Протеогликаны, ассоциированные с клетками

 

В процессе развития клеток появляются малые протеогликаны, получившие название протеогликанов, ассоциированных с клетками. Это семейство белков включает серглицины, синдеканы, бетаглицины, тромбомодулин, фосфатидилинозитол - заякоренные протеогликаны.

 

Синдеканы включают 4 типа различных белков. Они являются интегральными протеогликанами и содержат внутриклеточный, трансмембранный и внеклеточный домены. Внеклеточный домен этих белков имеет сходство с доменом протеиназ и способен открывать мембрану клетки, а также содержит и варьирующие цепи гликозаминогликанов, соединённых с синдеканом. Так, синдеканы 1 и 3 содержат гепарансульфат и хондроитинсульфат. Синдекан-1 появляется в эпителиальных клетках в процессе развития, синдекан-2 (фиброгликан) синтезируется фибробластными клетками и гепатоцитами; синдекан-3 (N-синдекан) присутствует в нервной ткани и развивающихся хрящах, а синдекан-4 (риудокан, амфигликан) - в эндотелии, эпителии, гладкомышечных клетках и фибробластах кожи. Синдеканы через внеклеточные домены связывают коллагены, фибронектин, тромбоспондин, тенасцин и фактор роста фибробластов. Внутриклеточные домены синдекана через актин связываются с цитоскелетом.

 

Серглицины выделены из секреторных везикул. Их состав зависит от типа клеток и клеточной дифференцировки. С коровым белком связаны цепи хондроитин- и гепарансульфата. Особенностью молекул серглицина является высокое содержание сульфатных остатков, что придаёт им устойчивость к протеолизу. Мол. масса серглицинов варьирует в больших пределах (60-750 кДа), а мол. масса корового белка практическ и постоянна (16-18 к Да).

Считают, что серглицины вовлечены в регуляцию ферментативной активности секреторных гранул и дифференцировку гемопоэтических клеток.

Некоторые серглицины синтезируются эндотелиальными клетками, и их синтез повышается под влиянием фактора некроза опухолей и интерлейкина 1α(ИЛ-1α). Серглицин может принимать участие в миграции лейкоцитов при воспалительных процессах. Недавно установлено, что с другими протеогликанами они участвуют в адгезии и активации лимфоидных клеток.

 

Протеогликаны базальных мембран

 

В составе базальных мембран выделена целая группа гетерогенных протеогликанов, содержащих гепарансульфат. В структуре корового белка имеются глобулярные домены, разделённые стержневыми фрагментами. Глобулярные домены обеспечивают связь этих протеогликанов с коллагеном IV типа, ламинином и другими гликопротеинами, а также с клетками, расположенными на базальной мембране.

 

Перлекан является основным гепарансульфатсодержащим протеогликаном базальных мембран. Полипептидная цепь, состоящая из 3500 аминокислотных остатков, связана с тремя гепарансульфатными цепями через гидроксильные группы серина в N-концевой области. Каждая полисахаридная цепь содержит до 200 мономеров. В молекуле перлекана определяется около трёх десятков глобулярных доменов, раз- делённых короткими стержневидными фрагментами, обеспечивающих связь между клетками и компонентами межклеточного матрикса.

 

Сохранение биомеханических и физиологических особенностей соединительной ткани во многом определяется поддержанием баланса между процессами биосинтеза и деградации коллагенов и протеогликанов. Распад и синтез протеогликанов регулируют:

1) гормоны - соматотропин, тироксин, инсулин;

2) цитокины - ИЛ-1, кахектины;

3) витамины группы А и С;

4) микроэлементы;

5) факторы роста.

