![]() Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву ![]() Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Окраска кислотоустойчивых микробов
Кислотоустойчивость микробов зависит не только от наличия в них значительного количества липидов (около 36%), но и от ряда других химических и физических факторов. Так, например, установлено, что при нарушении целостности фиксированных клеток возбудителя туберкулеза путем растирания их между стеклами эти микробы теряют кислотоустойчивость. Окраска по методу Циль-Нильсена 1. Фиксированный на пламени мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовый раствор фуксина и подогревают; при появлении паров прекращают нагревание и оставляют краску на препарате еще на несколько минут (2—3 минуты). Дав препарату остыть, удаляют пинцетом бумажку и промывают мазок водой. 2. Обесцвечивают препарат 5—10% водным раствором серной кислоты в течение 3—5 секунд (до желтоватого оттенка мазка). Вместо серной кислоты можно применить 5% раствор азотной или 3% раствор соляной кислоты. 3. Мазок тщательно промывают водой. 4. Споласкивают 96°спиртом.
5. Снова промывают водой. 6. Докрашивают в течение 3—5 минут леффлеровской метиленовой синькой или водным раствором (1:1000) малахитовой зелени или метиловой зелени. 7. Краску смывают водой, препарат высушивают. Микроскопическая картина: туберкулезные палочки — рубиново-красные, остальные, за исключением возбудителя паратуберкулеза, кислото- и спиртоустойчивых сапрофитов — синие. Для обесцвечивания мазков при окраске по Циль-Нильсену вместо растворов кислот и спирта особо рекомендуется применение солянокислого алкоголя (соляной кислоты 3 мл + 96° спирта 97 мл) до слабо заметного розоватого оттенка препарата. После этого мазок ополаскивают водой и докрашивают метиленовой синькой по основной прописи. Указанным методом достигается одновременное испытание бацилл на кислото- и спиртоустойчивость. Среди видов кислотоустойчивых сапрофитов встречаются спиртоподатливые разновидности, палочки же туберкулеза и паратуберкулеза всегда кислото- и спиртоустойчивы. Окраска в модификации Синева. Фильтровальную бумагу пропитывают 2% спиртовым раствором основного фуксина, сушат и нарезают на полоски. На фиксированный мазок наносят несколько капель дистиллированной воды, накладывают полоску окрашенной бумаги, нагревают до появления паров и далее обрабатывают по оригинальной прописи Циль-Нильсена.
Мирохин (1941) рекомендует при отсутствии основного фуксина окрашивать мазки на туберкулез по видоизмененному способу Чистовича: 1. окраска генцианвиолетом или метилвиолетом на анилиновой воде с подогреванием — 2 минуты, 2. промывание водой, 3. обесцвечивание 2-5% азотной кислотой 8—10 секунд, 4. промывание водой, 5. обесцвечивание спиртом до побледнения, 6. промывание водой, 7. докрашивание 0,1% сафранином несколько секунд, 8. промывание водой и высушивание. Микроскопическая картина: туберкулезные палочки — фиолетовые на красном фоне. Кислотоустойчивость того или иного микроорганизма можно определить флуоресцентным методом. У этого метода есть преимущество, заключающееся в том, что стекла с образцами, в которых подозревается присутствие, например, микобактерий, можно просматривать под объективом с увеличением 60´, а не 100´; следовательно, все стекло целиком можно просмотреть за короткое время. Метод Труанта для окрашивания на кислотоустойчивость.
Оба красителя тщательно перемешивают с 25 мл воды и фенолом. Затем добавляют оставшуюся воду и глицерин и снова перемешивают. Получившийся реактив для флуоресцентной окраски фильтруют через стекловату и хранят при 4°С или при комнатной температуре.
Выполнение методики: 1. Погружают фиксированный нагреванием бактериальный мазок на 15 минут в реактив для флуоресцентной окраски при 20—37°С. 2. Промывают мазок под слабой, падающей под углом струей дистиллированной воды, пока сток не станет бесцветным. 3. На 2—3 минуты погружают мазок в обесцвечивающий растворитель, затем промывают дистиллированной водой, как описано выше.
