Методыисследованияживыхклетокитканей.

1. Прижизненное исследование с помощью просвечивающих микроскопов (на выведенной из брюшной полости брыжейке можно изучать циркуляцию крови в капиллярах, миграцию лейкоцитов).

2. Метод трансплантации (например, в смертельно облученный организм вводят колониеобразующие клетки красного костного мозга).

3. Исследование живых структур в культуре клеток или тканей

(метод требует создания оптимальных условий для жизни клеток — питательная среда, температура, стерильность).

4. Витальное окрашивание (в организм вводят краситель, способный избирательно окрасить требуемый тип клеток, например, макрофаги).

5. Суправитальное окрашивание (окрашивание клеток, толь ко что выделенных из организма, например, окрашивание ретиулоцитов крови).

Методы исследования фиксированных клеток и тканей.

В исследовательской и учебной работе фиксированные клетки и ткани используются значительно чаще. При этом объектами изучения являются:

1)гистологический препарат;

2)мазок (крови, костного мозга);

3)отпечаток (органа, например печени). Гистологический препарат может быть:

а) тотальным (в виде тонкой пленки — оболочка мозга, на которой изучают микроциркуляторное русло);

б) тонким срезом органа. Последний объект исследуется наиболее часто.

Техника приготовления гистологического препарата включает следующие операции:

Взятие материала.

Фиксация.

Промывание.

Обезвоживание.

Заливка в парафин.

Приготовление срезов.

Окрашивание срезов.

Заключение срезов в бальзам.

Взятие материала. Материал должен быть свежим, не подвергшимся аутолизу. Берут кусочек органа величиной не более1-2см3 (для ускорения фиксации лучше в виде тонкой пластинки), вырезают его с учетом строения органа и немедленно фиксируют.

Фиксация — важнейший этап в приготовлении препарата. Она предпринимается для сохранения прижизненного строения клеток и тканейипредназначенадляинактивацииферментовлизосом.

Различают химические (с помощью реактивов) и физические (замораживание, нагревание, высушивание, микроволновая обработка) способы фиксации.

В гистологической практике чаще используются химические способы или замораживание. В качестве химических фиксаторов широко используют простые фиксаторы (10% формалин,70-96%спирт) и сложные фиксаторы (смеси различных веществ, например, спирта, хлороформа, уксусной кислоты). Продолжительность фиксации зависит от размеров объекта и используемого фиксатора.

Промывка необходима для удаления фиксатора и проводится в проточной воде (от нескольких часов до1-хсуток).

Обезвоживанием подготавливают ткани к пропитыванию парафином. Для этого материал проводят через спирты восходящей крепости(50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 96%, 100%).

Заливка в парафин необходима для придания исследуемому образцу достаточной плотности (твердости), только при этом условии можно получить тонкие срезы. Пропитывание проводят в растворе парафина с хлороформом, затем — в расплавленном парафине.

Приготовление срезов. После охлаждения такой материал режут с помощью микротома на срезы толщиной5-10мкм. Срезы наклеивают на стекло и после их депарафинирования окрашивают гистологическими красителям

Окрашивание производится для выявления клеточных структур, которые не контрастны и без окраски не видны.

Для окрашивания используют, как правило, красители с разным рН (кислый и основной), имеющие разный цвет. Например, эозин и гематоксилин. Кислый краситель окрашивает цитоплазму в розовый цвет (оксифильно). Основной краситель окрашивает ядро в синефиолетовый цвет (базофильно). Такая двухцветная окраска делает структуры контрастными, хорошо видимыми и удобными для изучения.

Заключение срезов в бальзам. После обезвоживания и про-

светления на срез наносят каплю бальзама и накрывают покровным стеклом. В бальзаме между стеклами срез остается прозрачным и контрастным многие годы. В некоторых лабораториях сохраняются препараты, изготовленные более ста лет назад.

При необходимости срочного исследования объекта, например, во время операции, кусочек, взятый из раны больного, замораживают и режут в криостате, окрашивают, заключают в желатин и просматривают под микроскопом

 

БИЛЕТ № 3

 

1. Сердце. Развитие. Морфофункциональная характеристика оболочек стенки сердца. Регенераторные возможности тканей сердечной стенки. Проводящая система сердца. Волокна Пуркинье. Возрастные изменения сердца.

