Определение групповой и резус - принадлежности крови. Ошибки при определении групп крови по системе AB0 и Rh-фактору.

Определение группы крови по системе АВ0 при помощи стандартных сывороток.

Определение группы крови проводят в помещении с хорошим освещением при температуре +15–+25° С. Для определения групп крови удобно использовать планшет с обозначенными гнездами. Под соответствующим обозначением группы крови на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных сывороток соответствующих (I, II, III) групп, 2-х серий. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: I (прозрачная), II (голубая), III (розовая). Рядом с каждой каплей сыворотки наносят маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови, соблюдая соотношение 10:1. Смешивают каплю сыворотки с каплей крови индивидуальной чистой стеклянной палочкой. После размешивания капель пластинку покачивают, затем на 1–2 мин оставляют в покое и снова периодически покачивают.

Наблюдение за ходом реакции проводится в течение 5 мин. Агглютинация начинается в течение первых 10–30 с, однако наблюдение следует вести до 5 мин ввиду возможности более поздней агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Через 3 мин в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения 5 мин.

Оценка результата: реакция в каждой капле может быть положительной (наличие агглютинации эритроцитов) или отрицательной (отсутствие агглютинации). Различные сочетания положительных и отрицательных результатов дают возможность судить о групповой принадлежности исследуемой крови. Вывод о группе крови делается по отсутствию агглютинации. Имя лунки с ОТСУТСТВИЕМ агглютинации и соответствует определяемой группе крови, причем, если агглютинация отсутствует везде, то это I-я группа крови, а если она присутствует везде – то это IV группа. В данном случае ставится реакция с IV группой гемагглютинирующей сыворотки (желтый цвет). И, при условии что такой агглютинации не будет с сывороткой IV группы, делается вывод о IV группе исследуемой крови.

 

Техника определения группы крови при помощи моноклональных реагентов:

Монолональный реагент это полученный в лабораторных условиях реактив (раствор), содержащий заведомо известные, определенные антитела анти-А, анти-В и анти-АВ. Техника определения группы крови идентична выше описанной. Оценка результатов такая же, но с противоположным знаком. Имя лунки с НАЛИЧИЕМ агглютинации и соответствует опрелеляемой группе крови, причем, если агглютинация ОТСУТСТВУЕТ везде, то это I-я группа крови, а если она присустсвует везде – то это IV группа.

 

Определение резус принадлежности крови:

проводится с помощью стандартной универсальной сыворотки «антирезус» для всех групп крови. В пробирку вводят 1—2 капли стандартного универсального реагента «антирезус» той же группы крови и добавляют одну каплю (0,05 мл) исследуемой крови или эритроцитов. Перемешивают содержимое путем встряхивания пробирки и помещают ее на водяную баню на 5 минут при температуре 37^оС, так как иммунная реакция с антигеном требует оптимальной температуры. Как правило, агглютинация наступает в течение 3-5 мин. По истечении этого времени для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2—3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешивают (не взбалтывая!), 2—3 раза переворачивая пробирку. Наличие агглютинации эритроцитов говорит о присутствии резус-фактора на исследуемых эритроцитах и о положительной резус-принадлежности крови (Rh+).

 !!!   Главное правило изосерологии (изогемаглютинации) - аглютинины никогда и ни при каких обстоятельствах не должны встречаться с одноименными аглютиногенами в одном организме. Если такая встреча состоялась, то последствия ее самые тяжелые: гемолитический шок.

 

Ошибки при определении группы крови и резус-фактора:

I. Ошибки организационного характера:

Перепутывание пробирок с образцами крови, перепутывание гемагглютинирующих сывороток, несоблюдение соотношения капель (10:1 + 9 капель физраствора для контроля достоверности агглютинации), отказ от добавления физраствора, отказ от использование сыворотки IV группы для определения этой группы, нарушение температурного режима в помещении (холод замедляет реакции и при температуре ниже 18 град. запрещаются лабораторные исследования, плохое освещение в помещении лаборатории, не соблюдение 5-минутного режима наблюдения за агглютинацией.

II. Ошибки, связанные с биологическими свойствами крови:

Слабые антигены пациента, отсутствие аглютининов (дети 1-го года жизни), панагглютинация

III. Ошибки, связанные с недоброкачественностью реагентов - серологических стандартов (изогемагглютинирующий сывороток):

Слабые титры антигенов стандартных гемагглютинирующих сывороток (вина СПК) или падение их активности при не соблюдении режимов хранения.

 

Проведение проб на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента по AB0-системе, по резус-фактору и на биологическую совместимость.