Лабораторная диагностика гриппа

Грипп — острое инфекционное заболевание, проявля­ющееся общей интоксикацией и катаральными явлени­ями.

Возбудители гриппа — РНК-содержащие вирусы из семейства Orthomyxoviridae типа А, В и С.

Лабораторная диагностика гриппа включает экспресс-методы, выделение вируса и серологическое исследо­вание.

Для изучения используют смыв с носовой части глот­ки, отделяемое слизистой оболочки носовых ходов, кото­рое берут с помощью сухих или влажных тампонов. Тампоны помещают в пробирки, содержащие 2—5 мл буфера (рН 7,0—7,2) или делают отпечатки на стекле. Кроме того, вирус можно выделить из крови, спинно­мозговой жидкости, а также трупного материала (ку­сочки пораженных тканей верхних дыхательных путей, головного мозга и др.).

Экспресс-диагностика гриппа основана на выявлении специфического вирусного антигена в исследуемом мате­риале с помощью прямой и непрямой РИФ. При наличии вируса гриппа в клетках эпителия обнаруживается зеле­новато-желтое свечение.

Для выявления специфического гриппозного антигена можно также использовать РОНГА и РЭМА. Перспек­тивным методом экспресс-диагностики является РЭМА для индикации М-белка вируса гриппа.

Выделение вируса следует проводить как можно раньше, так как после 3-го дня болезни вероятность получения положительного результата резко уменьша­ется.

Для подавления бактериальной флоры исследуемый материал обрабатывают антибиотиками (500— 1000 ЕД/мл пенициллина и 200 ЕД/мл стрептомицина) и вводят по 0,2 мл его 10—11-дневным куриным эмбрио­нам в полость амниона и аллантоиса.

Материалом одной пробы заражают не менее пяти эмбрионов, которые инкубируют в течение 3—4 дней при температуре 37 °С.

После инкубации эмбрионы охлаждают в течение 2—4 ч при температуре 4 °С. Аллантоисную жидкость отсасывают шприцем или пастеровской пипеткой, амниотическую — шприцем с короткой иглой.

Накопление вируса в куриных эмбрионах обнаружи­вают с помощью РГА, для чего жидкости (аллантоисную и амниотическую) титруют и добавляют 1 % суспензии куриных эритроцитов.

Инфекционным материалом можно также заражать культуры клеток почек обезьян, эмбриона человека и другие, используя питательные среды без сыворотки. Однако эти методы употребляются реже, чем заражение куриных эмбрионов. Вирус выявляют с помощью РИФ, а также по ЦПД, РГ_адс с 0,4 % суспензией эритроцитов морской свинки.

Для идентификации вирусов применяют Р7Т_адс, РТГА, РСК, РЭМА, причем в РТГ_адс используют сыво­ротки с титрами не менее 1: 160.

Если выделенный вирус имеет измененную антиген­ную структуру, то РГГадс и РТГА с имеющимися специ­фическими сыворотками могут быть отрицательными. В таком случае используют РСК, выявляющую типоспецифические вирусные белки, не подвергающиеся ан­тигенной изменчивости.

Для идентификации вируса в куриных эмбрионах и тканевых культурах широко применяется РН.

Серологическое исследование подтверждает диагноз гриппа при нарастании титра антител в крови больных не менее чем в 4 раза.

Первую сыворотку берут у больного в остром периоде болезни (до 3—5-го дня), обычно одновременно со смы­вом из носовой части глотки, вторую — после 10-го дня болезни. Для одновременного изучения сывороток пер­вую из них хранят при температуре —20 °С.

Проводят РСК, РТГА, РЭМА, РРГ. Чтобы удалить неспецифические ингибиторы вируса гриппа, находящи­еся в сыворотках больных, их обрабатывают рецепторо-разрушающим энзимом. Для этого энзим в концентрации 100 ЕД/мл смешивают с сывороткой в соотношении, зависящем от титра фермента, и оставляют на 10—12 ч-при температуре 37 °С. Затем к этой смеси добавляют 3 объема 2,5 % раствора натрия цитрата, нагревают 30 мин при температуре 50 °С и добавляют 2 объема фосфатного буфера для получения конечного разведения сыворотки 1: 10.

Антитела у больных гриппом можно определять с помощью РН на куриных эмбрионах или культуре ткани почек обезьян. Экономично ставить РН на кусочках ткани хорионаллантоисной оболочки в скорлупках.