Провести определение в почве общего микробного числа.

Поставить реакцию кольцепреципитации (опыт), интерпретация полученных результатов.

 

В преципитационную пробирку с помощью пастеровской пипетки вносят 0,2-0,3 мл(5-6 капель) сыворотки (своротка не должна попадать на стенки пробирки).На сыворотку осторожно настаивают антиген в таком же объёме, наливая его тонкой пастеровской пипеткой по стенке пробирки. Пробирку при этом держат в наклонном положении. При правильном наслаивании между сывороткой и антигеном должна получиться чёткая граница. Осторожно, чтобы не перемешать жидкости, пробирку ставят в штатив. При + результате на границе антигена и антитела образуется мутное кольцо-преципитации.

Поставить реакцию Видаля, учет результата по демонстрационной реакции, интерпретация полученных результатов.

 

Реакция Видаля — реакция агглютинации, применяемая для диагностики брюшного тифа и некоторых тифо-паратифозных заболеваний. Каждая пробирка наполняется физраствором (1мл). После этого к нему вливают еще по миллилитру сыворотки (разбавленной 1:50). В итоге получают разбавление 1:100.Далее из этой колбы вещество добавляют в следующую, в которой уже есть физраствор. В итоге выходит соотношение 1:200.Таким же способом достигают разведений 1:400 и 1:800.В завершении каждую колбу наполняют диагностикумом (две капельки) и отправляют в термостат на два часа при 37 градусов. После выдерживания в термостате наступает агглютинация в виде зерен, хлопьев, выпадающих в осадок.

Провести постановку ориентировочной реакции агглютинации на стекле, интерпретация полученных результатов.

На обезжиренное предметное стекло наносят бактериальной петлей (или пипеткой) 2 капли специфической адсорбированной агглютинирующей сыворотки и 1 каплю ИХН.

Примечание: Агглютинирующие адсорбированные сыворотки для постановки РА на стекле не разводят, а только растворяют. Неадсорбированные агглютинирующие сыворотки предварительно разводят в соотношении 1:50 - 1:100. Капли наносят так, чтобы между ними было расстояние. Культуру петлей (или пипеткой) вносят в каплю ИХН («КА») и в одну из капель сыворотки («0»); капля сыворотки, в которую не внесена культура, является «КС». Внимание! Нельзя переносить культуру из сыворотки в каплю с ИХН. Культуру петлей тщательно растирают на стекле на границе с каплей, а потом вносят в каплю. Учет реакции: реакция протекает при комнатной температуре в течение 1-3 минут. «КС» должен оставаться прозрачным, а в «КА» должна наблюдаться равномерная муть. Если в капле, где культура смешана с сывороткой, появляются хлопья агглютината на фоне прозрачной жидкости, результат реакции считают положительным. Положительный результат РА свидетельствует о гомологичности (соответствии друг другу) Аг и Ат. При отрицательном результате реакции в капле «О» будет равномерная муть, как в капле «КА», что свидетельствует о несоответствии Аг и Ат. Реакция видна отчетливее, если её рассматривать над темным фоном в проходящем свете.

11. Поставить реакцию Vi - гемагглютинации, учет результата по демонстрационной планшете, интерпретация полученных результатов.

 

Берут: 1) сыворотку крови больного (1—2 мл); 2) эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум; 3) Vi-сыворотку; 4) О-сыворотку; 5) изотонический раствор натрия хлорида. Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в пластмассовых пластинах с лунками. Кровь у больного берут так же, как для реакции Видаля. Получают сыворотку. Реакцию ставят в объеме 0,75 мл. Контролем служат: 1) стандартная агглютинирующая монорецепторная Vi-сыворотка+диагностикум — реакция должна быть положительной до титра сыворотки; 2) диагностикум в изотоническом растворе натрия хлорида (контроль) — реакция должна быть отрицательной. Содержимое лунок тщательно перемешивают. Учет начинают с контроля. Реакцию оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума.

Провести определение в почве общего микробного числа.

