Лабораторная диагностика гепатита В

Лабораторная диагностика ВГВ построена на выявлении специфических для ВГВ антигенов и антител в крови пациента.

Важнейшими серологическими маркерами при постановке диагноза вирусного

Гепатита В являются: HBsAg, HBeAg, анти- HBs, анти- НВс и анти- НВе иммуноглобулины. Через 3-5 недель после заражения вирусом гепатита В и за 4-5 недель до проявления клинической картины в сыворотке крови людей обнаруживается поверхностный антиген вируса - HBsAg (австралийский антиген). Выявление HBsAg свидетельствует об острой или хронической инфекции. Антитела против этого антигена появляются в сыворотке крови через 2-5 месяцев после начала заболевания, их обнаружение может свидетельствовать о ранее перенесенной инфекции.

Лабораторная диагностика гепатита В острой стадии осуществляется путем индикации HBsAg в сыворотке крови больных. Для этого используют наиболее чувствительные серологические реакции: иммуноферментный анализ (ИФА), реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) и радиоиммунный анализ (РИА).

При острой форме заболевания в крови определяются HBsAg, HBeAg и IgM анти-НВс и HBs.

При хронической форме заболевания определяются HBsAg, высокие титры антител — анти-НВс IgG и анти-HBs IgG.

Провирус ВГВ при хронической форме заболевания выявляется с помощью поли-меразной цепной реакции. Чувствительность метода составляет 10-100 молекул ДНК ВГВ в 1 мл. С помощью метода встречного иммуноэлектрофореза антигены вируса выявляются в 70% случаев, а с помощью реакции преципитации в геле - в 55-60%.

Основное место в диагностике гепатита В занимает ИФА, дающая положительный результат исследований в 90-95% случаев.

В последнее время применяют метод микроиммунофильтрации, который используется для экспресс - диагностики. Принцип основан на селективной фильтрации микрочастиц. Окрашенные микрочастицы, покрытые антигенами или антителами, служат визуальным сигналом для учета результата реакции. Присутствие соответствующего антитела или антигена в образце исследуемой пробы приводит к агглютинации микрочастиц. Способность агглютинированных частиц задерживаться на фильтре указывают на положительный результат тестируемого образца.

Независимо от присутствия в крови HBs-Ag, анти-НВс обнаруживается во всех случаях при возникновении острого заболевания гепатита В. Наличие анти-НВс относящихся к классу IgM достоверно свидетельствуют об острой форме гепатита В, а анти-НВс класса IgG являются маркером перенесенной в прошлом инфекции.

В лабораторной диагностике, наряду с серологическим выявлением вирусных антигенов или антител, используется метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), который делает возможным определение ДНК вируса гепатита В в сыворотке крови и в гепатоцитах.

 

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕПАТИТА Д

Лабораторная диагностика дельта-инфекции основывается на выявлении в ИФА антител к антигену вируса гепатита дельта (HDAg, анти- HDV) в сыворотке при одновременной положительной реакции на HBsAg.

HDAg может быть обнаружен иммунно-гистохимической реакцией в печеночных клетках; PHK-HDV определяется в сыворотке крови методом гибридизации нуклеиновых кислот или ПЦР.

Провирус ВГD при хронической форме заболевания выявляется с помощью ПЦР. Чувствительность метода составляет 10-100 молекул ДНК ВГD в 1 мл. С помощью метода встречного иммуноэлектрофореза антигены вируса выявляются в 70% случаев, а с помощью реакции преципитации в агаре - в 55-60%.

 

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕПАТИТА С

 

Предварительный клинический диагноз ВГС основывается на исключении вирусного гепатита А и вирусного гепатита В. Окончательный диагноз ставится на основании лабораторных исследований.

Специфические серологические методы диагностики гепатита С в настоящее время разрабатываются.

В отдельных случаях выявление антител к антигенам HCV может дополняться определением РНК вируса в сыворотке крови больных с помощью постановки ПЦР. Так можно обнаружить HCV вскоре после инфицирования. В Тюмени лабораторная диагностика ВГС этими методами проводится с 1989.

Диагностика заболеваний проводится в зависимости от клинических проявлений болезни. При острой инфекции с помощью ИФА в сыворотке выявляют циркулирующие антигены и иммуноглобулины класса М к ВГС. С помощью иммуноблоттинга устанавливается антигенная структура ВГС, циркуляции его в крови.

При хронической форме инфекции вирус гепатита С в крови находится в меньшей концентрации и диагноз ставится по выявлению в крови IgG к ВГС. Вирус при этой форме находится в клетках, поэтому РНК можно определить с помощью ПЦР.

ПЦР в настоящее время является единственным высокочувствительным методом диагностики острого ВГС и выявления больных с хроническим гепатитом.

