Приготовление раствора метиленового синего

5мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего прибавляют к 195мл дистиллированной воды. Смесь хорошо перемешивают. Срок хранения полученного раствора не более 7 суток.

Метод широко используется ввиду простого выполнения и быстрого по­
лучения результатов.

Редуктазная проба с резазурином

В стерильные пробирки вносят по 1мл рабочего раствора резазурина и по
10мл исследуемого молока, закрывают корковыми пробками, смешивают путем
трехкратного переворачивания пробирок. Пробирки помещают в водяную баню
с температурой воды 38°С и защищают от действия прямых солнечных лучей.
Время погружения пробирок в водяную баню считают началом анализа. Показания снимают через 20 минут и через 1 час, не встряхивая и не переворачивая пробирки. Через 20 минут пробирки с обесцвеченным молоком удаляют из во­дяной бани. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхива­нии не учитывается. Оставшиеся пробирки однократно переворачивают и ос­тавляют в бане до конца анализа. В зависимости от времени обесцвечивания и изменения окраски молоко относят к одному из четырех классов:

Класс	Качество молока	Продолжительность изменения цвета	Цвет молока	Количество бактерий в 1 мл молока
1	Хорошее	Через 1 ч	Сине-стальной	Менее 500 тыс.
2	Удовлетвори-тельное	Через 1 ч	Сиреневый или сине-фиолетовый	От 500 тыс. до 4 млн.
3	Плохое	Через 1 ч	Розовый или белый	От 4 млн. до 20 млн.
4	Очень плохое	До 20 мин	Белый	Свыше 20 млн.

Определение антибиотиков в молоке

Антибиотики (пенициллин, тетрациклин, стрептомицин и др.) попадают в молоко при лечении мастита у коров. Они нарушают молочнокислое брожение. Для установления наличия антибиотиков и моющих или дезинфицирующих средств в молоке используют прямые и косвенные методы.

Метод прямого микроскопирования. Метод основан на подавлении раз­множения бактерий и изменении их формы под действием антибиотиков.

В пробирку отбирают 10мл исследуемого молока, закрывают корковой пробкой и помещают в водяную баню при температуре 8О-85°С на 5 минут. Затем быстро охлаждают до 40°С. В контрольную пробирку отбирают 10мл молока, которое заведомо не содержит антибиотиков. В обе пробирки добавляют по 3-4 капли свежей культуры, чувствительной к антибиотикам, термофильного стрепто­кокка, выращенного на гидролизованном или обезжиренном молоке. Тщательно встряхнув закрытые пробками пробирки помещают в водяную баню при температуре 40°С на 90 минут. Затем микроскопируют окрашенные препараты с иммерсионным объективом. На присутствие антибиотиков указывает резкое уменьшение количества клеток в испытуемом молоке по сравнению с контро­лем, наличие утолщенных форм клеток и их скопление.

Метод восстановления индикаторов

а) Использование метиленового синего.

В пробирки с исследуемым и контрольным молоком вносят по 1мл рас­твора метиленового синего и затем 3-4 капли свежей культуры чувствительного к антибиотикам термофильного стрептококка. Встряхнув, пробирки ставят в водяную баню при температуре 38-40°С на 5,5 часов. Следят за изменением цвета в исследуемом образце по сравнению с контролем, который должен вос­станавливаться. Наличие синего цвета в исследуемом молоке указывает на присутствие антибиотиков.

б) Использование резазурина.

В пробирки с исследуемым и контрольным молоком вносят по 1мл рас­твора резазурина; 3-4 капли чувствительного к антибиотикам термофильного стрептококка, перемешивают и ставят в водяную баню на 45 минут. Отмечают изменение цвета исследуемого образца по сравнению с контролем. Фиолетово розовый или сине-стальной цвет молока указывает на присутствие антибиоти­ков.

Вопросы для самопроверки

1 Источники попадания микрофлоры в молоко.

2 Значение микробиологического контроля в молочной промышленности.

3 Отбор молока для бактериологического исследования.

4 Методы определения общего количества микроорганизмов.

5 Метод определения эффективности пастеризации.

6 Определение молочнокислых бактерий в молоке.

7 Определение дрожжей и плесневых грибов в молочных продуктах.

8 Показатели для определения категории молока.

9 Какие молоко и сливки называют питьевыми?
10 С какой целью охлаждают молоко?
11 Что такое пастеризация и стерилизация? Чем они отличаются?
12 Какие микроорганизмы выдерживают режимы пастеризации

21.04.2020 г.                                                                               Занятие 50