Микробиологическая диагностика коклюша и паракоклюша

Методы, применяемые для лабораторной диагностики коклюша, представлены в схеме 14.

 

Схема 14. Микробиологическая диагностика коклюша

 

	Генодиагностика - ПЦР для обнаружения специфических фрагментов ДНК возбудителя коклюша.

Микроскопический метод для диагностики коклюша и паракоклюша не применяется. В качестве экспресс-метода можно использовать ИФМ.

Бактериологический метод является основным в лабораторной диагностике коклюша и паракоклюша. Материал для исследования берут с помощью стерильного носоглоточного ватного тампона, у маленьких детей – тампоном на тонкой эластичной проволоке, а также методом «кашлевых пластинок» (в момент приступа кашля открытую чашку Петри с питательной средой подносят ко рту ребенка и держат в течение 6-8 кашлевых толчков). Для посева чаще всего используют казеиново-угольный агар (КУА), а также кровяной или картофельно-глицериновый кровяной агар (среда Борде-Жангу), содержащие пенициллин для подавления роста сопутствующей микрофлоры. Бордетеллы вырастают при температуре 37⁰ С через 48-72 часа в виде мелких (около 1 мм в диаметре), выпуклых, блестящих колоний, напоминая капельки ртути (рис. 17). Из колоний готовят мазки и окрашивают их по Граму. При наличии в препаратах мелких овоидных грамотрицательных палочек ставят реакцию агглютинации с коклюшной и паракоклюшной сыворотками и делают пересев для выделения чистой культуры. Чистую культуру идентифицируют на основании изучения комплекса биологических свойств (табл. 17). Bordetella pertussis не растет на простых питательных средах, не меняет цвета специальных сред. Серотипирование проводится с помощью РА на стекле с адсорбированным факторными сыворотками. Фактор (антиген) 7 является родовым, общим для всех бордетелл, фактор 1 специфичен для Bordetella pertussis, фактор 14 – для Bordetella parapertussis фактор 12 – для Bordetella bronchiseptica.

 

 

Рис. 17. Колонии Bordetella pertussis на КУА (выпуклые, блестящие в виде капелек ртути)

 

Таблица 17. Биологические свойства некоторых представителей рода Bordetella

Свойства	B. pertussis	B. parapertussis	B. bronchiseptica
Рост на МПА	-	+ (коричневая окраска)	+
Рост на МПА с тирозином	-	+ (коричневая окраска)	+
Подвижность	-	-	+
Цвет на кровяном МПА	-	Буро-коричневый	-
Цвет на КУА	-	Потемнение	-
Уреаза	-	+	+
Оксидаза	+	-	+
Утилизация цитрата	-	-	+
Родовой антиген
Видовой антиген

 

Обозначения: (+)- наличие признака, (-) – отсутствие признака.

Серодиагностика. Применяется РА и РСК (как правило, с парными сыворотками больных для констатации нарастания титра антител) с целью ретроспективного подтверждения диагноза и диагностики атипичных форм коклюша. Диагностический титр 1:20.

Генодиагностика. Разработана ПЦР для обнаружения ДНК возбудителя коклюша.

Самостоятельная работа студентов

1. Изучить морфологические и тинкториальные свойства возбудителя коклюша (Bordetella pertussis) в демонстра­ционных препаратах из чистой культуры

2. Бактериологический метод. Изучить культуральные свойства возбудителя коклюша культи­вируются на казеиново-угольном агаре КУА или на среде Борде-Жангу (картофельно-глицериновый МПА с кровью) - демонстрация. Колонии Bordetella pertussis мелкие, выпуклые, блестящие в виде капелек ртути. При микроскопии обнаруживают мелкие овоидные грамотрицательные палочки. Изучение ферментативных и антигенных свойств палочки коклюша (демонстрация в соответствии с табл. 17).

3. Серологический метод. Учесть демонстрационные РА и РСК, поставленные с парными сыворотками крови детей (10 и 21 дни болезни) с диагнозом «подозрение на коклюш». Диагностический титр 1:20

4. Биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения коклюша:

· АКДС-вакцина (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина) содержит взвесь убитых коклюшных бактерий, дифтерийный и столбнячный анатоксины, адсорбированные на гидроокиси алюминия. Применяется для активнойиммунизации детей против перечисленных инфекций;

· Тетракокк – комбинированная вакцина для профилактики дифтерии, коклюша, столбняка и полиомиелита производства фирмы Пастер Мерье Коннот (Франция).

· агглютинирующие сыворотки - для серологической идентификации коклюшных бактерий;

· иммуноглобулин донорский. Получен из венозной крови человека, содержит антитела против ряда патогенных микроорганизмов (включая бордетеллы), применяется для профилактики и лечения коклюша, создает пассивный иммунитет;

· агглютинирующие адсорбированные факторные сыворотки. Диагностические сыворотки, подвергнутые адсорбции родственными микробами с целью удаления групповых антител. Применяются для постановки РА при антигенной идентификации бордетелл.

Педиатрические аспекты темы

1. Коклюш - заболевание детского возраста. Бактериологичес­кая диагностика коклюша в ранний период заболевания основана на выделении чистой культуры возбудителя и ее идентификации. Для забора материала у детей используется метод кашлевых плас­тинок и применяются носоглоточные тампоны (у грудных детей). Серологическая диагностика коклюша, проводимая на 3 - 4 неде­лях заболевания (РСК) имеет эпидемиологическое значение. В настоящее время увеличился удельный вес заболеваний, вызванных Bordetella parapertussis, что обусловливает необходимость разграничения между этими микроорганизмами.

2. Пневмококки у детей могут вызвать сепсис, менингит. Дети первого года жизни не болеют крупозной пневмонией. Трудности при диагностике пневмонии у детей раннего возраста связаны с отсутствием спонтанного отделения мокроты.