Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Выделение днк из периферической крови
Кровь собирали в пластиковые пробирки с антикоагулянтом 0,1 М раствора EDTA-К3 (pH 7,3) в соотношении кровь/антикоагулянт 1/100. Забор крови проводили также в виварии КГМУ. В латеральную хвостовую вену или в вентральную/дорсальную артерию устанавливались иглы шприца, для забора крови. Для улучшения кровообращения и быстрому выделения образцов крови хвост прогревался в теплой воде. Образцы крови выделялись для определения изменения длины тeлoмер, и для анализирования уровня гормонов стресса (кортизола, адреналина), а также ЛДГ, пролактина, глюкозы и тестостерона. Выделение ДНК производили при помощи набора компании Синтол (Россия), согласно приложенному протоколу выделения. В пробирки вносили по 100мкл цельной периферической крови испытуемых. Затем во все пробирки вносили по 10мкл внутреннего контрольного образца (ВКО) и 300мкл лизирующего раствора. Перемешивали содержимое на вортексе Personal spinvortex microspin FV-2400 компании Biosan (Латвия). Смесь инкубировали при температуре 65 °С в течении 15 мин., периодически перемешивая содержимое пробирок. Если кровь содержала сгустки увеличивали время лизиза до 30 мин. Центрифугировали содержимое пробирок в течении 5 мин 12 тыс об/мин.. В дальнейшем использовали надосадочную жидкость, для этого перенесли ее в новую пробирку. Добавляли 200мкл осаждающего раствора. Перемешивали содержимое пробирок на вортексе, после чего оставляли на 2 мин., потом снова перемешивали и оставляли на 5 мин. Центрифугировали при помощи центрифуги для микропробирок MiniSpin компании Eppendorf (Германия) 30 сек. при 5000 об/мин. Удаляли жидкость из коллектора колонки при помощи микропипетки. Затем наносили на колонку 300мкл промывочного раствора №1. Все содержимое перемешивали на вортексе, а после также центрифугировали 30 сек при 5000 об/мин. Опять удаляли надосадочную жидкость и наносили 500мкл промывочного раствора №2. Перемешали содержимое пробирок на вортексе, после чего снова центрифугировали 30 сек при 10000 об/мин. Снова удаляли жидкость и наносили 500мкл промывочного раствора №2. Перемешали содержимое пробирок на вортексе, после чего снова центрифугировали 30 сек при 10000 об/мин. Аккуратно переносили пробирки в термостат, оставили с открытыми крышками на 5-10 мин., при температуре 65 °С. Прогревали элюирующий раствор до 70 °С и добавляли в пробирки по 50мкл.
Снова перемешали содержимое в вортексе, после смесь отправили инкубироваться при темпертуре 65 °С в течении 5 мин., центрифугировали 1 мин при 12000 об/мин. ДНК хранили при -20 °С
2.2.6. Определение уровня гормона кортизола в крови.
Методы поиска литературы: В электронных базах данных PubMed, Киберленинка, и поисковых сайтах Google и Яндекс проводились поиски оригинальных исследований и обзоров литературы, написанных на английском и русском языках и содержащих ключевые слова: длина теломер или тeлoмеры и стресс, психологический стресс, физические упражнения или физическая активность, адреналин, глюкоза, ЛДГ, пролактин, тестостерон, креатинкиназа. Ручной поиск соответствующих статей также проводился с использованием цитируемых ссылок из опубликованных оригинальных исследований и обзоров литературы. Метод измерения длин тeлoмер и основные результаты определения длины тeлoмер были взяты из оригинальных исследований.
Статистический анализ Все статистические анализы проводились с помощью программного обеспечения SigmaStat v3.1 (Jandel Scientific). Все данные представлены в виде средних значений ± Стандартная ошибка среднего (S. E. M.). Анализ поведенческих данных проводился с помощью двустороннего метода ANOVA. Статистическое сравнение концентрации кортизола в стволе ствола между стилями совладания и группами лечения проводилось с помощью двустороннего метода ANOVA. Двусторонняя ANOVA также использовалась для определения значимых различий в относительных уровнях экспрессии мРНК генов-кандидатов между стилями совладания и группами лечения. Если это существенно (P Графики были сгенерированы с помощью программного обеспечения GraphPad Prism (США).
Этическое заявление Эксперименты были одобрены ведомственным Комитетом по уходу за животными в соответствии с принципом 3Rs, и они были реализованы в соответствии с законодательством по уходу и использованию экспериментальных животных.
Cell Metab 2012 Mar 7;15(3):405-11. doi: 10.1016/j.cmet.2012.01.001.
|
|||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-05-27; просмотров: 51; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.221.58.143 (0.006 с.) |