Кровяные вирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов В, С, D

Занятие № 2.3.2

Кровяные вирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов В, С, D

 

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

 

1. Изучить биологические свойства возбудителей гепатитов В, С, D.

2. Изучить принципы вирусологической диагностики гепатитов В, С, D.

3. Научиться подбирать антимикробные препараты для идентификации,

лечения и профилактики гепатитов В, С, D.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

 

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

2. Основные симптомы заболеваний, вызываемых вирусами гепатитов В, С, D.

3. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость, иммунитет, механизм

передачи инфекций.

4. Принципы лабораторной диагностики гепатитов В, С, D.

5. Основы профилактики гепатитов. Препараты для диагностики,

лечения и профилактики.

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

• составлять алгоритм лабораторного обследования больного гепатитом;

• проводить учет и интерпретировать результаты вирусологических
исследований с целью диагностики гепатитов;

• классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:

• о правилах забора материала для исследования;

• об антигенной структуре возбудителей;

• о современных вакцинах для профилактики и лечебных препаратах;

 

 

 

 

Работа № 1. Строение вирусов гепатитов В, D, С,

Цель: Изучить морфологию вирусов гепатитов В, D, С. Зарисовать. Сделать вывод.

 

В D С

Вывод:

1. _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Работа № 2. Серологическая диагностика гепатитов

А ) Цель: учесть результат постановки реакции непрямой гемагглютинации с парными сыворотками больного с подозрением на вирусный гепатит В. В качестве диагностикума использовали эритроцитарный HBs-Ag. Определить клиническую стадию болезни. Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

 

Постановка:

Титры 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 КС КД

 

1-ая неделя

 

 

2-ая неделя

 

 

Результат:______________________________________________________________________

Вывод:________________________________________________________________________

 

Б) Цель: Определить форму течения гепатита В. Решить ситуационные задачи.

Задача 1

В клинику поступил больной с циррозом печени. У больного взята кровь на выявление НВе-Ag и HBs-Ag. Поставлена реакция ИФА. Учесть готовый результат. Сделать вывод: при какой форме заболевания выявляются НВе-Ag и HBs-Ag.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Механизм:

 

Постановка

Опыт Негативный контроль Позитивный контроль

 

HBs-Ag

 

 

НВе-Ag

 

 

Результат:______________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Задача 2

У больного взята сыворотка для выявления Ig М и IgG к НВс-аg вируса гепатита В. Поставлена реакция ИФА. Учесть готовый результат. Сделать вывод о стадии заболевания.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Механизм:

 

 

Постановка:

Опыт Негативный контроль Позитивный контроль

 

 

IgM к HBс-Ag

 

 

IgG к НВс-Ag

 

 

Результат:______________________________________________________________________

 

Вывод:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

 

 

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

1. Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).

 

Вакцина «Энджерикс»

2.____________________________________________________________________________

3.____________________________________________________________________________

4.____________________________________________________________________________

5.____________________________________________________________________________

6.____________________________________________________________________________

 

Ig человека против гепатита В

2. __________________________________________________________________________

3. __________________________________________________________________________

4. __________________________________________________________________________

5. __________________________________________________________________________

6. __________________________________________________________________________

 

1. Интерферон лейкоцитарный человеческий 2.____________________________________________________________________________

3.____________________________________________________________________________

4.____________________________________________________________________________

5.____________________________________________________________________________

6.____________________________________________________________________________

1. Эритроцитарный HBs-диагностикум 2.____________________________________________________________________________

3.____________________________________________________________________________

4.____________________________________________________________________________

5.____________________________________________________________________________

6.____________________________________________________________________________

1. Заполнить контрольные карты по предложенным нозоформам:

ГЕПАТИТ В

Таксономия возбудителя:

Семейство____________________________________________________________________

Род__________________________________________________________________________

Вид__________________________________________________________________________

Структура вируса __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность ____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период_______________________________________________________________________

Клинические симптомы__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Лабораторная диагностика _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) _____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) _______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) __________________________________________________________________

ГЕПАТИТ D

Таксономия возбудителя:

Семейство____________________________________________________________________

Род__________________________________________________________________________

Вид__________________________________________________________________________

Структура вириона __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность ____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота______________________________________________________________________

Инкубационный период_____________________________________________________________________

Клинические симптомы__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Иммунитет___________________________________________________________________

Лабораторная диагностика ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) _____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) _______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) ________________________________________________________________

 

ГЕПАТИТ С

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Структура вириона __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность ____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции_____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период______________________________________________________________________

Клинические симптомы__________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Длительность болезни____________________________________________________________________

Иммунитет_________________________________________________________________

Лабораторная диагностика ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) _____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) _______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) __________________________________________________________

Подпись преподавателя__________________________________________________________

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ СПАРАВКА

АНТИМИКРОБНЫЕ ПРЕПАРАТЫ

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. В инфекционную больницу обратился мужчина с клиническими признаками гепатита. Больной являл­ся наркоманом. Какой исследуемый материал можно взять для проведения лабораторных исследований, чтобы подтвердить диагноз гепатита В? Какие методы лабораторного исследова­ния можно использовать?

