Определение общего количества микроорганизмов

При определении общего количества микроорганизмов в молоке реко­мендуются следующие нормы разведения:

hМолоко сырое - 1:10000; 1:100000; 1:1000000.

hМолоко пастеризованное - 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10000.

Чтобы получить разведение 1:10 пробирку с продуктом, предназначен­ным для исследования, и пробирку со стерильной водой берут в левую руку и держат в наклонном положении между большим и указательным пальцами. Ватные пробки из пробирок вынимают около пламени горелки и помещают од­ну между средним и безымянным пальцами левой руки, а другую захватывают мизинцем правой руки, после чего обжигают края обеих пробирок и вводят, стерильную пипетку в пробирку с исследуемым материалом. Набирают 1 мл и переносят в пробирку со стерильной водой. Содержимое выдувают и еще не­сколько раз набирают из этой же пробирки воду, промывают пипетку, чтобы на стенках ее не осталось материала, предназначенного для исследования. Выни­мают пипетку, обжигают края пробирки, внутренние концы пробок и затем за­крывают ими пробирки. Для дальнейшего разведения берут другую стерильную пипетку и, набрав 1мл из пробирки с 1 разведением, переносят его во вторую пробирку со стерильной водой. Получается разведение 1:100. Новой стериль­ной пипеткой делают следующее, 3 разведение и т.д.

По 1мл соответствующих разведений высеивают в чашки Петри и зали­вают горячей питательной средой температурой 45°С (сусло-агар, МПА) в количестве 12-15мл. Сразу после заливки содержимое тщательно перемешивают путем легкого покачивания для равномерного распределения посевного мате­риала. Выращивание ведут в течение двух суток при температуре 37°С.

Для определения общего количества бактерий следует выбирать те разве­дения, при посевах которых на чашках вырастает не менее 50 и не более 300 колоний. Количество выросших колоний подсчитывают в каждой чашке, по­местив ее вверх дном (без крышки) на темном фоне, пользуясь лупой с увели­чением в 8-10 раз. Каждую подсчитанную колонию отмечают на дне чашки чернилами. При подсчете колоний рекомендуется пользоваться счетчиками. При большом числе колоний и их равномерном распределении дно чашки Пет­ри делят на четыре и более одинаковых сектора, подсчитывают число колоний в двух-трех секторах, находят среднее арифметическое число колоний для них и умножают на общее количество секторов всей чашки.

Таким образом, находят общее количество колоний, выросших на одной чашке.

Для подсчета общего количества бактерий в 1 мл или 1 г образца число колоний, выросших на каждой чашке, умножают на соответствующее разведе­ние. Полученные результаты по отдельным чашкам складывают, делят на коли­чество подсчитанных чашек и выводят среднее арифметическое, которое при­нимают за окончательный результат. Полученные числа округляют.

Проба на редуктазу

Для определения бактериальной чистоты и свежести молока проводят пробу на редуктазу, основанную на способности бактерий выделять редуктазу, восстанавливающую краски (метиленовый синий, резазурин). Обесцвечивание мителенового синего и резазурина наступает тем быстрее, чем больше микро­бов в молоке. По скорости обесцвечивания краски молоко разделяют на 4 клас­са (таблица 10).

Показатель	Класс
	1	2	3	4
Время восстановления	Более 5,5ч	5,5-2ч	2ч 20мин	Менее 20мин
Качество молока	Хорошее	Среднего качества	Плохое	Очень плохое
Количество микроорганизмов в 1мл молока	Менее 500тыс.	От 500тыс. до 4млн.	От 4млн. до 20млн.	Более 20млн.

Постановка пробы

В пробирки наливают 20мл молока и 1мл метиленового синего или 10мл молока и 0,5мл метиленового синего. После тщательного смешивания пробирки помещают в водяную баню или термостат при температуре 38-40°С. Такую температуру поддерживают в течение всего опыта до полного обесцвечивания молока. Первые 20мин наблюдения ведут непрерывно, в дальнейшем просмотр пробирок производят периодически через каждые 15-ЗОмин.