 

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

 

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции проводится на основании комплексного обследования больного: клинического, выявления специфических антител в крови, выделения вируса из исследуемого материала путем заражения культур клеток (Т-хелперов), идентификации вирусных антигенов с помощью иммуноблоттинга, по обратнотранскриптазной активности, выявлению провируса в инфицированных клетках, по состоянию иммунной системы организма.

Способность вируса поражать клетки, имеющие СД-4 рецептор, позволяет проводить косвенную диагностику СПИДа на основании иммунного статуса организма. В здоровом организме имеется постоянное соотношение между рецепторами клеток СД 4 и СД 8. Этот показатель у здорового человека составляет 2,0 и более. Диагностическое, и особенно, прогностическое значение имеет показатель количество Th в 1 мл крови больного СПИДом и соотношение Th/Ts.

Если отношение Th/Ts равно 2 и более, то человек здоров. При снижении этого показателя до 0,5-легкое течение болезни и возможны оппортунистические инфекции, то есть заболевание, указывающее на наличие ВИЧ-инфекции. При значении Th/Ts от 0,2 до 0,5- регистрируется средней степени тяжести заболевание. Снижение этого показателя до 0,2 и ниже наблюдается при тяжелом течении болезни.

 

 

Зависимость между количеством Тh в 1 мл крови больного и процентом выживаемости больных СПИДом:

 

Процент выживаемости больных со СПИДом	Количество Т-хелперов в 1 мл
Здоровый человек
90%	Более 300
50-60%	100-300
20%	Менее 100

 

Маркеры гепатитов с парентеральным механизмом передачи инфекции

Возбудитель	Маркеры	Диагностическое значение
Вирус НВ	HBsAg	Положительный в большинстве случаев острого или хронического гепатита
	HBcAg	В сыворотке обычно не определяется
HBeAg	Транзиторно положительный при репликации вируса
анти-HBc (IgM, IgG)	Положительные в случае острой и хронической инфекции и у носителей – маркеров HBV-инфекции; не протективные; анти- HBc IgM отражают репликацию вируса
анти-HBe	Транзиторно позитивные при реконвалесценции, при некоторых формах хронической инфекции и у носителей, не протективные, отражают низкую инфекционность
анти-HBs	Становятся позитивными в позднюю фазу реконвалесценции в большинстве острых случаев, протективные.
preS1Ag	Маркер инфекционности и высокого риска вертикальной передачи НВV
анти-preS2	Маркер выздоровления после HBV-инфекции высокой эффективности
Вирус НС	анти-HCV	Становятся позитивными через 5-6 недель после появления клинических симптомов; серопозитивные лица должны рассматриваться как зараженные (как инфицированные)
Вирус НД	ДельтаG анти-HDV (IgM илиIgG)	Указывают на инфицированность; не протективные

ЕСЛИ В КРОВИ: HBsAg – носительство HBsAg + HBcAg + IgM – острая стадия болезни HBsAg + HBcAg + IgG – хроническая стадия болезни

АНТИМИКРОБНЫЕ ПРЕПАРАТЫ

ЛЕЧЕБНЫЕ ПРЕПАРАТЫ:

Антивирусные препараты первого поколения - аденинарбинозид, видарабин, ацикловир, рибовир, квинакрин.

• АЦИКЛОВИР - аномальный нуклеотид, который встраивается в геном вируса и репродукция прекращается.

• АДЕНИНАРАБИНОЗИД - антивирусный эффект обусловлен включением нуклеотида во вновь синтезируемую ДНК вируса. Данные препараты не нашли широкого применения.

• ИНТЕРФЕРОНЫ и его индукторы обладают иммуномодулирующим и противовирусным эффектом. Широко применяется реаферон и велферон -высококачественный препарат человеческого α - интерферона.

 

ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ:

I. ВАКЦИНЫ против ВГВ:

1. Отечественная вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая жидкая фирмы

"Комбиотех ЛТД".

2. Бельгийская вакцина—Engerix - В, фирмы "Смит Кляйн Бичем".

3. Американская вакцина—Recombivax НВ, производства фирмы "Мерк Шарп

и Доум".

4. Кубинская —ДНК рекомбинантная вакцина против гепатита В (Rec-HBsAg).

 

Наибольшее распространение получила вакцина "Энджерикс - В" (Engerix - В). Одна доза вакцины содержит 20 мкг HBs антигена, продуцируемого культурой дрожжевых клеток, полученных методом генной инженерии и имеющих ген, кодирующий формирование HBsAg ВГВ. Этот антиген очищается и адсорбируется на алюминии гидрохлориде. Вакцина обеспечивает высокий уровень антител, а также обладает высокой эффективностью.

Вакцинация проводится трехкратно с интервалом в 1 мес. Ревакцинацию проводят через 3-5 лет, т. е. вакцина создает надежный иммунитет в течение 5 лет. В первую очередь вакцинации подлежат лица группы риска.

П. Иммуноглобулин человека против гепатита В применяется для пассивной профилактики болезни.

 

 

 

Занятие № 21