Пример решения задачи

В инфекционную больницу поступил мужчина 20 лет с температурой 38 °С, жалобами на боли в правом под­реберье, иктеричностью склер. Больной является наркоманом. Возникло подозрение на гепатит В. Для подтверждения диагно­за был проведен ИФА в целях обнаружения HBsAg и антител к HBcAg. Учесть результат реакции, оформить протокол, сде­лать вывод.

Для учета результатов выделяются исследования планшеты с ИФА для серологической (обнаружение AT) и экспрессной (обнаружение АГ) диагностики гепатита В.

Вопросы. Подтвержда­ется ли диагноз гепатита В у обследуемого? Почему?

Решение. Студент учитывает данные ему результаты ис­следований, заполняет протокол и делает вывод: У обследуе­мого подтвержден диагноз гепатита В, так как у него обнару­жены антитела к HBcAg вируса гепатита В и выявлен HBsAg.

Лечебные препараты:

Антивирусные препараты первого поколения - аденинарбинозид, видарабин, ацикловир, рибовир, квинакрин.

• АЦИКЛОВИР - аномальный нуклеотид, который встраивается в геном вируса и репродукция прекращается.

• АДЕНИНАРАБИНОЗИД - антивирусный эффект обусловлен включением нуклеотида во вновь синтезируемую ДНК вируса. Данные препараты не нашли широкого применения.

• ИНТЕРФЕРОНЫ и его индукторы обладают иммуномодулирующим и противовирусным эффектом. Широко применяется реаферон и велферон -высококачественный препарат человеческого α - интерферона.

 

ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ:

I. ВАКЦИНЫ против ВГВ:

1. Отечественная вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая жидкая фирмы

"Комбиотех ЛТД".

2. Бельгийская вакцина—Engerix - В, фирмы "Смит Кляйн Бичем".

3. Американская вакцина—Recombivax НВ, производства фирмы "Мерк Шарп

и Доум".

4. Кубинская —ДНК рекомбинантная вакцина против гепатита В (Rec-HBsAg).

 

Наибольшее распространение получила вакцина "Энджерикс - В" (Engerix - В). Одна доза вакцины содержит 20 мкг HBs антигена, продуцируемого культурой дрожжевых клеток, полученных методом генной инженерии и имеющих ген, кодирующий формирование HBsAg ВГВ. Этот антиген очищается и адсорбируется на алюминии гидрохлориде. Вакцина обеспечивает высокий уровень антител, а также обладает высокой эффективностью.

Вакцинация проводится трехкратно с интервалом в 1 мес. Ревакцинацию проводят через 3-5 лет, т. е. вакцина создает надежный иммунитет в течение 5 лет. В первую очередь вакцинации подлежат лица группы риска.

II. Иммуноглобулин человека против гепатита В применяется для пассивной профилактики болезни.

Гепатит G

В 1966 году врач-хирург перенес вирусный гепатит, возбудитель которого ещё не был отнесен ни к одному известному вирусу - возбудителю гепатитов. По инициалам врача он был обозначен GB-антигеном. Дальнейшие исследования показали неоднородность этого вируса, похожие, но не идентичные вирусы выделяли из крови сывороточным гепатитом, а выделенный возбудитель получил название HGV или GBV-С. Методом ПЦР установлено, что РНК вируса часто обнаруживается у лиц, которым производили переливания крови и парентеральные вмешательства, у больных гемофилией, хроническими гепатитами В, С и D, в образцах коммерческой плазмы, предназначенной для приготовления препаратов крови.

Распространен везде. Частота обнаружения возбудителя в России составляет от 2%-до 8%.

Гепатит G передается посредством крови, точно так же, как и гепатит С. В рядах наркоманов эта болезнь имеет широкое распространение. Заражение происходит также при парентеральных вмешательствах, гемотрансфузиях. Заразиться можно при половом контакте и от зараженной матери ребенку вертикальным путем.

