Определение групп крови системы аво.

 

Групповая принадлежность крови определяется реакцией агглютинации при помощи стандартных гемагглютинирующих сывороток или цоликлонов.

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ СТАНДАРТНЫМИ ГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМИ СЫВОРОТКАМИ.

 

Стандартные гемагглютинирующие сыворотки (из крови доноров или ретроплацентарной крови) поступают в ампулах по 2 мл. Перед определением следует убедиться в наличии на этикетке ампулы обозначения:

группы сыворотки,

срока годности,

номера серии

наименования учреждения его изготовившего.

Срок годности сыворотки- 4 месяца со дня изготовления. Если в ампулах с сыворотками обнаруживаются хлопья или взвесь, то они для использования не пригодны, несмотря на не истекший срок. Для удобства пользования сыворотка окрашивается в различные цвета.

Сыворотка 1-й группы не окрашивается,

2-й группы - окрашивается в голубой цвет,

3-ей группы в розовый,

4-ой группы в желтый.

Аналогичного цвета полосами маркируются ампулы. Ампулы хранятся в холодильнике при температуре +4^о-+6^о С. Допускается хранение открытых ампул 3-4 дня в холодильнике при условии, если горлышко заклеивается лейкопластырем или закрывается ваткой.

Определение группы крови проводится при температуре +15⁰ - +25⁰С на маркированной плоскости (тарелке) белого цвета, где записывается фамилия лица, у которого определяется кровь, согласно международной классификации маркируются точки нанесения сыворотки. Используются стандартные сыворотки двух серий групп О(I), А(II), В(III). После их нанесения получается шесть капель, расположенных в два ряда в следующем порядке: О(I), А(II), В(III). Каждая сыворотка наносится своей пипеткой. Исследуемая кровь углами предметного стекла или стеклянными палочками вносится в сыворотку в количестве в десять раз меньшем и тщательно перемешивается. Можно перемешивать кровь с сывороткой одним и тем же углом предметного стекла (или стеклянной палочкой), но в этом случае после каждого перемешивания необходимо промывать стекло в воде и насухо вытирать. За ходом реакции, в общей сложности, наблюдают не менее 5-ти минут, периодически покачивая тарелку. В лунки, где к третьей минуте наблюдения произошла агглютинация, вносят по капле физ.раствора и наблюдают еще две минуты. Добавление физиологического раствора не разрушает истинной агглютинации и позволяет отдифференцировать ее от псевдоагглютинации, обусловленной самопроизвольным склеиванием эритроцитов в монетные столбики. Результат оценивается по наличию агглютинации. Эритроциты группы О(I) не содержат антигенов и в реакцию агглютинации не вступают. Эритроциты группы А(II) не дают агглютинации только с сывороткой своей группы, эритроциты В(III) также не дают агглютинации только с сывороткой своей группы. Если во всех сыворотках произошла агглютинация, то для исключения неспецифической панагглютинации и подтверждения, что это эритроциты IV группы крови, следует дополнительно исследовать их стандартной сывороткой группы АВ (IV). Для этого используется одна сыворотка, исследование проводится с соблюдением всех выше указанных условий. Сыворотка группы АВ(IV) не содержит никаких антител, а поэтому не должна давать агглютинации. (таблица 1). При определении групп крови следует обратить особое внимание на сроки чтения результата - они не должны быть менее 5-ти минут. Так разновидность второй группы крови А(II) дает агглютинации, как правило, раньше чем обычно - к исходу 3-4-ой минуты.

 

Таблица 1.

Результат реакции с изогемагглютинирующими сыворотками группы	Исследуемая кровь принадлежит к группе
0аb(I)	Аb(II)	Ва(III)	АВ(IV)
-	-	-	-	0(I)
+	-	+	-	А(II)
+	+	-	-	B(III)
+	+	+	-	AB(IV)

 

Оценка результатов определения групп крови при помощи стандартных гемагглютинирующих сывороток.

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - её отсутствие.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ АВ0

МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ

 

Принимая во внимание высокую активность и авидность реагентов Цоликлон, а также полную их стандартность, для каждого определения группы крови достаточно применять по одной серии реагентов анти-А и анти-В. Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на планшет или пластинку по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А и анти-В. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле (0,01 мл). После смешивания реагентов и крови за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2,5 мин. Оценка результатов реакции агглютинации с Цоликлонами анти-А и анти-В представлена в таблице 2, в которую также включены результаты определения агглютининов сыворотке (плазме) доноров с помощью стандартных эритроцитов

 

Таблица 2

Реакция исследуемых эритроцитов с цоликлонами	Исследуемая кровь принадлежит к группе
анти-А	анти-В
-	-	0(I)
+	-	A(II)
-	+	B(III)
+	+	AB(IV)

 

1. Агглютинации нет (-) ни с Цоликлоном анти-А, ни с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты не содержат антигенов А и В, и кровь принадлежит к группе 0 (I). Это подтверждается наличием агглютининов α и β в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами групп А (II) и В (III).

2. Агглютинация (+) наблюдается только с Цоликлоном анти-А. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только антиген А, и кровь принадлежит к группе А(II). Это подтверждается наличием агглютининов β в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами группы В(III).

3. Агглютинация (+) наблюдается только с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат только антиген В, и кровь принадлежит к группе В (III). Это подтверждается наличием агглютининов α в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам положительной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами группы А(II).

4. Агглютинация (+) наблюдается как с Цоликлоном анти-А, так и с Цоликлоном анти-В. Следовательно, исследуемые эритроциты содержат оба антигена (А и В), и кровь принадлежит к группе АВ(IV). Это подтверждается отсутствием агглютининов α и β в исследуемой сыворотке (плазме) по результатам отрицательной реакции агглютинации со стандартными эритроцитами групп А (II) и В (III).

С целью исключения аутоагглютинации, которая может наблюдаться у некоторых больных (миеломная болезнь, ожоговая болезнь), а также в пуповинной крови новорожденных, в случае установления группы крови АВ (IV) необходимо произвести контрольное исследование: одну каплю (0,1 мл) изотонического раствора хлористого натрия смешать с маленькой каплей (0,01 мл) исследуемой крови. Реакция агглютинации должна ОТСУТСТВОВАТЬ.

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ АВО

ПЕРЕКРЕСТНЫМ СПОСОБОМ.

 

Для выполнения этого способа требуется то же оснащение, что и для определения групп крови с помощью стандартных сывороток. Дополнительно надо иметь стандартные эритроциты группы А(II), В(III). Стандартные эритроциты готовятся из крови резус-отрицательных доноров. Требования, предъявляемые к этикеткам и условия те же, что для стандартных сывороток. Длительность хранения 2-3 суток при температуре +4^о - +8^о С.

Техника определения следующая: к нанесенным в два ряда стандартным сывороткам снизу дополнительно наносят ряд стандартных эритроцитов А (II), В (III). От исследуемого кровь забирается в пробирку. Ей дают отстояться. Затем к стандартным эритроцитам добавляют сыворотку исследуемой крови, а в стандартные сыворотки вносят эритроциты исследуемой крови. Наблюдение за реакцией проводят в течение 5-ти минут. Через 3 минуты в каждую каплю, где наступила агглютинация, добавляют каплю физиологического раствора, продолжая наблюдение до истечения 5-ти минут. Результаты реакций, полученные при помощи стандартных эритроцитов и стандартных сывороток должны совпадать, т.е. указывать на содержание агглютиногенов и агглютининов, соответствующих одной и той же группе крови.