Заглавная страница
Избранные статьи
Случайная статья
Познавательные статьи
Новые добавления
Обратная связь

ТОП 10 на сайте

Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации

Техника нижней прямой подачи мяча.

Франко-прусская война (причины и последствия)

Организация работы процедурного кабинета

Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний

Коммуникативные барьеры и пути их преодоления

Обработка изделий медицинского назначения многократного применения

Образцы текста публицистического стиля

Четыре типа изменения баланса

Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву

Мы поможем в написании ваших работ!

ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?

Влияние общества на человека

Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации

Практические работы по географии для 6 класса

Организация работы процедурного кабинета

Изменения в неживой природе осенью

Уборка процедурного кабинета

Сольфеджио. Все правила по сольфеджио

Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления

Главная Избранные Случайная статья Познавательные Новые добавления Обратная связь FAQ

По медицинской микробиологии, вирусологии

По медицинской микробиологии, вирусологии

«Морфология и физиология микроорганизмов.

Общая вирусология»

(учебно-методическое пособие для студентов лечебного факультета)

Ф.И.О. ________________________________________________________

Факультет ____________________________________________________

Курс __________________________________________________________

Группа ________________________________________________________

Симферополь – 20 18 г.

Дата __________________

Занятие №1

Тема: Организация микробиологической лаборатории. Правила работы. Выполнение требований биологической безопасности. Методы микробиологического исследования. Методы микроскопического исследования. Техника микроскопии. Методы окраски. Морфология микробов (бактерий и грибов).

Вопросы для обсуждения:

Микробиологическая лаборатория.
Типы лабораторий: бактериологическая, паразитологическая, микологическая, вирусологическая, иммунологическая, специальная (особо-опасных инфекций).
Структура бактериологической лаборатории.
Оборудование бактериологической лаборатории.
Правила работы в микробиологической лаборатории.
Методы лабораторной диагностики инфекционных болезней.
Микроскопия и её методы:

1) световая;	4) люминесцентная;
2) в тёмном поле;	5) электронная.
3) фазовоконтрастная;

Основные формы бактерий
Методы окраски бактерий.
Морфология грибов.

Практические задания:

1. Ознакомиться с организацией и правилами работы кафедры микробиологии как микробиологической лаборатории.

2. Изучить методы микроскопии и правила работы с иммерсионным объективом.

3. Записать методы микробиологического исследования:

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. Микроскопировать окрашенный препарат Sarcina flava. Зарисовать.

Рис. 1. Sarcina flava

5. Микроскопировать окрашенные препараты с бактериями различной формы:

а) кокки (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes);

Рис. 2. Стафилококк _______________________

Рис. 3. Стрептококк _______________________

б) палочковидные (Escherichia coli, Bacillus anthracis);

Рис. 4. Кишечная палочка _______________________

Рис. 5. Возбудитель сибирской язвы __________________________

в) извитые (Treponema pallidum).

Рис. 6. Возбудитель сифилиса ___________________________

6. Микроскопировать окрашенные препараты дрожжеподобных грибов (Candida spp.) и плесневых грибов (Mucor spp.).

Рис. 7. Мукор ________________

Рис. 8. Кандида ________________

Подпись преподавателя _________________

Дата__________________

Занятие №2

Тема: Прокариоты и эукариоты. Классификация прокариот. Структура бактериальной клетки. Капсулы. Жгутики. Споры. Методы их выявления. Сложные методы окраски. Окраска по Граму.

Вопросы для обсуждения:

Отличия прокариотов от эукариотов.
Классификация прокариотов.
Ультраструктура бактериальной клетки и методы выявления элементов ультраструктуры.
Нуклеоид, его функция.
Цитоплазма, органоиды, включения.
Цитоплазматическая мембрана и мезосомы.
Клеточная стенка бактерий, ее строение.
Жгутики. Строение, функция, методы обнаружения.
Капсула, значение, методы выявления.
Споры. Методы окраски спор.
Сложные методы окраски бактерий.
Метод Грама, его практическое значение.
Окраска по Цилю-Нильсену, её практическое применение.

Практические задания:

1. Окрасить по Граму фиксированный препарат, приготовленный из смеси бактерий (Escherichia coli и Bacillus cer е us), микроскопировать.

Рис. 1. Препарат из смеси бактерий ______________________________ ______________________________ Окраска_____________________

2. Микроскопировать препарат Mycobacterium tuberculosis в мокроте больного, окрашенный по Цилю-Нильсену.

