Иммунные сыворотки, иммуноглобулины

Иммунные сыворотки содержат иммуноглобулины (Ig), нейтрализующие токсины и способствующие элиминированию возбудителя из организма, представляют собой сыворотки крови гипериммунных животных-продуцентов.

Гипериммунизация предусматривает многократное введение нарастающих доз антигена с целью получения наивысшей ответной иммунологической реакции организма и максимального накопления Ig (иммуноглобулинов), уровень которых должен обеспечить при применении лечебный, профилактический или диагностический эффект.

В качестве доноров-продуцентов гипериммунных сывороток используют лошадей, волов, кроликов, которым вводят антигены по разработанной схеме, по окончанию цикла проводят кровопускание в объеме 13 % от массы тела животного.

Иммунные сыворотки подразделяют на: ▪ лечебно-профилактические;

▪ диагностические.

Лечебно-профилактические сыворотки используют для лечения инфекционных заболеваний (пастереллеза, паратифа, сибирской язвы) и для профилактики при условии высокого риска заражения, пассивный иммунитет формируется сразу, а напряженность -14 суток. Продуценты лечебно-профилактических сывороток лошади и волы. Лечебно-профилактические сыворотки применяют подкожно или внутримышечно в нескольких местах (лечебная доза 50-100 мл), чаще однократно. Осложнения: анафилактический шок, сывороточная болезнь отмечают при применении сывороток гетерогенных видов животных.

Диагностические сыворотки используют в серологических реакциях для определения вида, сероварианта или серогруппы возбудителя. Продуценты – кролики, которых после цикла иммунизации тотально обескровливают.

Иммуноглобулины- 10%-ный раствор глобулиновой фракции иммунной сыворотки. Содержит β, لا-глобулины, других балластных белков нет. Препараты более эффективны, не дают осложнений. Применяют подкожно с лечебной и профилактической целью, доза в несколько раз меньше, чем сыворотки. Биопромышленность выпускает:

▪глобулин против болезни Ауески;

▪ неспецифический нормальный глобулин;

▪ антирабический, флюоресцирующий для диагностических целей.

Контроль сывороточных препаратов включает проверку на:

▪ стерильность (нет роста аэробов, анаэробов, грибов);

▪ безвредность – введением лабораторным животным – 100% -ная сохранность;

▪ специфическую активность (определение превентивных свойств) определяют заражением иммунизированных и контрольных животных. Иммунизированные должны оставаться здоровыми при гибели контрольных.

Аллергены

Аллергены- экстракты возбудителей или фильтраты бульонных культур, которые применяют для выявления повышенной чувствительности организма к возбудителю. Аллергены используют для диагностики хронических, скрыто протекающих заболеваний: туберкулеза, бруцеллеза у свиней, сапа.

Выпускают очищенные и нативные аллергены. Очищенные – лиофильно (сублимационно) высушенные, не содержащие балластных соединений, экстракты возбудителя, к ним относят ППД – туберкулин, КАМ-аллерген. Нативные (природные): маллеин, бруцеллин - фильтраты бульонных культур возбудителей.

Аллергены применяют:

▪ внутрикожно (ППД-туберкулин, КАМ, бруцеллин), у больных в месте введения возникает воспаление, у крупного рогатого скота увеличение толщины кожной складки;

▪ закапывая на конъюнктиву (маллеин), у больных сапом лошадей гнойный конъюнктивит.

 

Антигены (диагностикумы )

Антигены (диагностикумы) - взвеси или экстракты возбудителей для выявления специфических Ig в сыворотке крови обследуемых, положительно реагирующих считают больными.

Выпускают несколько типов антигенов:

▪ взвеси убитых возбудителей (единый бруцеллезный антиген);

▪ растворимые – экстракты возбудителей (сапной антиген);

▪ эритроцитарные – экстракты возбудителей, сорбированные на формалинизированных эритроцитах барана (пуллорный эритроцитарный антиген, сальмонеллезный эритроцитарный диагностикум).

 

Вопросы для обсуждения

 

1. Коллоквиум №2 по разделам «Действие физических, химических, биологических факторов на микробы, экология микроорганизмов, биопрепараты для профилактики, лечения, диагностики инфекционных заболеваний)

 

Вопросы коллоквиума №2

 

1. Методы стерилизации.

2. Характеристика дезинфицирующих, антисептических препаратов.

3. Характеристика химиотерапевтических препаратов.

4. Антибиотики, классификация.

5. Продуценты антибиотиков.

6. Методы определения чувствительности к антибиотикам. 

7. Применение антибиотиков.

8. Характеристика кормовых антибиотиков.

9. Характеристика фагов.

10. Типы взаимоотношений у микробов.

11. Микрофлора кожи.

12. Микрофлора вымени.

13. Микрофлора мочеполовых путей.

14. Микрофлора органов дыхания.

15. Микрофлора рубца.

16. Микрофлора кишечника.

17. Дисбактериозы.

18. Пробиотики, пребиотики, симбиотики, синбиотики.

19. Микрофлора воды, санитарная оценка.

20. Микрофлора воздуха, санитарная оценка.

21. Санитарная оценка почвы.

