Б. Рассчитайте удельную активность фермента, дайте ее определение.

В. Как и почему изменится активность фермента, если:

а) рН инкубационной смеси 5,0;

б) снизить концентрацию НАД.

в) опишите функции и структуру НАД.

А. ЛДГ катализирует обратимую реакцию:           

1)пируват + НАДН₂                      лактат + НАД

В результате одиннадцатой реакции происходит восстановление

пировиноградной кислоты и образуется молочная кислота. Реакция проте-

кает при участии фермента лактатдегидрогеназы и кофермента НАДН,

образовавшегося в шестой реакции:

2)пируват → лактат - заключительная реакция анаэробного гликолиза,

3)лактат → пируват – реакция глюконеогенеза

 

Протекание прямой реакции превращения пирувата в лактат обеспечивает М субъединица ЛДГ, протекание обратной реакции – Н субъединица

 

Б. Еуд = 20/(30*5)  = 0,13 мкмоль Р(лактат) ∙ мин^-1 ∙ мг^-1.

 

Удельная активность фермента – число единиц ферментативной активности в расчете на 1 мг белка (фермента). Удельная активность является количественной характеристикой чистоты ферментного препарата. Чем меньше посторонних белков, тем выше удельная активность.

В. а) снизится, происходит изменение конформации фермента, его активного центра в результате изменения ионизации функциональных групп.

При изменении рН от оптимальных значений происходит изменение ионизации функциональных групп молекулы белка. Это приводит к коформаци молекулы фермента и конформации активного центра; следовательно, нарушается присоединение субстрата, кофакторов и коферментов к активному центру.

б) снизится, т.к. НАД - кофермент обратной реакции, следовательно, понизится скорость только этой реакции.

в) кофермент НАД (никотинамидадениндинуклеотид) – производное витамина РР (В₅) – никотинамида. Структура НАД включает пиридиновое кольцо, амидную группу, рибозу, Н₃РО₄ и АМФ. Функция НАД заключается в том, что он входит в состав ферментов (дегидрогеназ или редуктаз), участвующих в окислительно-восстановительных реакциях. Синтез и окисление карбоновых кислот, аминокислот (глутамат), жиров (холестерол,

жирные кислоты) и углеводов, так как НАД и служат коферментами большинства дегидрогеназ. НАД является субстратом поли-АДФ-рибозилирования в процессе сшивки хромосомных разрывов и репарации ДНК, что замедляет некробиоз и апоптоз клеток. Способность НАД+ и играть роль промежуточного переносчика водорода связана с наличием в их структуре амида никотиновой кислоты. При взаимодействии этих кофакторов с атомами водорода имеет место обратимое гидрирование (присоединение атомов водорода). При этом в молекулу НАД+  включаются 2 электрона и один протон, а второй протон остается в среде.

34

 Одно из самых сильных отравляющих веществ зарин, является фторорганическим соединением, его действие аналогично действию ДФФ

(диизопропилфторфосфата).