Рис. 2. Возбудитель туберкулёза ____________________________ Окраска_____________________

3. Выявить гранулы волютина в окрашенных по Нейссеру/Лёффлеру мазках из Corynebacterium diphtheriae, зарисовать.

Рис. 3. Гранулы волютина Окраска ________________________

4. Приготовить препарат-мазок из культуры Klebsiella pneumoniae, окрасить по Бурри-Гинсу, микроскопировать, зарисовать.

Рис. 4. Капсулы Окраска ________________________

5. Микроскопировать препараты, приготовленные из спорообразующих бактерий (бациллы и клостридии), окрашенных по Пешкову/Ожешко, зарисовать.

Рис. 5. Споры бацилл и клостридий Окраска ________________________

6. Наблюдать подвижность микроорганизмов в препарате «раздавленная капля» из сенного настоя.

7. Определить тип строения клеточной стенки и отметить основные её структурные компоненты.

8. Написать обязательные и непостоянные элементы бактериальной клетки:

Обязательные элементы Непостоянные элементы

__________________________ ___________________________

Подпись преподавателя _________________

Дата__________________

Занятие №3

Тема: Физиология прокариот: питание бактерий. Культивирование бактерий. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции.

Вопросы для обсуждения:

Метаболизм бактерий: конструктивный и энергетический.
Типы питания бактерий.
Ферменты бактерий и их роль в метаболизме.
Факторы, влияющие на рост и размножение бактерий.
Прототрофы и ауксотрофы.
Питательные среды, их классификация и назначение.
Требования, предъявляемые к приготовлению питательных сред.
Стерилизация. Методы стерилизации.
Дезинфекция. Методы дезинфекции.
Дезинфектанты и антисептики.

Практические задания:

1. Изучить питательные среды и их компоненты:

а) компоненты питательных сред: пептон, агар-агар, желатин, NaCl и другие;

б) питательные среды: мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА), кровяной агар, сывороточный агар, среды Эндо и Плоскирева.

2. Заполнить таблицу:

Таблица 1.

Классификация ферментов

Биохимическая

Генетическая

Биологическая

конститутивные ферменты(кодируются обычно генами хромосомы)

индуцибельные ферменты (чаще кодируются генами плазмид и транспозонов)

Экзо- ферменты

Эндо- ферменты

3. Ознакомиться с применяемой в микробиологических исследованиях лабораторной посудой (чашки Петри, пипетки, шпатели, колбы, пробирки) и правилами подготовки ее к стерилизации.

4. Ознакомиться с работой парового (автоклава) и сухожарового стерилизаторов, бактериальных фильтров.

5. Ознакомиться с наиболее часто применяемыми дезинфектантами (хлорамин, хлорная известь) и антисептиками (70% этанол, 5% спиртовый раствор йода, растворы калия перманганата, хлоргексидина, мирамистина и другие).

6. Заполнить таблицу:

Таблица 2.

№ п/п	Метод	Аппаратура	Режим стерилизации	Стерилизуемый материал
1	Прокаливание
2	Горячий воздух
3	Пар под давлением
4	Текучий пар (дробная стерилизация)
5	Щадящее прогревание (тиндализация)

Стерилизация - __________________________________________________

________________________________________________________________

Дезинфекция - ___________________________________________________

________________________________________________________________

Асептика - ______________________________________________________

________________________________________________________________ Антисептика - ___________________________________________________

________________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №4

Тема: Дыхание, размножение и рост бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (1-й день исследования).

Вопросы для обсуждения:

1. Дыхание бактерий, сущность процесса.

2. Типы дыхания бактерий.

3. Ферменты и структуры клетки, принимающие участие в процессе дыхания.

4. Рост и способы размножения бактерий.

5. Механизм деления бактериальной клетки.

6. Фазы размножения культуры бактерий в стационарных условиях.

7. Культивирование аэробных бактерий. Факторы, влияющие на рост и размножение бактерий.

8. Бактериологический метод исследования, его этапы.

Практические задания:

1. Заполнить таблицу:

Дыхательные ферменты

Наличие дыхательных ферментов у:

аэробов факультативных анаэробов облигатных анаэробов Дегидрогиназы НАД Флавинзависимые дегидрогиназы ФАД Убихиноны Co Q Цитохромы: a, b, c (гемопротеины)

2. Изучить технику посева исследуемого материала на плотные и в жидкие питательные среды.

3. Приготовить мазок из исследуемого материала (смесь бактерий), окрасить по Граму и микроскопировать.