Микробное число почвы – это количество мезофильных аэробных и анаэробных сапрофитных микроорганизмов, находящихся в 1 г почвы. Из каждой пробы почвы должно использоваться не менее 2-х различных разведений. Разведение готовят, отмывая микробы от частичек почвы в стерильной воде. При исследовании чистых почв засевают разведение 1:103 и 1:104, грязных почв 1:105 и 1:106. Для переноса суспензии каждого разведения в чашку Петри используют свежую стерильную пипетку. Допускается одной и той же пипеткой делать несколько посевов, но в этом случае посев следует начинать с большего разведения и переходить к меньшему (1:104, 1:103, 1:102). В стерильную чашку Петри, слегка приоткрыв крышку, вносят 1 мл почвенной суспензии соответствующего разведения. Затем в эту чашку в стерильных условиях вносят 15 мл остуженного до 450 С МПА или РПА, хорошо перемешивают круговыми движениями, закрытую чашку оставляют на горизонтальной плоскости для застывания агара. При учете результатов число колоний. выросших на чашке, умножают на соответствующее разведение, объем пробы и пересчитывают на 1 г почвы. Чашки, на которых выросло мало колоний, во внимание не принимаются, так как случайное загрязнение их даже единичными микробами может дать существенную ошибку при последующих расчетах. Если выросло слишком большое количество колоний, то их не подсчитывают. В этих случаях повторяют исследование, сделав соответствующие поправки при посевах.

4. Поставить первую бродильную пробу молока для определения бактерий группы кишечной палочки.

 

Поставить первую бродильную пробу молока для определения БГКП. Первый день исследования. Посев молока и молочно-кислых продуктов произвести в 2 пробирки с 5 мл среды Кесслер. В 1 пробирку засеять 1 мл цельного продукта, в другую пробирку 1 мл из разведения 1:10 (0,1 мл). Посевы инкубируют в термостате при 43° С 18-24 ч. Второй день исследования. Из каждой забродившей пробирки производят посев на сектор среды Эндо и инкубируют при 37° С 18-24 ч. Третий день исследования. При отсутствии типичных для БГКП колоний продукт считают незагрязненным кишечной палочкой. При наличии типичных для БГКП колоний делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу и производят посев на среду с глюкозой и среду Козера.

5. Провестипосев пробы кондитерских изделий, содержащих крем для определения коагулазоположительных стафилококков.

По 0.1 мл расплавленого кремя и заливаем ЖСА(чашки).термостат 37◦ на 24 часа. Микроскопия. Лицитовителазная активность. Пересев на косяк. Термостат 37◦ на 24 часа. Микроскопия. Плазмакоогуляция. Маннит. Фагоципирование. Учет результатов.

По 0.5 мл пробы и по 5 мл солевого бульона. Термостат 37 град. На 24 часа. Пересев на ЖСА. Термостат 37 град. на 24 часа. Просмотр: чашки стоят 24 часа при комнатной температуре. Учет результатов: при отсутствии роста, делают повторный высев на среду накопление через 48 часов. Фаготипирование выделенной культуры.

6. Провести посев пробы мяса для определения бактерий рода сальмонелл.

1. Сделайте посев 25г продукта в 100 мл селенитового бульона

→370С 24 часа.

2. Из колбы со средой накопления с посевом мясного продукта (демонстрационный посев) сделайте высев на чашку Петри с ВСА →+370С 48 часов.

3. Отберите на чашке Петри с ВСА (демонстрационная чашка) типичную для сальмонелл изолированную колонию и пересейте ее на среду первичной идентификации для энтеробактерий и на скошенный СПА →+370С 24 часа.

4. Проведите первичную идентификацию культуры по характеру ее роста на среде Клиглера (Ресселя, Олькеницкого) и сделайте заключение по результатам исследования.

Окончательный ответ на 5 сутки.

7. Поставить реакцию латекс - агглютинации для определения антител к бактериальным антигенам, интерпретация полученных результатов.

 

1.Делают ряд серийных разведений исследуемого материала. Сыворотки крови необходимо предварительно прогреть в течение 30 мин при 56 °С или 20 мин при 60 °С. На плоские ровные пластины наносят по одной капле соответствующих разведений.

2. Добавляют к каждому разведению равный объем суспензии сенсибилизированного латекса. Смешивают 1 каплю исследуемого материала и диагностикум, в лунки вносят по 15, 25 или 50 мкл ингредиентов реакции.

Независимо от вида диагностикума и количества антител (антигена) в исследуемом материале результаты РАЛ могут быть учтены уже через несколько минут после смешивания реагентов. При наличии в исследуемом образце искомого микроорганизма склеивающиеся частицы латекса образуют агглютинат, хорошо видимый невооруженным глазом. Можно использовать лупы с небольшим увеличением. При отрицательных результатах реакции суспензия латекса остается гомогенно-мутной, без глыбок агглютината и участков просветления. При малой или низкой активности диагностикума, а также невысокой концентрации антигена пластинки лучше инкубировать при 37 °С, что несколько ускоряет образование агглютината.

Результат реакции оценивают плюсами.