Диагностика особо опасных заболеваний

Основные методы диагностики особо опасных заболеваний, на которые опираются ветеринарные врачи – это клинические проявления, эпизоотологическая ситуация, патологоанатомические данные, но самое важное это лабораторные диагностики. Где с уверенностью можно поставить достоверный и точный диагноз на заболевания.

Для карантинных и особо опасных заболеваний существует межгосударственные стандарты, по которым ветеринарные лаборатории и ветеринарные научно-исследовательские учреждения обязаны следовать по этим указаниям [52]. Но и методы лабораторных диагностик различны и разнообразны, к примеру, для диагностики африканской чумы свиней используют такие методы как:

1) Метод отбора проб;

2) Метод прямой иммунофлуоресценции;

3) Метод выделения и идентификации вируса АЧС;

4) Метод постановки биологической пробы;

5) Метод обнаружения вируса АЧС в реакции аутогемадсорбции;

6) Метод непрямой иммунофлуоресценции;

7) Метод иммуноферментного анализа [52].

На основание ГОСТ 26075-2013.Методы лабораторной диагностики бешенства (принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации, протокол № 57-П от 27.06.2013). Введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 01.01.2015 (взамен ГОСТ 26075-84 был введен в действие 01 июля 1984):

1) метод флуоресцирующих антител;

2) метод выделения вируса бешенства в культуре клеток мышиной нейробластомы CCL-131 (или невриномы Гассерова узла крысы - НГУК-1);

3) биопроба на белых мышах;

4) метод иммуноферментного анализа;

5) реакция диффузионной преципитации [53].

Для диагностики в лабораторию направляют: от мелких животных (кошки, лисицы, теленок и т.д.) свежий труп или целую голову, от крупных животных – голову либо свежий или консервированный в 30 – 50% растворе глицерина головной мозг (аммоновы рога, мозжечок и т.д.), с целью обнаружению телец Бабеша-Негри и специфического рабического антигена[53,54 с.72].

На основании Приказа Министерства сельского хозяйства Российской Федерации от 25.11.2020 № 706 «Об утверждении Ветеринарных правил осуществления профилактических, диагностических, ограничительных и иных мероприятий, установления и отмены карантина и иных ограничений, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов блютанга» применяют такие методы как:

1) конкурентный иммуноферментный твердофазный анализ с использованием моноклональных клеток, специфичных к различным серотипам возбудителя;

2) реакция вируснейтрализации в культуре клетке;

3) нуклеотидное секвенирование [55 c.16]

Современные методы диагностики: стандарты oie, 2008 – идентификация антигена,

· реакция иммунодиффузии в агаровом геле (РДП), иммуноферментный анализ (ИФА);

· полимеразная цепная реакция (ПЦР);

· «Блютанг – серотест»: метод двойного распознавания антител к BTV в сыворотке крови жвачных [66].

На основании Приказ Минсельхоза РФ от 03.04.2006 N 105 «Об утверждении Ветеринарных правил лабораторной диагностики гриппа А птиц», устанавливают обязательные требования проведения лабораторной диагностики [56].

Для исследования отбираются пробы патологического материала (ткани головного мозга, селезенка, сердце, почки, участки кишечника и т.д.) от павшей птицы, так же используют клоакальный или же трахеальные смывы, помет птиц, производят отбор крови [56].

Для обнаружения и установки диагноза применяют следующие методы:

a) для выявления вируса гриппа птиц – биопроба на СПФ (свободных от патогенной микрофлоры) – цыплятах с обязательным последующим подтверждением специфичности биологической реакции;

b) для выделения вируса гриппа птиц – метод выделения вируса на СПФ – куриных эмбрионах или в культуре клеток;

c) для обнаружения антигенов вируса гриппа птиц;

1) иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения одного или нескольких белков вируса;

2) иммунопреципитация (двойная иммунодиффузия по Оухтерлони (далее - РДП) или иммуноэлектроосмофорез (далее – ИЭОФ);

3) иммунохроматографические методы (далее – ИХА);

4) радиоиммунный анализ (далее – РИА);

5) реакция связывания комплемента (далее – РСК);

d) для обнаружения гемагглютинина (гемагглютинирующей активности) вируса гриппа птиц:

6) реакция гемагглютинации (далее – РГА) с подтверждением специфичности в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);

7) ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;

e) для обнаружения РНК вируса:

8) полимеразная цепная реакция (далее – ПЦР);

9) ПЦР с последующим секвенированием ее продуктов;

f) для обнаружения антител к вирусу гриппа птиц:

10) ИФА;

11) РДП и ИЭОФ;

12) ИХА;

13) РИА;

14) РТГА;

15) РСК;

g) для субтипирования вируса по гемагглютинину и нейраминидазе:

16) РТГА;

17) ПЦР [56].