4. Посеять исследуемый материал в чашку Петри с мясо-пептонным агаром.

5. Поставить посевы в термостат.

6. Оформить протокол исследования культуры аэробных бактерий (1-ый день).

Протокол

Занятие №5

Тема: Факторы влияющие на рост и размножение бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (2 и 3-й дни исследования).

Вопросы для обсуждения:

1. Охарактеризивать вид, подвид, штамм, клон бактерий.

2. Культуральные свойства бактерий и способы их изучения.

3. Чистая и смешанная культура бактерий.

4. Оценка чистоты культур аэробных бактерий на 2 этапе бактериологического исследования.

Практические задания:

1. Ознакомиться с характером роста бактерий разных видов на плотных и в жидких питательных средах.

2. Изучить культуральные свойства бактерий, входящих в состав бактериальной смеси, посеянной на предыдущем занятии на чашки Петри с МПА (см. протокол, занятие № 4).

3. Выделить изолированные колонии двух типов (№1 и № 2), приготовить из них мазки, окрасить по Граму, микроскопировать.

4. Пересеять колонии культур №1 и №2 на скошенный мясо-пептонный агар (МПА).

5. Исследовать характер роста культур №1 и №2 на скошенном МПА и определить чистоту культур.

6. Пересеять чистые культуры №1 и №2 со скошенного МПА на дифференциально-диагностические среды.

7. Оформить протокол исследования культур аэробных бактерий (2 и 3 дни).

Протокол

Свойства колоний

Колонии

№ 1 № 2 1 Размер (мм) 2 Форма 3 Края 4 Прозрачность 5 Расположение по отношению к поверхности питательной среды 6 Поверхность 7 Пигмент 8 Структура

Таблица 2.

Характеристика морфологических и тинкториальных свойств бактерий, образующих колонии № 1 и № 2

Колонии
Колонии	№ 1	№ 2
Морфологические
Тинкториальные

Рис.1. Препарат-мазок из Рис.2. Препарат-мазок из

колонии № 1, окраска по Граму колонии № 2, окраска по Граму

Пересев колоний № 1 и № 2 на скошенный МПА.

Посевы помещены в термостат при t __ С на _____ часов.

3-й день исследования

Характеристика роста культур № 1 и № 2 на скошенном МПА и определение их чистоты:

Культура № 1 _____________________________________________________

____________________________________________________________________________________________________________________________________

Культура № 2 ______________________________________________________

__________________________________________________________________

Вывод: Выделены чистые культуры бактерий. Произведен посев выделенных чистых культур № 1 и № 2 в среды Гисса или «пестрого ряда» (глюкоза, лактоза, сахароза, мальтоза, маннит) и МПБ для выявления индола и сероводорода.

Посевы помещены в термостат при t __ С на _____ часов.

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №6

Тема: Ферменты бактерий. Идентификация чистых культур бактерий. Анаэробные бактерии. Выделение чистой культуры и идентификация анаэробных бактерий. Особенности культивирования и идентификации грибов.

Вопросы для обсуждения:

Принципы идентификации аэробных бактерий.
Способы определения ферментативных свойств бактерий.
Среды Гисса, их состав и использование.
Методы определения продукции бактериями аммиака, индола и сероводорода.
Какие свойства бактерий необходимо изучить для определения их видовой принадлежности?
Методы создания анаэробных условий для культивирования облигатных анаэробов.
Анаэростат, принцип его работы.
Среда Китта-Тароцци, ее назначение.
Среда Вильсон-Блера, ее применение.
Методы выделения чистой культуры облигатных анаэробов.
Какие свойства изучают у облигатных анаэробов для определения их видовой принадлежности?
Особенности культивирования и идентификации грибов.

Практические задания:

1. Произвести учет ферментативных свойств культур №1 и №2.

2. Определить вид выделенных бактерий с помощью дифференциально-диагностических таблиц.

3. Закончить оформление протокола бактериологического исследования аэробных бактерий.

Таблица 1.

Дифференциально-диагностические свойства некоторых видов бактерий рода Bacillus

Вид

Ферментация

Образование

Подвижность

Оксидаза

Каталаза

Глюкозы лактозы сахарозы мальтозы маниита индола H ₂ S спор B. cereus К К/- К/- К - - + + + + + B. subtilis К К/- К/- К К - - + + + +

Таблица 2.