По клиническим проявлениям гепатит G очень схож с гепатитом С. Но для заболевания гепатита G совсем не характерно то, что присуще ГС, а именно, прогрессирующий инфекционный процесс с постепенным развитием ХГ, гепатокарциномы и цирроза печени. Обычно, инфекционный острый процесс проходит бессимптомно. Главным маркером, использующимся для диагностики гепатита G считается РНК HGV, которая выявляется методом ПЦР. В поздние сроки обнаруживаются Анти-HGV, тогда, когда РНК HGV исчезает из крови, и работают маркером выздоровления. Следствием острого ГG являются: формирование хронического гепатита с долгим обнаружением РНК HGV, персистирующей несколько лет с дальнейшим исчезновением впоследствии и синтезом анти-HGV; возможно, выздоровление с элиминацией РНК HGV и возникновением анти-HGV; также, может быть формирование долгого носительства HGV. Максимальный срок обнаружения РНК HGV доходит до 9-12 лет. Надо сказать, частота, с которой выявляют анти-HGV довольно велика, что подтверждает крайне редкое развитие хронизации при болезни гепатит G, по сравнению с гепатитом С.

Клиническое протекание хронической болезни гепатит G, в основном, носит легкий характер с низким коэффициентом повышения активности АлАТ на протяжении долгого времени. При хорошей ПЦР на вирус часто замечается повышение активности гамма-глутамилтранспептидазы и щелочной фосфатазы, что может говорить о том, что желчевыводящие протоки поражены. Морфологическая характеристика хронического Гепатита G схожа с изменениями, которые описаны для гепатита С. Пока, внепеченочных проявлений гепатита G зарегистрировано не было. На сегодняшний день нет точных сведений, сможет ли персистенция ВГG "запускать" выборочно аутоиммунные механизмы. HCV/HGV-инфекцию можно наблюдать очень часто, для нее характерны цирозогенность и прогрессирование инфекционного процесса. Углубленное обследование больных с наличием РНК HGV и ее отсутствием не показало каких-либо различий в биохимических, морфологических и вирусологических показателях. Это еще раз подтверждает: HGV не оказывает никакого влияния на протекание HCV-инфекции.

 

Гепатит F

Вирус гепатита f только начинает изучаться, поэтому сведений о нем в достаточном объеме пока не накоплено, а имеющиеся данные достаточно противоречивы. Всемирная организация здравоохранения еще в 1973 году приняла решение раздельно регистрировать вирусные гепатиты А и В. Так как ряд вирусов не подходил ни под одну, ни под другую группу, было решено гепатиты, вызываемые этими вирусами называть «ни А, ни В». Позже эти заболевания стали называться «ВГС и ВГЕ». На сегодняшний день хорошо изучены пять видов гепатита: А, В, С, D и E. Однако в результате клинических исследований был выявлен факт, что кровь некоторых людей, явно перенесших гепатит после переливания крови, остается серонегативной по отношению ко всем известным маркерам вирусного гепатита, что дает возможность предположить о существовании других его видов. В разных странах количество таких людей достигает 15-20%. Кроме этого некоторые лица, перенесшие лабораторно подтвержденные гепатиты хорошо изученных групп и выработавшие к ним иммунитет, вновь заболевали желтухой, которую невозможно было связать с группами A, B, C, D, E и G.

Таким образом, на сегодняшний день к группе вирусов, вызывающих гепатит F, относят два различных вируса. Один из них был выделен из донорской крови и обладал следующими свойствами:

· не растворялся в жирах;

• не вызывал характерных для гепатита С изменений в клетках печени;
• у шимпанзе, привитых от гепатита С и зараженных этим видом вируса, развивалось состояние сходное с гепатитом;

· заражение обезьян, не имеющих иммунитет к гепатиту С, не вызывало появление к нему антител.

Второй вид вируса был выделен из фекалий больного гепатитом, возникшим в результате гемотрансфузии. Свойства вируса были такими:

· он имел способность размножаться в монослойных культурах клеток;

· вызывал гепатит у макак-резусов;

· по своим свойствам напоминал аденовирус.

Симптомы: клиника этого заболевания сходна с клиникой других вирусных посттрансфузионных гепатитов. Органом мишенью для вируса f является печень. В результате разрушения ее клеток, нарушается функция, что приводит к поражению всего организма. Можно выделить следующие фазы течения болезни:

· инкубационная;

• преджелтушная;
• желтушная с периодами: нарастания желтухи, ее разгара и угасания;
• реконвалесценции;

· остаточных явлений.

