Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Этапы выделения чистой культуры анаэробных бактерий
Выделение чистых культур анаэробов изучаем на примере выделения C.perfringensиз раневого отделяемого при подозрении на газовую гангрену. 1-й этап. Обогащение на среде Китта–Тароци. 1.Приготовление мазков из раневого отделяемого и окраска по Граму. Под микроскопом видны крупные грамположительные палочки, часть которых окружены неокрасившейся капсулой (в виде белого ободка), что позволяет заподозрить газовую инфекцию. 2.Посев раневого отделяемого на среду Китта-Тароцци, предварительно прокипяченной в течении 30 минут. После посева среду прогревают 15 минут при 80°С для уничтожения вегетативных форм, споры анаэробов при этом сохраняются; 3.Инкубация посевов в термостате при 370 в течение 18-24 часов. 2-й этап. Получение изолированных колоний. 1.Изучение характера роста на среде Китта-Тароцци. При росте C.perfringens она мутнеет и в ней образуется газ (результат образования газа при ферментации глюкозы). 2.Приготовление мазка из бульонной культуры и окраска по Граму. Под микроскопом видны крупные грамположительные палочки. 3.Получение изолированных колоний анаэробов двумя способами: - на поверхности твердой питательной среды (сахарно-кровяного агара) по Цейсслеру в анаэробных условиях; - в глубине среды Вильсон-Блера по Вейнбергу. 4.Инкубация посевов в термостате при 370 в течение 18-24 часов. 3-й этап. Выделение чистой культуры. 1.Макроскопическое изучение выросших колоний анаэробов: а) на сахарно-кровяном агаре, обратить внимание на зону гемолиза вокруг колоний, что является признаком гемолитической активности бактерий (вирулентности); б) в глубине среды Вильсон-Блера, обратить внимание на цвет колоний. Черные колонии образует C.perfringensза счет образования сульфата железа (FeS). 2.Приготовление из подозрительных колоний мазков и окрашивание их по Граму. Под микроскопом выявляются крупные грамположительные палочки; 3.Остаток колонии, подвергшейся микроскопическому изучению, отсевают на среду Китта-Тароцци для получения чистой культуры. 4.Инкубация посевов в термостате при 370 в течение 18-24 часов. 4-й этап. Идентификация выделенной чистой культуры анаэробов. 1.Макроскопическое определение роста культуры на среде Китта-Тароцци; 2. Проверка выделенной культуры на чистоту - приготовление мазков со среды Китта-Тароцци и окрашивание их по Грамму. Во всех полях зрения чистая культура должна быть однородной морфологически и тинкториально.
3.Окончательная идентификация выделенной чистой культуры анаэробов проводится по токсигенности в реакции нейтрализации экзотоксина на белых мышах, биохимическим, антигенным свойствам и по генетической структуре. 5-й этап. Учет результатов идентификации и оформление заключения о виде. Например, выделена чистая культура C.perfringens, идентификация проведена по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным, токсигенным свойствам и по генетической структуре.
Вирусологические методы
Для выделения и культивирования облигатных паразитов (вирусов, риккетсий и хламидий) применяются вирусологические методы: заражение тканевых культур, куриного эмбриона и восприимчивых лабораторных животных. Вирусологическое исследование проводится в два этапа: выделение вируса и идентификация вируса. Материалами для вирусологического исследования могут быть отделяемое носоглотки, испражнения, кровь и другие материалы в зависимости от локализации вируса. Вирусологические методы также применяются для культивирования некоторых факультативных паразитов, например, микоплазмы, бруцелл, франциселл, легионелл и др. Заражение куриного эмбриона в аллантоисную полость с целью выделения чистой культуры вируса гриппа и идентификации. 1-й этап. Выделение вируса (культивирование вируса). Для заражения используют куриные эмбрионы 8-14 дневного возраста. Ход работы: 1) перед заражением определяют жизнеспособность эмбриона в овоскопе и отмечают карандашом на скорлупе границы воздушной камеры; 2) яйцо помещают на подставку в вертикальном положении так, чтобы воздушный мешок находился наверху; 3)стерилизация скорлупы на тупом конце яйца в такой последовательности: спиртом, 2 % йодной настойкой ещё раз спиртом и обжиганием; 4) над центром воздушного мешка делают прокол скорлупы с помощью препаровальной иглы; 5) Пастеровской пипеткой вводят 0,1-0,2 мл вируссодержащего материала на глубину 2-3 мм ниже границы воздушной камеры;
6) отверстие в скорлупе заклеивают лейкопластырем; 7) инкубация эмбриоа в термостате в течение 2-3 суток при 370 С. 2-й этап. Идентификация выделенной чистой культуры вируса. Ход работы: 1) яйцо устанавливают на подставке так, чтобы воздушное пространство было наверху; 2) обработка скорлупы последовательно спиртом, йодом, опять спиртом и обжиганием; 3) осторожно снимают лейкопластырь, рассекают и сбрасывают скорлупу, определяют гибель эмбриона, отсасывают аллантоисную жидкость и разливают в пробирки; 4) идентификация вируса проводится по гемагглютинирующей активности (по способности склеивать куриных эритроцитов) в реакции гемагглютинации.
Реакция гемагглютинации (РГА) Применяется для идентификация вирусов по гемагглютинирующей активности. Вирусы, обладающие гемагглютинирующими свойствами (имеющие гемагглютинин – гликопротеид суперкапсида), способны гемагглютинировать эритроцитов различных животных. Например, вирусы гриппа – куриных эритроцитов. Компоненты реакции: 1) исследуемый материал – аллантоисная жидкость(гемагглютинин вируса гриппа?); 2) 5% суспензия куриных эритроцитов; 3) физиологический раствор. Существует два способа постановки реакции: капельный способ на стекле и объемный способ в пробирке. Капельный способ на стекле: Опыт:1 капля аллантоисной жидкости + 1 капля 5% суспензии куриных эритроцитов. Контроль: 1 капля физ. раствора + 1 капля 5% суспензии куриных эритроцитов. Хорошо перемешать сначала контрольную каплю, затем- опытную. Наличие гемагглютинации (выпадение хлопьев красного цвет) в опыте при ее отсутствии в контроле (гомогенное покраснение) указывает на содержание вируса гриппа в исследуемом материале. Гемагглютинация – это склеивание эритроцитов под влиянием гемагглютинина вируса. Вид вируса гриппа (А,В,С) дифференцируют по антигенной структуре с помощью РСК, ИФА, а серотип – РТГА (практические навыки 9.7). Окончательную идентификацию также можно провести по генетической структуре (ПЦР).
|
||||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-04-05; просмотров: 43; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.222.239.77 (0.007 с.) |