организмов, если бы кл не обладали способ-ю к изменению генотипа, то любое неблагоприятное возд-е среды приводило к вымиранию вида. В основе наслед-ой измен-ти лежат мутации или рекомбинации, кот проис-ят в стр-ре ДНК. Мутация- внезапное скачкообразное изм-ие наслед-х св-в. Основу сост-ют колич или колич-ые изм-ия нуклеоти дов в ДНК, кот могут возникать под дей-ем эндоген. и химич факторов. Мутанты- бак с измен-ми признаками. Спонтанные мутации возникают под воздей-ем неизв-ых причин; индуцированные (направленные)- в рез-те обработки микробовв спец-ми мутагенами (хим.в-ва, темпер, УФ). Мутации прояв-ся: 1. изм-ие морф св-в, 2.возникновение устойч к лекарст препаратам, 3.ослабление патог св-в, 4.потеря сп-ти синтез амино к-ты Генетич рекомбинации: известно 3 способа передачи генетич инф-ии от донорской кл с одним генотипом реципиенту с др-им геноти пом. В рез-те генетич обмена между бак обр-ся рекомбиианты т.е бак обладающие св-ом обоих родителей, в основном сохр генотип бак реципиента, приобретая отд-ые св-ва бак донора; это связано с тем, что рекомбинант несет хромосому реципиента, в кот включает ся только отд-ые фрагменты ДНК донора. Способы: 1) трансформация (преобразование перестройка)- изм-ие генома бак реципиента в рез-те поглащенного из среды свободного фрагмента ДНК донора. а)адсорбция- ДНК на поверхность микробной кл, б) проникновение ДНК в кл реципиента, в) спаривание вне-дрившейся ДНК с хромосомными стр-ми кл, г) включение уч-ка ДНК кл донора в хромосом ные стр-ры реципиента, д) дальнейшие изм-ия нуклеотида в ходе послед-х делений 2) транедукция -передача ДНК от кл донора кл реципиенту при участии бактериофагов. Размн-сь в бак кл, фаги включают в состав своей ДНК часть бак ДНК и передают ее после проникновения кл реципиенту. Типы: 1) общая, 2) специфич, 3) абортивная. 3) конъюгация (спаривание) - передача генетич мат-ла кл донора кл реципиенту при непосред-ом контакте. В рез-те каждого процесса происходит пере-нос фрагмента ДНК одной кл к др.