Фиксированные окрашенные препараты бактерий.

Фиксация имеет цель прикрепить микробы к стеклу, чтобы они не могли смыться при дальнейшей обработке. При этом микроорганизмы погибают, а у мертвых клеток нарушена целостность мембран, и, в результате они прокрашиваются лучше живых.

Чаще всего производят фиксацию жаром, путём быстрого трехкратного проведения предметного стекла мазком к верху над пламенем горелки в верхней его части. Можно применять фиксацию этиловым спиртом в течение 15-20 минут. Хорошо приготовленный мазок должен после фиксации выглядеть на предметном стекле как едва заметный след.

Остывший фиксированный препарат затем заливают раствором краски на определённое время. В качестве красителя применяют метиленовый синий или фуксин. После выдержки препарата с краской 30 сек., краску смывают лёгкой струёй воды. При этом удаляются излишки краски, а краска адсорбированная протоплазмой клеток, остаётся. Промытый препарат просушивают осторожно промокая фильтровальной бумагой и на сухую поверхность наносят каплю иммерсионного масла.

Для рассмотрения бактерий под микроскопом приготовить фиксированные препараты, положить препарат на предметный столик и исследовать его под микроскопом. При выполнении работы все препараты, рассматриваемые под микроскопом, должны быть зарисованы и под ними сделаны соответствующие записи и выводы (название микроорганизмов, описание морфологических признаков, увеличение микроскопа).

 

Контрольные вопросы.

1. Что мы понимают под морфологическими признаками микроорганизмов?

2. Где выращивают картофельную и сенную палочку?

3. В каких продуктах можно увидеть молочно-кислые бактерии?

4. С какой целью проводится фиксация микроорганизмов?

5. Как осуществляется фиксация жаром?

6. Назовите основные части микроскопа.

7. Назовите особенности работы с объективом увеличением в 100 раз.

8. Назовите основные формы клетки бактерий.

Лабораторная работа № 2.

Тема: Изучение морфологических признаков плесневых грибов и дрожжей.

Цель: Изучение строения тела грибов и возможностей отличия их друг от друга, изучения формы дрожжевой клетки.

Материальное обеспечение: микроскопы, чашки Петри с выращенными микроорганизмами, реактивы.

Плесневые грибы — это чаще всего многоклеточные микроорганизмы, достигающие размеров нескольких миллиметров и видимых простым глазом.

Однако исследование плесневых грибов возможно только с помощью микроскопа. Выращивают плесневые грибы обычно на поверхности питательных сред, т. к. они растут с обязательным доступом воздуха. В условиях лаборатории их выращивают в чашках Петри на плотных питательных средах. Чашку Петри с выращенными грибами помещают на столик микроскопа и, используя объектив с увеличением в 10 и 40 раз, изучают плесневые грибы. В микроскоп можно увидеть непосредственно грибницу, воздушные гифы и плодовые тела.

По форме плодовых тел можно определить вид плесневых грибов. Кроме того каждый гриб даёт характерные колонии при выращивании, отличающиеся чаще всего цветом, что является дополнительным фактором для развития различных видов плесневых грибов.

В условиях лаборатории чаще всего растут мукоровые грибы, пеницилловые, аспергилловые грибы и др.

Мукоровые грибы — образуют на поверхности питательных сред серый ватообразный налёт, а при рассмотрении под микроскопом видны характерные шаровидные вздутия чёрного цвета (спорангии), в которых находятся органы размножения (спорангиеспоры).

При обнаружении данного вида гриба можно сделать рисунок, определить к какому классу грибов он относится и дать его практическое применение.

Пеницилловые грибы — на поверхности питательных сред образую колонии зелёного цвета. В микроскопе напоминают короткие кисти, состоящие из органов размножения (конидий). Нужно рассматривать край колонии, иначе рисунок будет густым и его будет трудно рассматривать.

 

 

Род Oidium (кл. Дейтеромицеты) характеризуетсяналичием сильно разветвленного мицелия, гифы которого легко расспадаются на оидии – отдельные клетки, служащие для бесполого размножения. Характерным представителем является молочная плесень, часто встречается в виде бархатистой пленки на поверхности кисломолочных продуктов, вызывая их порчу.

 

 

Ход работы:

Изучение плесневых грибов.

Чашку Петри с выращенными грибами помещают на столик микроскопа и с помощью объектива с увеличением в 10 раз находим изображение.

 

Изучение дрожжей.

Для изучения морфологии дрожжей из дрожжевой суспензии готовим препарат «раздавленная капля» и рассматриваем форму дрожжевой клетки. Для рассмотрения можно использовать хлебопекарные дрожжи.

Все рассматриваемые препараты нужно зарисовать и сделать необходимые пояснения и выводы к ним.

Дрожжевые клетки содержат запасное азотистое вещество метахроматин (волютин), который содержится в клетках в форме полужидких зёрен. Для их обнаружения препарат фиксируют, окрашивают в течение 0,5-1 мин. карболовым фуксином Циля. Сливают краситель, промывают водой и обесцвечивают препарат 1% раствором серной кислоты в течении 20-30 сек. Сливают кислоту, препарат промывают водой и окрашивают слабым раствором метиленового синего (1:40) в течении 1-2 мин. При окрашивании метахроматин в клетках приобретает красный цвет, а протоплазма - синий.

Включения жира встречаются в клетках многих микроорганизмов. Их легко обнаружить при окраске клеток Суданом III. Для этого каплю культуры на предметном стекле смешивают с каплей краски. При исследовании под микроскопом, протоплазма клеток будет бесцветной, а капля жира окрашенной в красный цвет.

Микроскопируют препараты с сухой или иммерсионной системой.

После проведения опытов необходимо сделать выводы по работе.

 

Вопросы для самопроверки:

 

1.Опишите метод определения метахроматина?

2.Почему дрожжи называются сахарными грибами?

3.Основное свойство дрожжей?

4.Объсните назначение плодовых тел?

5.Укажите основные отличия в строении пенициловых и аспергиловых грибов?

6.Какую роль могут играть мицелиальные грибы в пищевых производствах?

Лабораторная работа № 3.

Тема: Приготовление питательных сред. Выполнение посевов и пересевов микрoорганизмов

Цель: 1. Изучить методику приготовления питательных сред.

2. Приобретение практических навыков по технике посевов и пересевов микрoорганизмов

Материальное обеспечение:

1. Картофель. 2. Капуста. 3. Молоко. 4. Глюкоза. 5.Пентон. 6.Соляная кислота. 7.Желатин. 8. Сахар. 9. Сухие питательные среды заводского приготовления. 10. Пробирки. 11. Фильтровальная бумага. 12. Весы технические. 13. Конические колбы на 200см³, 14. Вата. 15. Чашка Петри. 16. Автоклав. 17. Спиртовки. 18. Фосфорнокислый калий. 19. Сернокислый магний. 20. Марля.

21. Универсальная индикаторная бумага.