Характеристика некоторых свойств E scherichia сoli

Ферментация					Образование		Подвижность	Оксидаза	Каталаза	Образование спор
Глюкозы	лактозы	сахарозы	мальтозы	маниита	индола	H₂ S	Подвижность	Оксидаза	Каталаза	Образование спор
КГ	КГ	-	КГ	КГ	+	-	+	-	+	-

Протокол

Ферментация

(К, КГ или (-)

Образование

(+ / -)

Подвижность

(+ / -)

Наличие спор

(+ / -)

Предположительный

В ид

Бактерий

глюкозы лактозы сахарозы мальтозы маниита индола H ₂ S №1 №2

Заключение: на основании изученных морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств выделенных бактерий можно предположить, что культура №1 относится к виду ____________________, а культура № 2 представляет собой вид ____________________.

Для окончательной идентификации исследование нужно продолжить.

4. Изучить характер роста анаэробных бактерий (посев почвы) в среде Китта-Тароцци.

1. Без прогрева. Рост 24 ч при 37^оС ___________________

1. Прогрев при 80⁰С, 25 мин. Рост 24 ч при 37^оС ___________________

5. Приготовить мазки и окрасить их по Граму, микроскопировать и зарисовать.

Рис. 1. Препарат-мазок из среды Китта-Тароцци. Окраска по Граму

6. Произвести пересев смешанной культуры из среды Китта-Тароцци в высокие столбики МПА с глюкозой (0,5 %) методом разведения для по-

лучения изолированных колоний.

7. Дополнить схемы выделения чистой культуры анаэробных бактерий с использованием методов Цейслера и Вейнберга.

Рис. 2. Схема выделения чистой культуры анаэробных бактерий с использованием метода Цейсслера

Рис. 3. Схема выделения чистой культуры анаэробных бактерий с использованием метода Вейнберга.

8. Изучить культуральные свойства анаэробных бактерий в сахарном МПА и среде Вильсона-Блера.

9. Произвести учет ферментативных свойств клостридий в средах Гисса и

внести данные в таблицу.

Таблица 4.

Наименование

Вида

Ферментация углеводов

Расположение спор

Отношениек О₂

глюкоза лактоза мальтоза 1 Cl. botulinum 2 Cl. tetani 3 Cl. perfringens

Вывод: _____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

10. Изучить культуральные свойства грибов рода Candida на среде Сабуро.

11. Изучить культуральные свойства плесневых грибов.

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №7

Тема: Вирусы. Классификация. Морфология и строение вирионов. Взаимодействие вируса с клеткой.

Вопросы для обсуждения:

Классификация вирусов.
Общая характеристика царства вирусов.
Морфология вирионов.
Структура простых и сложных вирионов.
Капсиды вирионов, типы симметрии. Форма и размер вирионов.
Строение внешней оболочки (суперкапсида).
Вирусный геном, его структура.
Неструктурные вирусные белки.
Стадии взаимодействия вируса с клеткой: продуктивная и интегративная формы.
Последствия интеграции вирусного генома в геном клетки.
Особенности репликации ДНК- и РНК-содержащих вирусов. Вирусы с позитивной и негативной полярностью.
Синтез вирусных белков.
Мишени для действия противовирусных препаратов.
Противовирусные химиотерапевтические препараты (общие понятия).

Практические задания:

1. Изучить классификацию вирусов, морфологию и строение вирионов с помощью таблиц.

2. Зарисовать структуру простого и сложного вириона.

Рис. 1. Схема строения простого Рис. 2. Схема строения сложного

вириона. вириона.

3. Подписать типы симметрии капсидов:

5. Изучить стадии взаимодействия вируса с клеткой.

1._________________________ 2. ________________________ 3. ________________________ 4. ________________________ 5.________________________ 6.________________________

6. Заполнить таблицу:

Эклипс-фаза для следующих вирусов:
Тип вируса	+ РНК	ДНК	Ретровирус
Транскрипция вируса
Репликация вирусного генома

Пример заполнения таблицы:

Транскрипция вируса	“-” РНК	РНК зависимая РНК-полимераза ---------------->	“+” РНК	-------> R -------> рибосома	Синтез белка
Репликация вирусного генома	“-” РНК	Вирусная РНК-полимераза ---------------->	“+” РНК	Вирусная РНК-полимераза ---------------->	“-” РНК

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №8

Тема: Методы культивирования вирусов. Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе. Вирусы бактерий (фаги). Идентификация бактерий с помощью фагов.

Вопросы для обсуждения:

1. Вирусологический метод исследования, его этапы.

2. Методы культивирования вирусов.

3. Получение и приготовление первичных, перевиваемых и полуперевиваемых культур клеток.

