Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Количественное определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом
Принцип метода: Ионы меди в щелочной среде реагируют с белком с образованием комплекса фиолетового цвета. Оптическая плотность образующегося комплекса прямо пропорциональна содержанию белка в пробе.
Линейность метода: 10 – 150 г/л. Норма: 62 – 85 г/л. Общий белок в негемолизированной сыворотке сохраняет стабильность при комнатной температуре (18-25°С) в течение 7 дней, при температуре хранения 2-8°С в течение 1 месяца в плотно закупоренном флаконе.
Оборудование и реагенты: 1) Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 540 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 18-25°С; 2) Секундомер; 3) Автоматические пипетки на 20 мкл и 1000 мкл; 4) Сыворотка крови; 5) Физиологический раствор; 6) Реагент (гидроксид натрия – 600 ммоль/л, калий-натрий тартрат – 32 ммоль/л, сульфат меди – 12 ммоль/л, иодид калия – 30 ммоль/л); 7) Калибратор – калибровочный раствор общего белка, 80,0 г/л.
Проведение анализа
Перемешать тщательно содержимое пробирок и инкубировать при температуре 25°С в течение 10 минут. Измерить оптическую плотность опытной (Аоп) и калибровочной (Акалиб) проб против холостой пробы при длине волны 540 нм. Окраска раствора стабильна в течение 30 минут. Гемолиз и липемия влияют на результат, поэтому для таких проб анализ следует выполнять с бланком по пробе (20 мкл сыворотки смешивается с 1 мл физраствора). Измеряется оптическая плотность бланка против физраствора и ее значение вычитается из оптической плотности анализируемой пробы.
Расчет Содержание общего белка в сыворотке рассчитывают по стандарту (калибратор) по формуле:
где С – концентрация общего белка в анализируемой пробе, г/л; Аоп – оптическая плотность опытной пробы; Акалиб – оптическая плотность калибровочной пробы; Скалиб – концентрация общего белка в калибраторе.
При содержании общего белка в пробе свыше 150 г/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемую сыворотку следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.
Клинико-диагностическое значение: Изменения содержания общего белка в сыворотке крови происходят по причине: 1) снижения интенсивности биосинтеза белка в тканях; 2) усиленного распада тканевых белков; 3) нарушения водного баланса; 4) потери белка почками, с кровью. Гипопротеинемия наблюдается при нефротическом синдроме, синдроме мальабсорбции, заболеваниях кожи (ожог, экзема), массивных кровотечениях, задержке солей и воды (заболевания почек), неправильном питании и голодании. Нарушением синтеза белка, приводящему к снижению его концентрации в сыворотке крови, сопровождаются раковая кахексия, длительные воспалительные процессы. Гиперпротеинемия наблюдается при состояниях и болезнях, сопровождающихся дегидратацией организма (тяжелые травмы, понос, рвота, сахарный диабет). Она характерна также для хронических воспалительных заболеваний (ревматоидный артрит, диффузные болезни соединительной ткани – коллагенозы, цирроз печени) и острых воспалительных процессов в стадии острой фазы, наблюдается также при макроглобулинемии Вальденстрема.
Лабораторная работа № 2 Выделение глобулинов и альбуминов из яичного белка методом высаливания
Принцип метода: Добавляемые к раствору белка анионы и катионы нейтрализуют заряды в молекуле белка, в результате чего белок теряет гидратную оболочку, являющуюся одним из факторов его устойчивости, что приводит к осаждению белка. Характерной особенностью белков, полученных высаливанием, является сохранение ими неактивных биологических свойств после удаления соли, которое чаще всего проводят методом диализа.
Лабораторная работа № 3
|
||||||||||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; просмотров: 155; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.189.170.206 (0.009 с.) |