 

Синтез протеогликанов

 

Синтез протеогликанов начинается с биосинтеза корового белка на полирибосомах. Уже в процессе трансляции белка в шероховатой эндоплазматической сети происходит связывание трисахаридов через амидные группы остатков аспарагина. В качестве донора олигосахаридов выступают долихол-связанные олигосахариды с высоким содержанием маннозы. После присоединения N-сцепленных олигосахаридов стержневой белок подвергается ксилозилированию и фосфорилированию. УДФ-ксилозатрансфераза, осуществляющая перенос остатков ксилозы на гидроксильную группу стержневого белка, является одним из ключевых ферментов биосинтеза протеогликанов. Дальнейшие процессы образования цепей гликозаминогликанов происходят в аппарате Гольджи. Полисахаридные цепи гликозаминогликанов синтезируются путём последовательного присоединения моносахаридов, донорами которых обычно являются соответствующие УДФ-сахара. На мембранах аппарата Гольджи локализованы гликозилтрансферазы, при участии которых белковая молекула и подвергается гликозилированию (рис. 1.18).

 

 

Рис. 1.18. Присоединение гликозаминогликана к коровому белку через связывающий трисахарид. К серину, треонину или аспарагину через О- или N-гликозидную связь присоединяется связующий олигосахарид, состоящий из двух остатков галактозы и одного остатка ксилозы.

 

УДФ-галактозилтрансфераза I переносит на ксилозу первый остаток галактозы, УДФ-галактозилтрансфераза II - второй остаток галактозы, а завершается формирование связующего трипептида присоединением к нему остатка глюкуроновой кислоты. Эту реакцию катализирует УДФ-глюкуронилтрансфераза I. Дальнейший синтез полисахаридной цепи осуществляется последовательным присоединением N-ацетилгалактозамина (или N-ацетилглюкозамина, галактозы) и глюкуроновой (или идуроновой) кислоты (рис. 1.19).

 

Рис. 1.19. Синтез хондроитинсульфата в составе протеогликана. Ферменты:
1 - УДФ-ксилозилтрансфераза;
2 - УДФ-галактозилтрансфераза I;
3 - УДФгалактозилтрансфераза II;
4 - УДФ-глюкуронилтрансфераза I;
5 - УДФ-N-ацетилгалактозаминтрансфераза I;
6 - УДФ-глюкуронилтрансфераза II;
7 - УДФ-N-ацетилгалактозаминтрансфераза II;
8 - сульфотрансфераза.

 

Модификацией цепей гликозаминогликанов является сульфатирование, то есть присоединение сульфата к С-4 и (или) к С-6 N-ацетилгалактозамина. Сульфат переносится на молекулу-акцептор с помощью специфических сульфотрансфераз (рис. 1.20). Донором сульфатной группы выступает 3'-фосфоаденозин-5'-фосфосульфат (ФАФС).

 

Рис. 1.20. Реакция сульфатирования остатка N-ацетилгалактозамина в процессе синтеза цепи хондроитинсульфата.

 

Аминосахара и гексуроновые кислоты синтезируются из глюкозы. Непосредственным же предшественником N-ацетилглюкозамина и N-ацетилгалактозамина является фруктозо-6-фосфат. Источником NН2-группы для сахаров выступает глутамин. Образовавшийся аминосахар далее ацетилируется с помощью ацетил-КоА (рис. 1.21).

 

 

Рис. 1.21. Синтез гликозаминогликанов. Ферменты:

1 - гексокиназа;
2 - фосфоглюкоизомераза;
3 - аминотрансфераза;
4 - ацетилтрансфераза;
5 - N-ацетилглюкозаминфосфомутаза;
6 - УДФ-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилаза;
7 - эпимераза;
8 - УДФ-глюкозаминпирофосфорилаза;
9 - УДФ-глюкопирофосфорилаза;
10 – УДФ-глюкозо-дегидрогеназа.

 

В реакциях эпимеризации после включения глюкуроната в углеводную цепь из D-глюкуроновой кислоты образуется L-идуроновая кислота.

 

На синтез гликозаминогликанов влияют соматотропин и ретиноевая кислота, которые активируют включение сульфата в молекулы. Напротив, синтез гиалуроновой кислоты и сульфатированных гликозаминогликанов тормозят глюкокортикоиды и половые гормоны.