4. Что представляют собой однослойные, суспензионные и органные культуры клеток?

5. Способы заражения куриного эмбриона.

6. Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе.

7. Культивирование вирусов в организме лабораторных животных (биологический метод исследования).

8. Ультраструктура и морфологические типы вирусов бактерий.

9. Взаимодействие вирулентного фага с бактериальной клеткой.

10. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой и результат этого процесса.

11. Отличия лизогенных бактерий от нелизогенных. Фаговая конверсия.

12. Практическое использование вирусов бактерий.

13. Тесты на фагочувствительность и фаготипирование бактерий.

Практические задания:

1. Ознакомиться с методами приготовления клеточных культур и назначением сред (199, Игла), солевых растворов (раствор Хенкса, раствор фосфатного буфера с антибиотиками), специальных реактивов (трипсин, версен).

2. Изучить методы заражения и вскрытия куриного эмбриона. Подписать способы заражения, применяемые для накопления различных вирусов.

3. Микроскопировать клеточную культуру Hela, зараженную энтеровирусами, с целью обнаружения цитопатического действия вирусов.

4. Выявить цитопатическое действие энтеровирусов по образованию бляшек в культуре клеток под бентонитовым покрытием.

5. Поставить реакцию гемагглютинации с аллантоисной жидкостью куриного эмбриона, зараженного вирусом гриппа, по схеме.

6. Учесть результат реакции гемагглютинации (РГА) и определить гемагглютинационный титр вируса. Данные внести в таблицу.

Таблица 1.

Схема постановки реакции гемагглютинации для определения титра вируса

Ингредиенты

В мл

Лунки

Контроль эритроцитов 1-я 2-я 3-я 4-я 5-я 6-я 0,85% раствор NaCl 0,9 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Аллантоисная жидкость 0,1 → → → → Полученные разведения 1: 10 1:2 0 1: 40 1: 80 1: 160 1% взвесь куриных эритроцитов 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Учет результатов

Условные обозначения:

(+) - полная агглютинация эритроцитов, имеет вид зонтика

(-) - компактный осадок эритроцитов, как в контроле, имеет вид «пуговки»

7. Зарисовать видимые проявления РГА:

Лунки полистиролового планшета

1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 контроль

Разведения аллантоисной жидкости эритроцитов

Заключение: титр вируса гриппа 1:_______

8. Написать методы индикации вирусов:

в клеточных культурах тканей и в курином эмбрионе:

_________________________________ ___________________________

9. Установить биовар холерного вибриона с помощью определения его чувствительности к диагностическим фагам.

10. Определить фаговары культур золотистого стафилококка, и дать заключение об источниках (источнике) инфекции.

11. Оформить протокол.

12. Результаты определения фаговаров культур золотистого стафилококка:

Культура № 1 Культура № 2 Культура № 3

Культура № 1 ___________________________________________________

Культура № 2 ___________________________________________________

Культура № 3 ___________________________________________

13. Заключение по результатам фаготипирования культур _____________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________

Занятие №9

Контрольное занятие №1.

I. Практические задания:

1. Микроскопировать препараты - мазки с помощью иммерсионного объектива и определить морфологические свойства бактерий (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Bacillus anthracis), дрожжеподобных грибов рода Candida.

2. Дать характеристику культуральным свойствам бактерий на мясо-пептонном агаре в чашках Петри.

3. Произвести учет ферментативных свойств исследуемых культур бактерий.

4. Среды для культивирования анаэробных бактерий (Китта-Тароцци, Вильсон-Блера).

5. Проанализировать результаты фаготипирования исследуемых культур Staphylococcus aureus и дать эпидемиологическое заключение: из одного источника инфекции или нескольких выделены культуры.

6. Дать характеристику культуральным свойствам дрожжеподобных грибов рода Candida на агаре Сабуро в чашках Петри.

II. Тестовый контроль знаний.

III. Устный опрос

Тема: «Морфология, структура и культивирование микроорганизмов».

1. Принципы микроскопии. Основные методы микроскопирования. Методы окраски. Изучение морфологии и отдельных структур микроорганизмов.

2. Систематика микроорганизмов (прокариоты, грибы, простейшие, вирусы). Принципы классификации. Понятие о виде как основной таксономической единице. Таксономические категории. Номенклатура. Основные отличия прокариотов от эукариотов.

3. Строение и химический состав клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Бактерии с дефектом синтеза клеточной стенки: протопласты, сферопласты, L – формы.