Лабораторная диагностика чумы

БОЛЬНОЙ	УМЕРШИЙ
Материал для исследования: Пунктаты бубонов, мокрота, слизь из ротоглотки, отделяемое кожной язвы, кровь, моча, кал
Ускоренный анализ (экспресс-диагностика)
Бактериоскопия в световом микроскопе	Иммунологические методы	Молекулярно-генетические методы
Палочки овоидной формы, биполярной окраски при использовании метиленового синего Леффлера	Реакция иммунофлюоресценции, реакция непрямой гемагглютинации, ИФА, реакция нейтрализации антител, реакция нейтрализации антигена, реакция торможения пассивной гемагглютинации	Полимеразная цепная реакция: выявление специфических участков плазмид Yersinia pestis
Бактериологический метод
n Посев на питательные среды n Идентификация культуры: - оценка культурально-морфологических свойств - чувствительность к бактериофагам - чувствительность к антибиотикам - биохимические свойства - антигенный спектр - плазмидный профиль - молекулярное зондирование
Биологическая проба на животных (морские свинки, белые мыши)

Лабораторная диагностика сибирской язвы

БОЛЬНОЙ
Клиническая форма болезни
Локализованная	Генерализованная
Материал для исследования:
Содержимое везикул, язв, карбункула	Мокрота, кровь, моча, ликвор
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Бактериоскопический метод
Исследование мазков, окрашенных по Граму	Выявление капсул при окраске мазков метиленовым синим
Крупные грамположительные палочки с “обрубленными концами”, образующие цепочки	Капсула розового цвета, окружающая палочки, окрашенные в синий цвет
Бактериологический метод
n Посев на питательные среды (мясопептонный агар, мясопептонный бульон, кровяной агар) n Идентификация культуры: - оценка капсулообразования - отсутствие подвижности в препарате «висячая капля» - чувствительность к фагу - образование шарообразных клеток в виде “жемчужного ожерелья” на среде с пенициллином
Биологическая проба на животных (морские свинки, белые мыши)
Гибель животных в течение 1 суток Микроскопия мазков-отпечатков крови и органов, посев на МПА и МПБ
Кожно-аллергическая проба с антраксином
0,1 мл антраксина вводят внутрикожно на внутреннюю поверхность предплечья. Положительна с 5-го дня болезни – гиперемия, инфильтрат диаметром 8 мм и более, сохраняющийся до 48 часов

Лабораторная диагностика ботулизма

Объекты окружающей среды	Больной человек
Материал для исследования
Остатки подозрительных продуктов	Кровь, рвотные массы, промывные воды желудка
Содержание работы
Обнаружение ботулинического токсина
Реакция нейтрализации на экспериментальных животных
Бактериологический метод
n Посев на питательные среды в 4 флакона/пробирки (бульон Хоттингера или среды Кита-Тароцци) n Залить посевы слоем вазелинового масла толщиной 0,5 см n После посева флаконы/*пробирки прогреть: - Флакон №1 – 15 минут при 60^оС - Флакон №2 – 20 минут при 80^оС n Флаконы №3 и №4 не прогревают n Инкубация в термостате: - Флаконы №1 и №3 при 28^оС - Флаконы №2 и №4 при 35^оС
n Через 48 ч инкубации: - Флаконы №1 и №3 исследуют на Clostridium botulinum типов E и F - Флаконы №2 и №4 исследуют на Clostridium botulinum типов A, B, C n Из всех флаконов с соблюдением стерильности берут пробы культуральной жидкости, с которой ставят реакцию нейтрализации с поливалентной противоботулинической сывороткой типов A, B, C, E и F n В мазках, окрашенных по Граму, при росте возбудителя грамположительные палочки имеют форму теннисной ракетки
Если через 48 ч во флаконах/пробирках не обнаружены Clostridium botulinum и их токсины, то инкубацию в термостате продолжают, а исследование повторяют на 4, 6 и 10-е сутки. Если повторные исследования не выявили типичные по морфологии Clostridium botulinum и их токсины, то выдают отрицательный ответ

Постановка реакции нейтрализации для обнаружения

Ботулинических токсинов

Пробы	Исследуемый материал, мл	Смесь равных объемов моновалентных сывороток типов A, B, C, E и F	0,87% раствор натрия хлорида, мл
1-я пробирка	2,4	-	0,6
2-я пробирка	2,4	0,6	-

Примечание: Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют при комнатной температуре 30 минут, затем вводят 0,7-1,0 мл из каждой пробирки двум белым мышам массой 16-18 г. Наблюдение за животными проводят в течение 4 дней. Если мыши болеют или погибают раньше этого срока, ставят реакцию с моновалентными сыворотками. В присутствии ботулинического токсина погибают две контрольные мыши, которым вводили не смешанный с сыворотками фильтрат, подопытные мыши остаются живыми. Обычная картина болезни и гибели мышей: полное расслабление мышц, западение брюшной стенки, параличи и судороги перед смертью.

 

Пробы в количестве 2,4 мл	Противоботулинические сыворотки, мл	0,87% раствор натрия хлорида, мл
А	B	C	E	F
1-я пробирка	0,6	-	-	-	-	-
2-я пробирка	-	0,6	-	-	-	-
3-я пробирка	-	-	0,6	-	-	-
4-я пробирка	-	-	-	0,6	-	-
5-я пробирка	-	-	-	-	0,6	-
6-я пробирка	-	-	-	-	-	0,6