Импрегнация по методу Гомори-Грокотт.

Фиксация: 10% формалин.

Растворы: 2% хромовая кислота

5% нитрат серебра

3% метенамин:

Hexamethylentetraamine 3,0

дистиллированная вода 100.0

5% буры

Маточный раствор метенамин-серебра:

5% нитрат серебра 5,0

3% метенамин 100,0

(раствор сохраняется в холодильнике в течение месяца).

1% Na бусульфит

0,1% хлорное золото (раствор может быть использован повторно).

2% Na тиосульфат (гипосульфит)

Маточный раствор светового зеленого

Light green (yellow) 0,2

Дистиллированная вода 100,0

Ледяная уксусная кислота 0,2

Рабочий раствор светового зеленого:

Маточный раствор 10,0

Дистиллированная вода 50,0

Процедура окраски:

1. Денарафинированные срезы довести до воды.

2. Обработать 5% хромовой кислотой в течение 1 часа.

3. Промыть проточной водой в течение нескольких секунд.

4. Промыть 1% раствором биосульфита Na в течение 1 мин для освобождения от остатков хромовой кислоты.

5. Промыть проточной водой 5-10 минут.

6. Промыть в 3-4 порциях дистиллированной воды.

7. Препараты поместить в рабочий раствор метанамин-серебра при 58-60 ^оС на 30-60 минут до приобретения ими желтовато-коричневой окраски. Контролировать окраску под микроскопом.

8. Промыть в 6 порциях дистиллированной воды.

9. Тонировать в 0,1% растворе хлорного золота в течение 2-5 минут.

10. Промыть в дистиллированной воде.

11. Закрепить окраску в 2% растворе Na тиосульфата в течение 2-5 минут.

12. Промыть в проточной воде.

13. Докрасить в рабочем растворе светового зеленого 30-45 секунд.

14. Дегидротировать и заключить препараты в бальзам.

Результаты: Грибы окрашены очень контрастно в черный цвет. Муцин – в темно-серый цвет.

Внутренние части гифов грибов – в темно-розовый. Окружающие ткани окрашены в светло-зеленый.

Источник: Grocott R.C. // Am.J.ournal of Clinical Path., 1955.- P. 975-979.

Окраска по методу Гридли

Фиксация: 10% формалин либо другие методы фиксации.

Растворы:

4% раствор хромовой кислоты

Реактив Шиффа

1Н HCl

10% метабисульфит Na

Сернистая вода: 10% Na метабисульфит – 6,0

1Н HCl

Дистиллированная вода

Раствор альдегид фуксина:*

Основной фуксин – 1,0

Этиловый спирт 70% - 200,0

Паральдегид – 2,0

HCl концентрированная – 2,0

Хранить в холодильнике.

Раствор Metanil Yellow:

Metanil Yellow – 0,25

Дистиллированная вода – 100,0

Ледяная уксусная кислота – 2 gtt

Процедура окраски

1. Мазковые препараты, отпечатки или денарафинированны срезы довести до воды.

2. Залить 4% хромовой кислотой на 1 час.

3. Промыть проточной водой – 5 мин.

4. Препараты поместить в реактив Шиффа на 15-20 мин.

5. Промыть в 3-х порциях сернистой воды.

6. Промыть проточной водой – 15 мин.

7. Препараты поместить в раствор альдегид фуксина на 15-30 мин.

8. Пролить излишки окраски 96% этиловым спиртом.

9. Промыть в воде.

10. Докрасить раствором метаниловым желтым – 1 мин.

11. Промыть в воде.

12. Дегидратировать 96% спиртом, просветлить в ксилоле и заключить в бальзам.

Результаты: Грибы, эластические волокна и муцин – розовые до пурпурных. Другие тканевые структуры – желтые.

Источник: Gridley M.F. Am.J.Clin.Path., 23, 303-307, 1953.

Окраска методом Грама в модификации Боголепова

1. На фиксированный мазок наливают свежеприготовленные раствор эозина 2-3 мин. (насыщенный спиртовой р-р эозина 5 мл + H₂O дистил.95 мл).

2. Сливают краску и, не споласкивая в воде, подсушивают фильтрованной бумагой.

3. Окрашивают карболовым генцианвиолетом (через фильтрованную бумагу) – 5 мин. (1 часть насыщенного спиртового раствора генцианвиолета. 10 частей 2% водного р-ра карболовой кислоты).

4. Ополаскивают препарат в водопроводной воде 15-30 ”.

5. Обрабатывают раствором Люголя 2-3 мин (кристаллический I – 1 г, KI – 2 г, дистил. вода – 300 мл). Раствор хранить в темноте. Обсушивают фильтрованной бумагой.

6. Дифференцируют 96 ^о спиртом, наливая и сливая его, пока отходит синяя краска и не обесцвечивается мазок (~ 20-60 ”).

7. Хорошо промывают в проточной воде и высушивают фильтрованной бумагой.

Результат: Грам + микроорганизмы окрашиваются в темно-синий цвет. Особенно четко выявляются актиномицеты и нокардии. Дрожжеподобные грибы (Грам+) окрашиваются непостоянно.