4. Погружают мазок в дополнительный краситель на 2—4 минуты. 5. Отмывают дистиллированной водой, как описано выше, и подсушивают фильтровальной бумагой. Просматривают образцы в люминесцентный микроскоп с использованием возбуждающего светофильтра типа BG-12 и запирающего светофильтра типа OG-1. Клетки кислотоустойчивых бактерий флуоресцируют желто-оранжевым светом на темном фоне. Для микроскопической дифференциальной диагностики туберкулезных палочек от спиртоподатливых сапрофитов существует несколько методов. Метод Гонзеля 1. Фиксированный мазок окрашивают карболовым раствором фуксина при нагревании до кипения в течение 2 минут. 2. Промывают водой и высушивают. 3. Обесцвечивают смесью соляной кислоты (3 части) и абсолютного или 95° алкоголя (97 частей) в течение 10 минут. 4. Докрашивают насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки, разбавленным водой в 2 раза. 5. Промывают водой, высушивают. Микроскопическая картина: туберкулезные палочки—красные. Метод Бунге и Траутенрота 1. Помещают препарат на 3 часа в абсолютный алкоголь (для извлечения жира). 2. Наносят на мазок 5% водный раствор хромовой кислоты на 15 минут. 3. Промывают водой. 4. Окрашивают при подогревании карболовым раствором фуксина. 5. Обесцвечивают 5% раствором серной кислоты в течение 3 минут. 6. Докрашивают насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки не менее 5 минут. Микроскопическая картина: туберкулезные палочки—красные. Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость) Препарат окрашивают карболовым фуксином при подогревании до появления паров, промывают водой, а затем окрашивают насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки в течение 2—3 минут. Мазок обмывают водой, высушивают. Микроскопическая картина: туберкулезные палочки — красные на синем фоне, а кислотоустойчивые, но спиртоподатливые палочки — синие. Если требуется проверить в уже окрашенном по Циль-Нильсену мазке обнаруженные кислотоустойчивые палочки на спиртоустойчивость, нужно: удалить с препарата кедровое масло бензином или ксилолом, докрасить мазок насыщенным спиртовым раствором метиленовой синьки в течение 2-5 минут, обмыть водой и высушить. Кислото- и спиртоустойчивые палочки сохраняют свой красный цвет, а спиртоподатливые окрасятся в синий цвет. Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость) 1. На фиксированный мазок наливают профильтрованную смесь из 10 мл насыщенного спиртового раствора метилвиолета и 100 мл 2% карболовой воды (смесь пригодна 3 дня) и нагревают до кипения 4—5 раз, постоянно добавляя свежий раствор краски, или же оставляют на 24-48 часов при комнатной температуре; 2. Не промывая водой, на мазок наливают раствор Люголя на 10—15 минут; 3. Промывают водой; 4. Обесцвечивают сначала 5% раствором азотной кислоты в течение минуты, затем: 5. Обесцвечивают 3% раствором соляной кислоты в точение 10 секунд 6. Обесцвечивают смесью спирта и ацетона (1:1) до полного обесцвечивания мазка (до прекращения растворения краски); 7. Дополнительно окрашивают разведенным (1:10) фуксином или 1% водным раствором сафранина в течение нескольких секунд; 8. Ополаскивают водой, высушивают. Микроскопическая картина: на красном (коричневом) фоне — сине-фиолетовые палочки и резко ограниченные зерна.
Модификация окраски Грам—Муха Мазок сначала окрашивают смесью из 3 частей карболового раствора фуксина с 1 частью метилвиолета по Муху (см. выше), затем продолжают окраску по оригинальной прописи. Микроскопическая картина: палочки — красного цвета, зерна — темно-фиолетовые. Способ Нейссера (Используется для окраски метахроматических зерен — волютина).
Для окраски смешивают 2 части раствора А с 1 частью раствора Б. Техника окраски. На фиксированный мазок наливают смесь растворов А и Б, через минуту краску сливают, мазок обрабатывают раствором Люголя в течение минуты, затем промывают водой и докрашивают в течение 2—3 минут раствором хризоидина (1 г краски в 300 мл дистиллированной горячей воды), промывают водой и высушивают. Микроскопическая картина: зернистость — темно-синяя, тела бактерий —светло-желтые.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-04-23; просмотров: 1338; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.145.201.186 (0.015 с.) |