22. Санитарная оценка доильного оборудования, молочной посуды, оборудования птицепомещений.

23. Вакцины.

24. Иммунные сыворотки.

25. Аллергены.

26. Антигены (диагностикумы).

27. Понятия инфекция, инфекционный процесс, инфекционная болезнь.

28. Формы инфекции.

29. Патогенность, факторы вирулентности.

30. Характеристика фагоцитоза.

31. Гуморальные показатели естественной резистентности.

32. Виды и категории иммунитета.

33. Антигены, характеристика.

34. Ig характеристика.

 

ТЕМА 9 Реакция агглютинации и современные разновидности

 

Цель занятия. Разобрать сущность, методику постановки и учета РА. Разобрать разновидности РА, методику постановки и учета РНГА.

 

Оборудование и материалы. Пробирки, штативы Флоринского, пипетки, физраствор, сыворотки крови, диагностикумы, Плексигласовые пластины, пипеткиавтоматы, физраствор, эритроцитарный антиген.

Задание для самостоятельной работы студентов. 1. Поставить и учесть РА, РБП, РНГА.

Рис. 9. Результаты РА       Рис. 10. Результаты РБП

 

 

 

Рис. 11. Результаты РНГА

 

Реакция агглютинации (РА)

Сущность реакции агглютинации заключается в склеивании антигена антителами в присутствии электролитов, с выпадением образовавшегося комплекса в осадок. Реакцию агглютинации ставят с целью:

● обнаружения антител в сыворотке крови обследуемых, используя заведомо известный антиген, положительно реагирующих считают больными;

● определения вида, сероварианта возбудителя, используя заведомо известную сыворотку.

Реакцию агглютинации ставят двумя способами:

● по типу пробирочной в пробирках Флоринского;

● по типу капельной на предметном стекле или пластине.

При постановке пробирочной реакции вначале в ряд пробирок наливают физиологический раствор, затем готовят разведения сыворотки, потом вносят антиген.

Учет реакции проводят через 18 – 20 часов выдерживания в термостате при 37⁰ С, а затем час при комнатной температуре. Интенсивность агглютинации оценивают в крестах:

▪ четыре креста – (#) соответствует 100%-ной агглютинации, выпадает осадок в виде зонтика, надосадочная жидкость прозрачная;

▪ три креста – (+++) – 80%-ная агглютинация, осадок зонтик, надосадочная жидкость слегка мутная;

▪ два креста – (++) – 50%-ная агглютинация, осадок диск, надосадочная жидкость мутная;

▪ отрицательная реакция (-) характеризуется равномерным помутнением.

Контролем реакции агглютинации в пробирках являются отрицательные результаты взаимодействия: ▪ антигена с нормальной сывороткой кролика; ▪ антигена и физиологического раствора.

Капельную реакцию агглютинации ставят на предметном стекле или пластине, смешивая каплю сыворотки и каплю антигена. В положительных случаях, если антиген подходит антителу образуются хлопья:

▪ четыре креста – (#) – крупные хлопья и прозрачная жидкость;

▪ два креста – (++) – мелкие хлопья и мутная жидкость.

▪ отрицательная – (-) – равномерная взвесь.

Учитывают капельную РА спустя 5-8 мин после постановки.

 

Методика постановки реакции агглютинации для диагностики бруцеллеза

 

При исследовании сыворотки крупного рогатого скота в пять пробирок разливают 0,5%-ный фенолизированный раствор натрия хлорида: в первую - 2,4 мл раствора, в последующие – 0,5 мл, затем в первую пробирку вносят 0,1 мл исследуемой сыворотки.

При исследовании сыворотки от мелкого рогатого скота используют фенолизированный 5%-ный раствор хлорида натрия. В первую пробирку вносят 0,2 мл сыворотки и 2,3мл раствора, в последующие пробирки разливают также по 0,5 мл хлорида натрия.

Готовят разведения: из первой 0,5 мл переносят во вторую пробирку, смешивают и так далее, из последней 0,5 мл выливают. Затем в каждую пробирку вносят, начиная со второй, по 0,5 единого бруцеллезного антигена.

После добавления антигена разведение сыворотки в каждой пробирке удваивается разведения сыворотки крупного рогатого скота будут составлять 1:50, 1:100, 1:200, 1:400, а в сыворотке мелкого рогатого скота: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200. Ставят контрольные реакции:

▪ с нормальной или негативной сывороткой кролика в испытуемых разведениях;

▪ с позитивной бруцеллезной сывороткой в разведениях до предельного титра.

После добавления компонентов пробирки встряхивают, помещают в термостат при 37 – 38⁰ С на 16-20 часов, затем час выдерживают при комнатной температуре и проводят учет.

Реакцию считают положительной при наличии агглютинации с сыворотками крупного рогатого скота в разведении 1:200, овец и коз в разведении 1:100.

Реакцию считают сомнительной при наличии агглютинации только в разведении у крупных животных 1:50, овец и коз – 1:25, сыворотки таких животных подлежат повторному исследованию через 3 – 4 недели. Обследуемых, у которых дважды получены сомнительные результаты относят к положительно реагирующим.