Ферментативные свойства бактерий

 

Для определения сахаролитических свойств из углеводов обычно используют лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу, маннит. Результат реакции определяется при помощи добавляемых в питательную среду различных индикаторов, дающих цветные реакции. Поэтому метод посева на дифференциально-диагностические среды получил название посева на пестрый ряд. Иногда, в так называемый длинный пестрый ряд, добавляют арабинозу, ксилозу, галактозу, инулин, крахмал и др.

При разложении углеводов происходит образование органических кислот (молочной, уксусной, муравьиной) и газа (СО₂ и Н₂). Кислоты вызывают изменение рН среды, что приводит к из­менению ее цвета в результате реакции индикатора. Образую­щийся газ вытесняет жидкость в верхней части поплавка (при ис­пользовании жидкого пестрого ряда) или вызывает разрыв агара (при применении полужидких сахаров).

Среды для определения сахаролитических свойств

 

Среды Гисса состоят из пептонной воды, 1% углевода и ин­дикатора Андреде (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью). В среду опускается поплавок, который при стерилизации запол­няется средой. При сбраживании сахара бактериями, цвет среды меняется на красный, а газ скапливается в поплавке.

Полужидкие сахара состоят из 0,7% мясопептонного агара, 1% сахара и индикатора рН (водно-голубая краска и розоловая кислота). Посев производится уколом. При ферментации сахара цвет среды становится голубым, при наличии газообразования по ходу посева видны пузырьки газа, сам агар разрывается. В ла­бораторной практике широко применяются и другие дифферен­циально-диагностические среды, в состав которых входят сахара.

Протеолитические свойства бактерий (расщепление белков) определяются обнаружением конечных продуктов ферментации белков (индола, сероводорода, аммиака) и по способности раз­жижать желатину (мясопептонный бульон с 10-15% желатин).

Разжижать желатину способны микробы, выделяющие фер­мент типа коллагеназы. Процесс разжижения идет сверху, при­чем различные виды микробов дают характерную для них фор­му, потому это свойство также используется в целях идентифи­кации бактерий.

Определение ферментации белков по конечным продуктам распада проводится при посеве на мясопептонный бульон или пептонную воду.

Таким образом, завершая работу по выделению чистой культуры, мы имеем данные о морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойствах выделенных культур бактерий. Это дает основание приступить к видовой идентификации – основной задаче последнего этапа бактерио­логического исследования. Для этого используют определитель Берги. Это справочное издание, каталог бактерий. В нем все микроорганизмы сгруппированы по основным биологическим свойствам. Сопо­ставляя свойства выделенных культур с приведенными в опреде­лителе, устанавливают их принадлежность к группе, семейству, ро­ду и, наконец, виду.

По морфологии, типу дыхания, тинкториальным свойствам, способности к спорообразованию находят таксономическую группу для идентифицируемой культуры. По полным морфологическим, тинкториальным свойствам, типу дыхания, спорообразованию, культуральным свойствам и неко­торым биохимическим признакам находят семейство, по методо­логическим особенностям (наличие капсул, жгутиков и т.д.), культуральным и биохимическим признакам определяют род, а внут­ри рода по биохимическим и антигенным свойствам устанавли­вают вид.

C амостоятельная работа студента

На практическом занятии

Последовательность действий (этапы)	Способы действия (ориентиры)
I. Изучение фермента-­ тивных свойств мик­робов (окончание)	Изучить посевы на средах «пестрого ря­да», среде Ресселя, пробирке с МПБ (образование индола и сероводорода). Сравнить результаты с данными табл. «Биохимические свойства бактерий» и сделать предварительный вывод о виде выделенной культуры.
П. Выделение чистой культуры анаэробов (III этап)	Изучить характер роста культуры на среде Китта-Тароцци. Приготовить мазок, окрасить по Граму, микроскопировать. Определить отношение к окраске по Граму, и к какому семейству относится выделенная культура.

Контрольные вопросы

 

1. Питание бактерий: аутотрофы и гетеротрофы.

2. Классификация питательных сред.

3. Условия культивирования микробов.

4. Требования, предъявляемые к питательным средам.

5. Химический состав микробов.

6. Понятие о чистой культуре и колониях.

7. Методы выделения чистых культур аэробных микробов.

8. Этапы выделения чистой культуры аэробных бактерий.

9. Культуральные свойства бактерий.

10. Биологическое окисление у аэробных и анаэробных бактерий.

11. Методы культивирования анаэробов.

12. Методы выделения чистых культур анаэробов.

13. Значение ферментов в идентификации бактерий.

 

Т ема:    «Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы. Действие физических и химических факторов. Стерилизация и дезинфекция»

Цель:   

          – научиться методам стерилизации лабораторной по­суды и 

             питательных сред.

 

Задачи:

         – уметь правильно подобрать соответствующий метод стерилизации

            различных объектов (среда, посуда, инструменты и т.д.);

         – освоить основные группы дезинфицирующих ве­ществ и механизм

            их действия на бактерии.

Во внешней среде на микробы действуют физические, хими­ческие и биологические факторы, которые или угнетают, или стимулирует их жизнедеятельность.

К физическим факторам относятся: высокая и низкая темпе­ратура, высушивание, лучистая энергия, ультразвук, высокое давление.

Температура. Физиологическая деятельность любого микроорганизма приспособлена к определенному температурному оптимуму. По отношению к температуре все микроорганизмы делятся на психрофилы (от 0 до +10°С), мезофилы (от +20°С до +40°С) и термофилы (+50°С – +70°С). Большинство патогенных микроорганизмов относится к мезофилам.

Большинство микроорганизмов устойчивы к низким температурам (исключение составляют гонококки и менингококки). Высокая температура (+50°С – +60°С) губительно действует на вегетативные формы бактерий. Споры выдерживают кипячение до 2 часов. Губительное действие высокой температуры и лежит в основе методов стерилизации.