Методы лабораторной диагностики гельминтозов, их биологическое обоснование и классификация. Понятие о биологическом (инвазионном) материале, виды биологического материала.

Учитывая наличие сходных симптомов у различных заболеваний, невозможно поставить правильный окончательный диагноз без лабораторно-клинических исследований.

Выбор материала для гельминтологического исследования и метода исследования зависит от:

 

Особенностей ЖЦ предполагаемого паразита и стадии его развития в организме человека

Локализация паразита в организме человека

Характера био материала, в котором могут быть обнаружены расселительные стадии паразита или косвенные доказательства его присутствия.

 

Материалом для исследования могут служить выделения из организма – продукты жизнедеятельности человека, вместе с которыми выделяются расселительные стадии паразита (фекалии, моча, мокрота), а также ткани (кровь, мышцы, кожа), и секреты (желчь, поджелудочный сок).

 

Методы гельминтологического исследования делятся на прямые, основанные на обнаружении расселительных стадий в био материале (материале исследования) и косвенные, основанные на обнаружении в сыворотке крови антител к паразиту, что является косвенным доказательством его присутствия у данного человека. Для обнаружения антител в сыворотке применяются различные иммунологические (чаще серологические) методы: РНГА, ИФР, РЛА и др.

Прямые методы классифицируют:

В зависимости от характера исследуемого материала (копровоскопические, исследования выделений из органов – секретов, исследования тканей, специальные методы (исследования соскобов));

В зависимости от способа исследования – на микроскопические и макроскопические (визуальное исследование материала);

В зависимости от целевого назначения – на качественные, позволяющие определить наличие паразита, его видовую принадлежность, экстенсивность инвазии в очагах, и количественные, позволяющие определить интенсивность инвазии

 

КОПРОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ (МЕТОДЫ ФЛОТАЦИИ)

 

Качественные методы

Метод Фюллеборна. Позволяет выявить экстенсивность инвазии (% инвазированных в обследуемом контингенте) или подтвердить отсутствие (наличие) инвазии у обследуемого человека.

Фекалии суспензируют во флотационном растворе хлорида натрия, имеющим большой удельный вес (1.18), чем яйца гельминтов. Навеску фекалий помещают в раствор, растирают стеклянной палочкой. Крупные частицы убирают. Раствор доливают до образования выпуклого мениска и покрывают предметным стеклом. Оставляют на 45 мин, после чего стекло снимают и просматривают под микроскопом пленку и осадок.

 

Метод Като (метод толстого мазка под целлофаном). Отличается значительной простотой постановки и высокой эффективностью выявления большинства инвазий.

Навеску фекалий величиной с рисовое зерно помещают на предметное стекло и накрывают целлофаном, выдержанном в растворе Като (смесь глицерина, фенола и малахитовой зелени). Резиновой пробкой навеску растирают до получения толстого мазка. Выдерживают приготовленный препарат 20-25 мин (для просветления) и микроскопируют.

Количественные методы

Метод Столла. Позволяет выявить интенсивность инвазии (количество паразитов у одного человека), что имеет значение при проведении дегельминтизации или контроля за ее эффектитвностью.

В колбу со стеклянными бусами и двумя нанесенными делениями – 56 и 60мл – наливают до первой отметки 0,1% NaOH раствор. Затем добавляют фекалий, пока уровень жидкости не достигнет отметки 60. Взвесь взбалтывают и набирают пипеткой 0,075 мл (в этом объеме содержится 0,005г фекалий). Пробу переносят на предметное стекло, накрывают покровным (лучше с нанесенной сеткой) стеклом и подсчитывают под микроскопом количество яиц. Умножив полученное число на 200, получают количество яиц, содержащихся в 1г фекалий.

 

СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ

Методы исследования перианально-ректальных соскобов

Методы перианально-ректальных соскобов применяются для лабораторной диагностики таких инвазий, как энтеробиоз и тениаринхоз, возбудители которых откладывают яйца на поверхности кожных покровов, в области перианальных складок.

Метод тампона. Спичкой со смоченным в 50% глицерине ватным тампоном соскабливают содержимое складок и помещают в пенициллиновый флакон. В лаборатории мазок переносят на предметное стекло и микроскопируют.

Метод липкой ленты по Грехему. Кусочек липкой ленты длиной 4 см приклеивают липкой поверхностью к перианальным складкам, после чего снимают и приклеивают к предметному стеклу. Препарат микроскопируют.

 

ИССЛЕДОВАНИЯ ТКАНЕЙ И ВЫДЕЛЕНИЙ ИЗ ОРГАНОВ

Метод исследования мышц на трихинеллез.

Материалом исследования на трихинеллез являются мышцы больного или остатки мяса, послужившие причиной заражения человека. Взятие материала на исследование (биопсия) производится хирургом. В лаборатории мышцу разделяют на очень мелкие кусочки и помещают между двумя стеклами в специальный компрессорий. Под микроскопом видны спирально свернутые личинки, находящиеся в лимонообразных или округлых капсулах между мышечными волокнами.

Обнаружение яиц и личинок в дуоденальном содержимом, мокроте, моче и крови

В дуоденальном содержимом могут быть обнаружены яйца фасциолы, описторхиса, клонорхиса, анкилостомид и других гельминтов, паразитирующих в протоках печени и поджелудочной железы, в 12типерстной кишке и желчном пузыре.

Из доставленной порции дуоденального содержимого и желчи выбирают хлопья, которые просматривают под микроскопом. Оставшуюся жидкость смешивают с раным объемом серного эфира, тщательно взбалтывают и центрифугируют. Яйца гельминтов или личинки стронгилоидоса переходят в осадок, из которого готовят препараты на предметных столиках.

В мокроте могут быть обнаружены яйца шистозом, парагонимуса, мигрирующие личинки аскарид и других нематод.

Всю порцию мокроты сначала просматривают с помощью лупы, выбирая инструментом подозрительные частицы, а затем готовят мазки на предметных столах и микроскопируют их.

В моче обнаруживают яйца и личинки паразитов мочеполовых органов, а также яйца гельминтов, попавшие сюда с промежности.

Мочу отстаивают в течение не менее 30 мин, затем сливают верхний слой, оставляя 10-15 мл осадка. Эту часть мочи переносят в пробирки, а осадок микроскопируют.

В крови больных гельминтозами могут быть обнаружены микрофилярии. Готовят обычные мазки или толстую каплю Просмотр их делать лучше после окраски по Романовскому. При определении видовой принадлежности личинок учитывают их размеры,