Реакции обнаружения аминокислот, белков

Лабораторная работа №5

Тема:

РЕАКЦИИ ОБНАРУЖЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ, БЕЛКОВ

И ИХ ВЫЯВЛЕНИЕ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ

Цель: Отработать умения экспериментально исследовать свойства аминокислот и белков.

Опыт № 1

Нингидриновая проба

Реакция характерна для α-аминокислот и их остатков. Растворы α- аминокислот и белков при нагревании с нингидрином приобретают фиолетовое окрашивание.

Методика эксперимента

В одну из двух пробирок прилить 3 - 5 капель 1 % раствора яичного белка, в другую

3 – 5 капель 0,1 % раствора глицина. В каждую пробирку наливают по 2 – 3 капли 0,1 % водного раствора нингидрина. Содержимое пробирок осторожно нагреть. Описать наблюдения, сделать выводы.

 

Наблюдения__________________________________________

Выводы___ ___________________________________________

Опыт 2

Обнаружение серосодержащих α -аминокислот

(реакция Фоля)

Реакция Фоля позволяет обнаружить в белке аминокислоты, содержащие слабосвязанную серу, например:

Методика эксперимента

В пробирку поместить 5 – 10 капель раствора яичного белка и вдвое больший объем 10 % раствора гидроксида натрия. Содержимое пробирки перемешать, нагреть до кипения (1 – 2 мин). К полученному щелочному раствору добавить 3 – 5 капель 10 % ацетата свинца и вновь прокипятить. Описать наблюдения.

Химизм процесса

При кипячении белка со щелочью α-содержащие аминокислоты образуют сульфид натрия.

Интенсивность окраски зависит от количества серосодержащих аминокислот в белке и от концентрации белка в растворе.

Наблюдения__________________________________________

Выводы___ ___________________________________________

Опыт №3

Амфотерные свойства α-аминокислот

Амфотерность α-аминокислот обусловлена наличием в молекулах карбоксильной и аминогрупп, за счет которых они образуют цвиттер-ион:

Методика эксперимента

а) В одну пробирку поместить 3 – 5 капель 1 % раствора α-аланина и добавить по каплям

0,1 % раствор хлороводородной кислоты, подкрашенной конго.

б) Во вторую пробирку поместить 3 – 5 капель 1 % раствора α -аланина и по каплям добавить 0,1 % раствора гидроксида натрия, подкрашенного фенолфталеином. Запасать наблюдения.

Химизм процесса

Наблюдения__________________________________________

Выводы___ ___________________________________________

Опыт №4

Реакция глицина с формальдегидом

Реакция позволяет защитить аминогруппу и используется для количественного определения карбоксильных групп в α-аминокислотах путем кислотно-основного титрования.

Методика эксперимента

В пробирку поместить 5 капель 1 % раствора глицина и добавить 1 каплю метилового красного, раствор окрашивается в желтый цвет. К полученной смеси добавляют 3 – 5 капель формалина. При этом происходит изменение окраски.

Химизм процесса

Блокируя аминогруппу формальдегид одновременно освобождает карбоксильную группу, которую далее можно анализировать методом титрования щелочью.

Наблюдения__________________________________________

Выводы___ ___________________________________________

 

Опыт №5

Обнаружение пептидной связи

и образование комплексной соли глицина

Пептидную или белковую макромолекулу формально можно представить как продукт поликонденсации α-аминокислот, протекающей с образованием пептидной (амидной) связи между мономерными звеньями.

Методика эксперимента

В две пробирки прилить 3 – 5 капель 1 % раствора сульфата меди, добавить по каплям 10 % раствор гидроксида натрия до образования осадка. Далее в одну из двух пробирок приливают по каплям 1 % раствор глицина, а во вторую – раствор белка до растворения.

Наблюдения__________________________________________

Выводы___ ___________________________________________

Опыт №6

Методика эксперимента

В пробирку наливают 10 – 15 капель концентрированной азотной кислоты и, наклонив пробирку под углом 45°, осторожно, по стенке пробирки, спускают из пипетки равный объем 1 % раствора белка. На границе двух слоев жидкости образуется осадок белка в виде пленки.

Сущность процесса

Белок при взаимодействии с концентрированной минеральной кислотой выпадает в осадок, вследствие нарушения вторичной, третичной и четвертичной структуры. Этот процесс называется денатурацией. Осаждение белка происходит под действием органических растворителей, при кипячении.

Наблюдения__________________________________________

Выводы___ ___________________________________________

Опыт №7

Реактивы

1. 10% раствор гидроксида натрия
2. 1% раствор сульфата меди

Методика эксперимента

К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10% раствора гидроксида натрия и 1 каплю 1% раствора сульфата меди.

 

Наблюдения

Выводы

_____________________________________________________________________________

Реактивы

1. Концентрированный раствор аммиака
2. 2% аммиачный раствор нитрата серебра

Методика эксперимента

К 10 каплям гидролизата добавляют по каплям концентрированный раствор аммиака до щелочной реакции (проверить по индикаторной бумажке, опущенной в пробирку), затем 10 капель 2% аммиачного раствора нитрата серебра. При стоянии через 3-5 минут выпадает рыхлый осадок серебряных соединений пуриновых оснований (аденина и гуанина), окрашенный в светло-коричневый (бурый) цвет.

 

Наблюдения

Выводы

 

Реактивы

1. 10% раствор гидроксида натрия
2. 7% раствор сульфата меди

Методика эксперимента

К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10% раствора гидроксида натрия и 1-3 капли 7% раствора сульфата меди до появления неисчезающей мути гидроксида меди (II); перемешивают. При нагревании на водяной бане до кипения выпадает желтый осадок гидроксида меди (I) или красный осадок оксида меди (I).

 

Наблюдения

Выводы

Реактивы

1. Молибденовый реактив

Методика эксперимента

К 10 каплям гидролизата приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят.
При этом жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. Пробирку сразу охлаждают в струе холодной воды. На дне пробирки появляется кристаллический лимонно-желтый осадок фосфорно-молибденово-кислого аммония.

 

Наблюдения

Выводы

 

Лабораторная работа №5

Тема:

РЕАКЦИИ ОБНАРУЖЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ, БЕЛКОВ