Опыт 5. Реакции осаждения белков.

а) Обратимое осаждение белков сернокислым аммонием (высаливание).

1. В пробирку налейте 0,5 мл раствора яичного белка.

2. Добавьте равный объем насыщенного раствора сернокислого аммония.

Объясните причину выпадения осадка.

 

 

3. К раствору с осадком белков добавьте равный объем дистиллированной воды, перемешайте.

 

Почему наблюдается постепенное исчезновение осадка белков?

 

 

б) Осаждение белков при кипячении.

1. Возьмите четыре пробирки.

2. В каждую налейте по 0,5 мл раствора белка.

3. Первую пробирку оставьте без изменений, во 2-ю добавьте 1 каплю 1%-ной уксусной кислоты, в 3-ю – 5 капель 10%-ной уксусной кислоты, в 4-ю – 5 капель 10% гидроксида натрия.

4. Содержимое всех пробирок поставьте на 5 мин в кипящую водяную баню.

5. Сравните характер изменения растворов после нагревания.

 

Запишите в таблицу результаты осаждения белков при кипячении в различных средах (отметьте положительный результат осаждения плюсом, а отрицательный - минусом) и укажите в каждом случае причины появления или отсутствия осадка белка.

 

	Нейтральная среда	Слабокислая среда	Сильнокислая среда	Щелочная среда
Результат осаждения
Причина выпадения осадка

в) Осаждение белков солями тяжелых металлов, концентрированными минеральными кислотами, органическими растворителями.

 

1. Возьмите три пробирки.

2. В каждую налейте по 0,5 мл раствора белка.

3. В первую пробирку добавьте 0,5 мл 5%-ного раствора уксуснокислого свинца, во 2-ю – 0,5 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ), в 3-ю – 0,5 мл ацетона.

 

Результаты реакций осаждения белков запишите в таблицу:

 

 

Название веществ, осаждающих белки	Интенсивность осадка	Чем обусловлена реакция и ее особенности

Опыт 6. Определение изоэлектрической точки белка (демонстрационный).

1. Возьмите 7 пробирок одинакового диаметра.

2. Насыпьте в каждую пробирку меркой по 1 мл измельченного в порошок желатина.

3. Прилейте в каждую пробирку по 10 мл буферного раствора с определенной величиной рН (см. таблицу).

 

рН буферного раствора
0,2 М р-р КН2РО4(мл)	–
0,1 М р-р лимонной к-ты (мл)							–

 

Через 15-20 мин измерьте высоту каждого столбика набухшего желатина. Постройте график зависимости степени набухания от величины рН и определите изоэлектрическую точку желатина (рI). Объясните, почему вы так решили?

 

 

 

Дата выполнения _______Балл _______Подпись преподавателя ____________

Занятие № 4. «Ферментный катализ»

Цель занятия: Сформировать знания о природе, свойствах и механизмах действия ферментов.

 

Вопросы к контрольной работе:

1. Ферменты: классификация и номенклатура.

2. Отличие ферментов от неорганических катализаторов: термолабильность, влияние рН на активность, специфичность. Особенности ферментного катализа. Чем объяснить, что в качестве биологических катализаторов природой избраны именно белки?

3. Механизм ферментного катализа. Фермент-субстратный комплекс. Каким образом ферменты снижают энергию активации химических реакций?

4. Строение ферментов: апофермент, кофермент, каталитический центр, аллостерический центр и их биохимическое значение. Какие вещества относят к числу коферментов?

5. Активность ферментов. Активаторы и ингибиторы ферментов. Механизм их действия. Типы ингибирования ферментов.

6. Способы регулирования скоростей ферментативных реакций и направленности биохимических процессов. Понятие о проферментах, изоферментах, мультиферментных комплексах и их роли в метаболизме.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.