 

Распад протеогликанов

 

Распад протеогликанов - физиологический процесс, заключающийся в регулярном обновлении внеклеточных и внутриклеточных макромолекул. В деградации протеогликанов участвуют протеиназы и гликозидазы. Вначале коровый и связующие белки подвергаются воздействию свободных радикалов и в межклеточном матриксе гидролизуются матриксными металлопротеиназами - коллагеназой, желатиназой, стромелизином. Протеиназы расщепляют коровый белок, а гликозидазы гидролизуют цепи гликозаминогликанов и олигосахаридов. Все протеогликаны, содержащие цепи хондроитинсульфата, дерматансульфата, гепарансульфата и кератансульфата, первоначально расщепляются на фрагменты. Затем фрагменты протеогликанов захватываются бластными клетками и подвергаются внутриклеточной деградации. Эти фрагменты могут также с лимфой и кровью переноситься в печень. В гепатоцитах происходит их дальнейший гидролиз, в котором участвуют аспартильные, сериновые и другие протеиназы.

 

Распад гликозаминогликанов

 

Гликозаминогликаны отличаются высокой скоростью обмена: период полужизни (Т1/2) многих из них составляет от 3 до 10 сут и только для кератансульфата Т1/2 120 сут. В разрушении полисахаридных цепей участвуют экзо- и эндогликозидазы (гиалуронидаза, β-глюкуронидаза, β-галактозидаза, β-идуронидаза) и сульфатазы.

 

Из внеклеточного пространства по механизму эндоцитоза гликозаминогликаны поступают в клетку, где эндоцитозные пузырьки сливаются с лизосомами. Активные лизосомальные ферменты обеспечивают полный постепенный гидролиз гликозаминогликанов до мономеров. Расщепление интактных гликозаминогликанов в клетках начинается с их распада на фрагменты под действием эндогексозаминидаз и эндоглюкуронидазы. Образовавшиеся в реакциях гидролиза олигосахариды подвергаются последовательным действиям экзогликозидаз и сульфатаз, которые отщепляют мономеры с невосстанавли­вающегося конца. Так, гидролиз фрагментов хондроитинсульфата, содержащих на невосстанавливающем конце остаток N-ацетилгалактозамина, инициируется сульфатазой, за ней в процесс включается β-N-ацетилгалактозаминидаза, а затем β-глюкуронидаза. В итоге образуется неорганический сульфат и моносахариды (рис. 1.22).

Рис. 1.22. Распад хондроитинсульфата. Ферменты:

1 - эндогликозидаза;
2 - сульфатаза;
3 - β-N-ацетилгалактозаминидаза;
4 - β-глюкуронидаза.

 

В распаде гиалуроновой кислоты до олигосахаридов участвует гиалуронидаза. Гидролиз образовавшихся олигосахаридов осуществляют β-N-ацетилглюкозаминидаза и β-D-глюкуронидаза.

 

Внеклеточный распад гликозаминогликанов характерен только для гепарансульфата, который расщепляется гепараназой, синтезируемой тромбоцитами или Т-лимфоцитами.

 

Мукополисахаридозы

 

Мукополисахаридозы - тяжёлые наследственные заболевания, обусловленые дефектами гидролаз, участвующих в катаболизме гликозаминогликанов. В лизосомах тканей, для которых характерен синтез наибольшего количества гликозаминогликанов, накапливаются не полностью разрушенные гликозаминогликаны и с мочой выделяются их олигосахаридные фрагменты. Существует несколько типов мукополисахаридозов, вызванных дефектами разных ферментов, участвующих в расщеплении гликозаминогликанов.

 

Мукополисахаридозы проявляются нарушениями умственного развития у детей, поражениями сердечно-сосудистой системы, деформациями костного скелета, значительно выраженными в челюстнолицевой области, гипоплазией твёрдых тканей зубов, помутнением роговицы глаз, снижением продолжительности жизни (табл. 1.3).

 

Таблица 1.3 Болезни, связанные с нарушением метаболизма гликозаминогликанов

 

 

В настоящее время эти болезни не поддаются лечению, поэтому при подозрении на носительство дефектных генов необходимо проводить пренатальную диагностику. В этих случаях определяют активность лизосомальных гидролаз.

 

 

1.4. НЕКОЛЛАГЕНОВЫЕ БЕЛКИ СО СПЕЦИАЛЬНЫМИ СВОЙСТВАМИ