Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Занятие 2 («хроматографическое разделение аминокислот. Высаливание белков. Количественное определение белков»)
Цель занятия: 1) ознакомиться с физико-химическими свойствами белков (молекулярная масса, растворимость, электролитические свойства, денатурация, амфотерность), с видами связи аминокислот в белковой молекуле, со строением полипептидной цепи, её пространственной структурой и химическими связями, поддерживающими пространственную конфигурацию, с классификацией белков, с важнейшими представителями простых белков; 2) выполнить лабораторную работу по осаждению белков высаливанием, определить количество белка в исследуемой жидкости; 3) познакомиться с простейшим приёмом хроматографического разделения аминокислот. Студент должен знать следующее: 1. Почему для определения молекулярной массы /ММ/ белков неприемлемы эбулиоскопический и криоскопический методы. 2. Принципы осмометрического и диффузионного методов, принцип метода ультрацентрифугирования. 3. Принцип и технические приёмы гель-фильтрации. 4. Чем обусловлена растворимость белка в воде, какие факторы или воздействия её изменяют, содержание термина «высаливание», в каких целях используется высаливание. 5. Понятия «нативный» и «денатурированный» белок, виды денатурирующих воздействий; изменения, происходящие при денатурации, а также разницу между коагуляцией (осаждением) и денатурацией. 6. От чего зависит заряд белковой молекулы, значение понятий «изоэлектрическая точка» и «изоэлектрическое состояние». 7. Принцип разделения аминокислот хроматографическими методами. 8. Принципы классификации соединений белковой природы в зависимости от состава (наличие или отсутствия компонентов, не являющихся аминокислотами). 9. Классификацию простых белков (протеинов), в частности, простых белков животного организма Студент должен уметь: 1. Различать по данным о качественном составе белковой молекулы простые и сложные белки. 2. Различать на основании данных об аминокислотном составе и о молекулярной массе /ММ/ протеины и полипептиды. 3. Рассчитать ММ простого белка по его аминокислотному составу. 4. Ориентировочно (на уровне «растворим» или «плохо растворим») прогнозировать растворимость белка в воде по данным об его аминокислотном составе. Студент должен получить представление: 1. О принципах определения молекулярной массы белков методом гель-фильтрации и ультрацентрифугирования,
2. Об использовании в медицинской практике свойства белков осаждаться тяжелыми металлами, 3. О том, как используют данные об электрофоретической подвижности белков в диагностических целях, 4. О значении данных об аминокислотном составе пищевых белков как критерия полноценности рационов питания. Сведения из базовых дисциплин, необходимые для изучения т емы: 1) расчет ММ по структурной формуле соединения, 2) сведения о «гидратной» воде, 3) сведения об осмотическом давлении, его связи с ионным составом и концентрацией ионов, 4) сведения о реакциях гидролиза, 5) понятие о началах термодинамики, 6) сведения о принципе и технике колориметрии и нефелометрии. Аудиторная работа Лабораторная работа (Х роматографическое разделение аминокислот - демонстрация прибора и хроматограммы. Высаливание белков, их количественное определение )
1. Высаливание белков сыворотки крови сульфатом аммония может использоваться для разделения альбуминов и глобулинов, так как глобулины осаждаются при 50%-ном насыщении сульфатом аммония, а альбумины - при 100%-ном насыщении. Ход работы. В пробирку внести 2 мл сыворотки крови и прибавить столько же насыщенного раствора сульфата аммония. Образующийся осадок отфильтровать - на фильтре при этом останутся глобулины. К фильтрату добавить сухого тонко измельченного порошка сульфата аммония до насыщения. Образующийся при этом осадок, представленный альбуминами, отделить фильтрованием. Высаливание сульфатом аммония обратимо. В этом можно убедиться, поместив фильтры с осадком белка в воду - происходит растворение осадка. 2. Количественное определение белка в моче основано на реакции осаждения белка сульфосалициловой кислотой и определении мутности осадка (нефелометрическое определение). Ход работы: А. Опытная проба - 1) в центрифужную пробирку внести 1.25 мл фильтрата мочи и добавить до 5 мл раствора сульфосалициловой кислоты; 2) экспонировать 5 мин; 3) внести пробу после экспозиции в кювету (10 мм) фотоэлектроколориметра и определить (против воды) плотность образовавшейся мути, используя оранжевый фильтр.
Б. Контрольная проба: внести в центрифужную пробирку вместо сульфосалициловой кислоты 1,25 мл дистиллированной воды и далее воспроизвести пункты 2- и 3 основного опыта. Найти разницу между оптической плотностью опытной и контрольной проб и учесть результат по калибровочному графику. Представленный график (см. следующую страницу) построен по результатам определения оптической плотности растворов альбумина с известной концентрацией при добавлении к ним сульфосалициловой кислоты: на оси абсцисс отложены значения концентраций белка (в %), на оси ординат – значения оптической плотности (единица измерений - экстинкции).
0.4
0.20
0.12
0.04
0.1 0.25 0.50 1.0 С, %
|
||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-04-21; просмотров: 309; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.142.97.235 (0.007 с.) |