 

Сердце – основной орган, приводящий в движение кровь. Развитие: первая закладка сердца появляется в начале 3-й недели развития у эмбриона в виде скопления мезенхимных клеток. Позднее эти скопления превращаются в две удлиненные трубочки, впадающие вместе с прилегающими висцеральными листками мезодермы в целомическую полость. Мехенхимные трубочки сливаются – образуется эндокард. Та область висцеральных листков мезодермы, которая прилежит к этим трубочкам, называется миоэпикардиальными пластинками. Из них дифференцируются 2 части – внутренняя, прилежит к мезенхимной трубке – миокард: наружная - эпикард. В стенке сердца различают 3 оболочки: внутреннюю – эндокард, среднюю (мышечную) – миокард, наружную – эпикард. Эндокард напоминает по строению стенку сосуда. В нѐм выделяют 4 слоя: эндотелийна базальной мембране; подэндотелиальный слой из рыхлой соединительной ткани; мышечно-эластический слой, включающий гладкие миоциты и эластические волокна; наружный соединительнотканный слой.Сосуды имеются лишь в последнем из этих слоѐв. Остальные слои питаются путѐм диффузии веществ непосредственно из крови, проходящей через камеры сердца. В миокарде предсердий различают 2 мышечных слоя: внутренний продольный и наружный циркулярный. В миокарде желудочков - 3 слоя: относительно тонкие внутренний и наружный - продольные, прикрепляющиеся к фиброзным кольцам, окружающим предсердно-желудочковые отверстия; и мощный срединный слой с циркулярной ориентацией. Эпикард включает 3 слоя: а) мезотелий- однослойный плоский эпителий, развивающийся из мезодермы б) тонкую соединительнотканную пластинку, содержащую несколько чередующихся слоѐв коллагеновых и эластических волокон и кровеносные сосуды, в) слой жировой ткани. Васкуляризация. Венечные артерии имеют плотный эластический каркас, в котором четко выделяются внутренняя и наружная эластические мембраны. Гладкие мышечные клетки в артериях обнаруживаются в виде продольных пучков во внутренней и наружной оболочках. В основании клапанов сердца кровеносные сосуды у места прикрепления створок разветвляются на капилляры. Кровь из капилляров собирается в коронарные вены, впадающие в правое предсердие или венозный синус. Проводящая система обильно снабжена кровеносными сосудами. Лимфатические сосуды в эпикарде сопровождают кровеносные. В миокарде и эндокарде они проходят самостоятельно и образуют густые сети. Лимфатические капилляры обнаружены также в атриовентрикулярных и аортальных клапанах. Из капилляров лимфа, оттекающая от сердца, направляется в парааортальные и парабронхиальные лимфатические узлы. В эпикарде и перикарде находятся сплетения сосудов микроциркуляторного русла. Иннервация: В стенке сердца обнаруживается несколько нервных сплетений (в основном из безмиелиновых волокон адренергической и холинергической природы) и ганглиев. Наибольшая плотность расположения нервных сплетений отмечается в стенке правого предсердия и синусно-предсердного узла проводящей системы. Рецепторные окончания в стенке сердца (свободные и инкапсулированные) образованы нейронами ганглиев блуждающих нервов и нейронами спинномозговых узлов. Возрастные изменения. 3 периода изменения гистоструктуры сердца: период дифференцировки, период стабилизации и период инволюции. Дифференцировка гистологических элементов сердца заканчивается к 16—20 годам. Существенное влияние на процессы дифференцировки кардиомиоцитов оказывает заращение овального отверстия и артериального протока, которое приводит к изменению гемодинамических условий — уменьшению давления и сопротивления в малом круге и увеличению давления в большом. Отмечаются физиологическая атрофия миокарда правого желудочка и физиологическая гипертрофия миокарда левого желудочка. Количество миофибрилл прогрессивно увеличивается. В период между 20 и 30 годами сердце - в стадии относительной стабилизации. В возрасте старше 30—40 лет в миокарде обычно начинается некоторое увеличение его соединительнотканной стромы. При этом в стенке сердца, особенно в эпикарде, появляются адипоциты. Степень иннервации сердца также изменяется с возрастом. Максимальная плотность внутрисердечных сплетений на единицу площади и высокая активность медиаторов отмечаются в период полового созревания.В старческом возрасте уменьшается активность медиаторов и в холинергических сплетениях сердца.