Работа № 4. Определение содержания гемоглобина

 

Для определения содержания (Нb) гемоглобина используется гемоглобинцианидный метод. Принцип метода состоит в том, что к крови добавляется специальный трансформирующий раствор, содержащий сильный окислитель (цианид), при взаимодействии с которым эритроциты разрушаются, гемоглобин выходит в раствор и образует окрашенное соединение гемоглобин-цианид. Интенсивность окраски пропорциональна количеству гемоглобина и фиксируется на ФЭКе или спектрофотометре.

Ход работы

В пробирку пипеткой перенесите 5 мл трансформирующего раствора. Заберите из пальца кровь капилляром Сали до метки 0,02 и выпустите в раствор. Раствор крови в трансформирующем растворе аккуратно, но тщательно перемешайте и оставьте на 10–15 мин при комнатной температуре для полного развития окраски (раствор остается стабильным в течение более 24 ч). Таким же образом подготовьте пробу со стандартным раствором гемоглобина: 5 мл трансформирующего раствора и один капилляр стандартного раствора гемоглобина (120 г/л).

Далее производят измерение оптической плотности опытной и стандартной проб на ФЭКе при длине волны 520–560нм (зеленый светофильтр) в кювете толщиной 10мм. Предварительно выставляется ноль по трансформирующему раствору.

Поскольку содержание гемоглобина в стандартном растворе известно, содержание гемоглобина в опытной пробе рассчитывают в соответствии с пропорцией

D_ст. – 120 г/л; D_оп. – Х г/л,

где D_ст. – оптическая плотность стандартной пробы; D_оп. – оптическая

плотность опытной пробы.

При использовании спектрофотометра определение оптической плотности проводят при длине волны 540 нм в кювете толщиной 10мм. Содержание гемоглобина рассчитывают по формуле

Hb (г/л) = 367,7D,

где D– оптическая плотность раствора. Рекомендации по оформлению протокола работы

Полученные результаты занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте заключение, исходя из того, что нормальное содержание гемоглобина в крови (нормохромемия) человека – 120–140 г/л для женщин, 130– 150 г/л для мужчин. Повышение содержания гемоглобина – гиперхромемия, снижение – олигохромемия. Снижение содержания гемоглобина обычно наблюдается при эритропении, повышение – при эритроцитозе. Содержание гемоглобина после рождения составляет 210 г/л (180–240 г/л). Дальнейшая динамика этого показателя соответствует количественному изменению эритроцитов.

 

Работа № 5. Расчет среднего содержания гемоглобина в одном эритроците и цветного показателя крови

 

Расчетные показатели среднего содержания гемоглобина в одном эритроците и цветного показателя крови – индексы красной крови – используются для выводов о насыщенности эритроцитов гемоглобином.

Расчет среднего содержания гемоглобина в одном эритроците производится делением количества гемоглобина (г/л) на число эритроцитов (кл/л).

В норме содержание гемоглобина в одном эритроците колеблется между 27 и 33,3 пг (пг = 10^–12 г).

Число 33 пг в одном эритроците принято за цветной показатель, ЦП, равный 1. Расчет цветного показателя (ЦП) крови производится из соотношения гемоглобина в норме и гемоглобина испытуемого и содержания гемоглобина в норме и гемоглобина испытуемого:

Число эритроцитов в норме(кл/л) / Число эритроцитов испытуемого кл/л)

ЦП =  ---------------------------------------------------------------------------------------------.

Содержание НЬв норме (г/л) / Содержание НЬиспытуемого (г/л)

 

Рекомендации по оформлению протокола работы

Полученные результаты занесите в тетрадь протоколов опытов, сделайте вывод, исходя из того, что в норме цветной показатель крови колеблется от 0,86 до 1,1 (нормохромия). В случае если он ниже 0,86, то налицо гипо-хромия, а если выше 1,1, то налицо гиперхромия.

Сделайте общие выводы о кислородной емкости крови.

 

 

ФИЗИОЛОГИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ

 

Повышение защитной функции крови при мышечной работе

выражается в увеличении числа лейкоцитов (миогенный лейкоцитоз). При небольших нагрузках это увеличение незначительно и происходит в связи с ростом числа лимфоцитов. При больших нагрузках миогенный лейкоцитоз может быть выраженным, с явным увеличением числа молодых форм – палочкоядерных и юных лейкоцитов (как следствие раздражения костного мозга.)

Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, капилляры Сали, раствор цитрата натрия, 3–5-процентный раствор уксусной кислоты с добавлением метиленового синего, камера Горяева, покровное стекло, пипетка на объем 1 мл, обезжиренные предметные стекла (обезжиривание стекол производят смесью Никифорова), краска

Романовского-Гимза, фосфатный буфер (рН = 7,4), этиловый спирт.