Длительность каждой фазы зависит от дозы возбудителя, способа его проникновения в кровь, индивидуальных особенностей и генетической предрасположенности человека, наличием или отсутствием сопутствующих заболеваний, адекватностью и своевременностью лечения и т.д.

Симптомы гепатита F включают желтуху, лихорадку, асцит, увеличение печени и селезенки, изменение показателей крови (повышение уровня билирубина и печеночных ферментов), изменения в моче и кале, а также признаки общей интоксикации.

Лечение: комплекс лечебных мероприятий должен быть направлен на борьбу с интоксикацией, на восстановление клеток печени и улучшение ее работы, на поддержание других органов и систем. Используется щадящая диета, прием витаминов, гепатопротекторов, симптоматическая терапия. Эффективное этиологическое лечение гепатита F, т.е. непосредственно направленное на борьбу с этим вирусом, пока не разработано. Применяются препараты из группы интерферонов.

Вирус TTV (transfusion transmitted virus, Torque teno virus) был открыт в 1997 в сыворотке крови японского пациента с инициалами Т.Т. с посттрансфузионным гепатитом неясной этиологии.

TTV - это небольшой вирус без оболочки, содержащий циклическую ДНК. Это простоустроенный вирус, имеющий икосаэдрический тип симметрии. Размер вириона 30-50 нм. Содержит кольцевую однонитевую минус ДНК. Капсид состоит из белка VP1. Различают более 10 генотипов вирусов. Репродукция вирусов происходит, очевидно, в ядрах гомопоэтических клеток. Вирионы собираются в цитоплазме и выходят при лизисе клеток. Предположительным резервуаром клеток является печень. По геномной организации TTV схож с патогеном животных CAV (chicken anemia virus) из семейства Circoviridae. Таким образом, TTV является первым цирковирус-подобным вирусом, обнаруженным у человека. На сегодняшний день вирус отнесен к новому роду Anellovirus. Родственные TTV вирусы были найдены у кур, свиней, коров, овец, собак, тупайи и приматов, включая человекообразных обезьян.

Устойчив к факторам внешней среды. Предполагают, что TTV можно рассматривать как представителя нормальной микрофлоры человека. TTV-вирусемия распространена среди здоровых людей. Возможно участие вируса в поражениях печени (гепатит). В результате высокой изменчивости вируса, одновременного наличия в организме различных вариантов TTV происходит «ускользание» вируса от защитных факторов организма человека.

TTV вызывает долгую, практически пожизненную виремию у большинства людей независимо от возраста, состояния здоровья и других параметров. Инфекция носит персистирующий характер, реплицирующийся вирус присутствует в самых разных участках организма, включая костный мозг, лимфоидную ткань, легкие и печень.

Фактически от 70% до 90% всей мировой популяции человека являются носителями вируса TTV, и пока что вирус не был с уверенностью ассоциирован с каким-либо заболеванием, похоже обладая замечательной способностью приспосабливаться к своему хозяину. Интересно, что повышенная вирусная нагрузка отмечена у пациентов с тяжелой идиопатической воспалительной миопатией, раком или волчанкой. Активная репликация вируса также была обнаружена у детей с острыми респираторными заболеваниями.

Пациенты с гемофилией имеют высокий риск инфицирования GBV-C/HGV и TTV.

Основной путь передачи вируса - парентеральный, но не отрицается возможность фекально-орального распространения вируса и возможность передачи вируса половым путем. В группе риска находятся реципиенты компонентов крови, наркоманы, сексуальные партнеры, существует риск передачи вируса через бытовые контакты.

 

Занятие № 2.3.2

Кровяные вирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов В, С, D

 

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

 

1. Изучить биологические свойства возбудителей гепатитов В, С, D.

2. Изучить принципы вирусологической диагностики гепатитов В, С, D.

3. Научиться подбирать антимикробные препараты для идентификации,

лечения и профилактики гепатитов В, С, D.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

 

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

2. Основные симптомы заболеваний, вызываемых вирусами гепатитов В, С, D.

3. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость, иммунитет, механизм

передачи инфекций.

4. Принципы лабораторной диагностики гепатитов В, С, D.

5. Основы профилактики гепатитов. Препараты для диагностики,

лечения и профилактики.

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

• составлять алгоритм лабораторного обследования больного гепатитом;

• проводить учет и интерпретировать результаты вирусологических
исследований с целью диагностики гепатитов;

• классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:

• о правилах забора материала для исследования;

• об антигенной структуре возбудителей;

• о современных вакцинах для профилактики и лечебных препаратах;