При оспе овец и коз отбора патологического материала для исследования от больных, павших или вынуждено убиты животных необходимо брать не позже 2 – 4 часов. Отбирают смывы из везикул, пастул, так же кожные поражения, кусочки на границе изменённых внутренних органов. Используют методы:

1) Вирусоскопия (приготовленные мазки окрашивают по М. А. Морозову для обнаружения элементарных телец оспы);

2) Биопроба для выделения и накопления вируса оспы;

3) Реакция диффузионной преципитации;

4) Реакция иммунофлуоресценции [58].

На основании государственного санитарно – эпидемиологического нормирования РФ для исследования на сап не только животных, но и человека проводится бактериологическим, биологическим и серологическим методом. Материалом у лошадей с подозрением на сап служат выделения из носа, отделяемое язв, пунктаты, испражнения. От павших животных берут для анализа кусочки органов: селезенка, печень, легкое, кровь, костный мозг [58].

Используемые методы:

I.Бактериологический метод:

1) Для выделения возбудителя сапа используют мясопептонный агар и бульон pH 6,8 - 7,0 с 4 % глицерина (МПГА, МПГБ);

II.Биологический метод:

2) Биопроба на золотистых хомячках или морских свинках;

3) Аллергической пробы с маллеином;

III.Иммунологические методы исследования:

4) Реакция непрямой гемагглютинации;

IV.Серологическая диагностика:

1) Реакция непрямой гемагглютинации;

2) Реакция агглютинации;

3) Реакция связывания комплемента;

V. Молекулярно – генетические методы исследования:

4) Обеззараживание проб для исследования методом ПЦР;

5) Выделение ДНК;

6) Проведение ПЦР для специфической индикации и идентификации возбудителя сапа [58].

Разберем сибирскую язву, как всем хорошо известно при подозрение вскрытие трупов категорически запрещено. И поэтому основным методом исследования будет служить бактериологический. Производят отбор крови с поверхностных кровеносных сосудов уха, хвоста, конечностей, за исключением для исследования берут ухо на котором лежало животное. У МРС доставляют целую тушу. У свиней как правило в крови не обнаруживается возбудитель, поэтому вырезается заглоточные, подчелюстные лимфоузлы [59].

Рассмотрим все методы для выявления возбудителя:

I. Выявление капсул:

1) Метод Михина (окрашивают щелочной синькой Лоффлера)

2) Метод Ольта (капсула бледно – желтая)

3) Метод Антонии (капсула сине – фиолетова)

4) Метод Романовского – Гимзы (капсула розовая)

5)  Метод Редигера (красно – фиолетовая)

6) Метод Гинса (капсула бледно – голубая)

II. Выявление спор:

7) Метод Меллера (споры окрашены в розово – красный цвет)

8) Метод Вальдмана (споры синие)

9) Метод Пешкова (споры синие)

10) Метод Ауески (споры красные)

11) Метод Шеффера – Флутона (споры зеленые)

III. Так же ставятся биологические пробы на животных

IV. Серологические исследования

12) Реакция преципитации по Асколи

13) Реакция диффузной преципитации

14) Метод флюоресцирующих антител

15) Иммуноферментный анализ [60 c.58]

Перейдем к Чуме КРС, для лаборатории доставляют образцы: выделения из носа или глаз в эрозивной фазе, так же цельную кровь с гепарином, предлопаточные лимфоузлы или селезенка [42 с. 40].

Идентификация вируса:

1. выявление антигена:

1) РДП;

2) прямой и непрямой иммунопероксидазный метод;

3) иммуноэлектрофорез;

4) иммуногистопатологическое исследование;

5) изоляция вируса;

6) реакция нейтрализации;

7) окрашивание иммунопероксидазным методом;

Определение вирусной РНК:специфические кДНК-зонды;

2. ПЦР.

Серологические тесты:

3. реакция нейтрализации;

4. ИФА [42 с.39].

Ящур  на основании ГОСТ 25384-82 для проб используют: содержимое афт у КРС – на слизистой оболочке языка, у свиней – на пяточке или же одинаковой для каждого животного – на коже венчика или межпальцевой щели. Для ретроспективных исследований отбирают пищеводно-глоточную слизь [61].

1. Серологический метод

1) реакции связывания комплемента;

2. Методы выявления вируса

2) культуры монослойные первичных клеток почки свиней (СП), телят, взрослого крупного рогатого скота (ВП) и ягнят (ПЯ) и перевиваемых линий ВНК-21 и IB-RS-2

3) Постановка биопробы на животных (морские свинки, мышата 3 – 6 дневного возраста) [61].

Чума МРС возможно то что же что и чума крс – проверить уточнить!!!!!!!

 

Чума верблюдов бактерия Y. pestis сходна и для человека. В лабораторию для бактериологического исследования направляют: трупы грызунов, гной из бубонов, мокроту, кровь, и для работы с чумным материалом разрешена только в специализированных лабораториях [62].

Бактериологическое исследование включает:

1) обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии

Ускоренные методы:

2) иммунофлуоресценцию

3) реакцию торможения пассивной гемагглютинации

4) РДП

Биопроба на морских свинках [62].