Исследование резистентности капилляров кожи

(физиологический тест)

Резистентность капилляров крови (РКК) зависит от обеспеченности организма аскорбиновой кислотой и рутином, участвующих в регуляции коллоидного состояния межклеточных субстанций. Этот показатель оценивают по появлению мелких кровоизлияний на ограниченном участке кожи в месте механического воздействия (создание избыточного или отрицательного давления).

Обнажив предплечье, на верхнюю треть плеча накладывают манжету тонометра. В манжете создают давление в 200 мм ртутного столба в течение 3 минут. РКК оценивается на участке дозированной нагрузки на капилляры кожи (под манжетой). Кровоизлияния подсчитывают с помощью лупы. Если этому мешает гиперемия, то целесообразно участок исследования слегка сдавить предметным стеклом: на анемированной коже геморрагии выступают отчетливее.

 

РКК оценивается по пятибалльной шкале:

I степень – до 5 мелких петехий;

II степень – от 6 до 15 петехий;

III степень – до 30 петехий;

IV степень – более 30 кровоизлияний;

V степень – число кровоизлияний не поддается подсчету.

 

При достаточной С- и Р-витаминной обеспеченности у практически здоровых людей обычно регистрируется первая и вторая степень резистентности капилляров кожи.

Тема 2. ВИТАМИН В₁ (ТИАМИН)

Тиамин состоит из двух циклических систем, пиримидинового кольца и тиазолового кольца, связанных метиленовой группой. Активной формой витамина является тиаминдифосфат, иначе тиаминпирофасфат, который в качестве кофактора ферментов участвует в переносе активных альдегидных групп при окислительном декарбоксилировании 2-кето-кислот и в транскетолазных реакциях гексозомонофосфатного пути.

Рис. 6 – Структурная формула тиамина

 

Недостаток витамина приводит к заболеванию «бери–бери», симптомами которого являются неврологические растройства, сердечная недостаточность и мышечная атрофия.

Лабораторная работа № 1

Качественные реакции на витамин В₁

 

Материалы, посуда, реактивы:

тиаминбромид, в порошке;

5% раствор же­лезосинеродистого калия (феррицианид калия - КзFe(CN)₆),;

10% раствор гидроксида натрия;

бутиловый или изоамиловый спирт;

0,01% раствору тиамина, подкисленный соляной кислотой до рН 3-4 (или 0,01% раствор тиаминхлорида);

диазореактив (основной раствор) готовят растворением 0,9 г сульфаниловой кислоты в 9 мл концентрированной НС1 с последующим разбавлением дистиллиро­ванной водой до 100 мл (хранят в склянке из темного стекла);

перед определением готовят рабочий раствор: в мерную колбу на 50 мл, помещенную в сосуд со льдом, вносят 1,5 мл основного раствора, добавляют 1,5 мл свежеприготовленного 5% раствора нитрита натрия NaNО₂, через 5 мин добавляют при помешивании еще 6 мл раствора нитрита натрия и доводят дистиллированной водой, ох­лажденной на льду, до метки; реактив готов через 15 мин (может хра­ниться в холодильнике не более одних суток);

карбонатно-щелочной раствор: перед употреблением смешивают равные объемы 4% раствора гидроксида натрия и 5,76% раствора карбоната натрия;

пробирки;

пипетки.

А) Тиохромная реакция.

Тиамин в щелочной среде окисляется железосинеродистым калием в тиохром, обладающий го­лубой флуоресценцией в ультрафиолетовом свете:

 

 

 

 

Немного порошка тиаминбромида (около 10 мг) растворяют в 5 мл воды, прибавляют 1 мл 5% раствора железосинеродистого калия, 1 мл 10% раствора гидроксида натрия, 5 мл бутилового (или изоамилового) спирта. Пробирку (или стаканчик) хорошо встряхи­вают и оставляют на несколько минут. Верхний, спирто­вой слой осторожно сливают в пробирку из нефлуоресцирующего стекла и рассматривают в лучах ртутно-кварцевой лампы (в темном помещении). Хорошо заметна голубая или синяя флуоресценция.

 

Б) Диазореакция на витамин B₁.

Раствор тиамина при добавлении к нему диазореактива и щелочи окрашивается в оранжевый или красный цвет вследствие образование сложного соединения тиами­на с диазобензосульфокислотой.

К 2 мл карбонатно-щелочного раствора добавляют 1 мл диазореактива и 1-2 мг порошка тиаминбромида (на кончике скальпеля). Вначале появляется желтое окрашивание, которое через 1-2 мин. переходит в розо­вое или красное.

 

Тема 3. ВИТАМИН В₂ (РИБОФЛАВИН)

Название витамин В₂ в литературе часто ассоциируется с рибофлавином. Витамин В₂ – это комплекс нескольких витаминов. В обмене веществ рибофлавин выполняет функцию структурного элемента простетических групп флавинмононуклеотида (ФМН) и флавиндинуклеотид (ФАД). ФМН и ФАД – ковалентно связанные составные части различных оксиредуктаз и служат для переноса атомов водорода. Специфического авитаминоза не обнаружено.

Рис. 7 – Структурная формула рибофлавина (окисленная форма)

 

Рибофлавин — диметилированное производное изоаллоксазина, к которому присоединен спирт рибитол.

Рибофлавин обладает окислительно-восстановитель­ными свойствами. В окисленной форме рибофлавин окрашен в желтый цвет, а в восстановленной – бесцветный.

Лабораторная работа № 1

Качественные реакции на витамин В₂

 

Материалы, посуда, реактивы:

 

0,025% раствор витамина;

рибофлавин, 0,015% раствор, хранят в склянке из темного стекла;

соляная кислота концентрированная;

цинк металлический;

0,1% раствор азотнокислого серебра,хранят в склянке из темного стекла;

пробирки;

пипетки.

А) Реакция с металлическим цинком.

К 1 мл раствора рибофлавина добавляют (под тягой!) 10 капель концентрированной соляной кислоты и кусочек металли­ческого цинка. Под влиянием выделяющегося водорода окраска раствора постепенно меняется: из желтой пре­вращается сначала в зеленую, затем в малиновую, ро­зовую, и, наконец, наступает обесцвечивание. Через не­сколько минут верхний слой жидкости в пробирке снова принимает желтое окрашивание (окисление лейкофлавина в рибофлавин кислородом воздуха).

 

+ Zn+ 2HCl® + ZnCl₂

 

рибофлавин рибофлавин

(окисленная форма – (восстановленная форма –

желтого цвета) бецветна)

 

В слабокислой или нейтральной среде рибофлавин обла­дает желто-зеленой флуоресценцией.

Б) Реакция с азотнокислым серебром.

Ней­тральные или слабокислые растворы рибофлавина (рН 6,5-7,2), реагируя с азотнокислым серебром, дают со­единение, окрашенное в розовый и красный цвет.

К 1 мл раствора рибофлавина добавляют 0,5 мл рас­твора азотнокислого серебра. Появляется розовое или красное окрашивание (интенсивность окраски зависит от концентрации рибофлавина в растворе).

Лабораторная работа № 2