Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Методы разделения и идентификации аминокислот
Одним из основных методов разделения и идентификации аминокислот является хроматография. Принцип хроматографического разделения соединений состоит в том, что молекулы веществ разделяемой смеси по-разному распределяются между стационарной и подвижной фазами. По механизму разделения анализируемых веществ выделяют адсорбционную, распределительную, ионообменную и эксклюзионную хроматографии. В адсорбционной хроматографии разделение веществ происходит за счет их различной способности адсорбироваться и десорбироваться на сорбенте с развитой поверхностью, например, силикагеле. Распределительная хроматография обеспечивает разделение за счет разной растворимости анализируемых веществ в неподвижной и подвижной фазах. Неподвижная фаза, как правило, химически привита к поверхности неподвижного носителя. В ионообменной хроматографии молекулы веществ смеси, диссоциированные в растворе на катионы и анионы, разделяются за счет ионных взаимодействий с сорбентом, на поверхности которого привиты катионные или анионные центры, способные к обмену с ионами анализируемых веществ. В эксклюзионной (ситовой, гель-проникающей, гель-фильтрационной) хроматографии молекулы веществ разделяются по размеру за счет их разной способности проникать в поры носителя.
Хроматография на бумаге В настоящее время этот метод в значительной мере вытеснен более совершенными методами, но его продолжают применять для разделения аминокислот. Выделяют восходящую и нисходящую хроматографии на бумаге. При восходящей хроматогафии растворитель заливают на дно хроматографической камеры, а бумагу с нанесенными на нее образцами (см. ход работы) располагают так, чтобы точки старта не были погружены в растворитель. Последний смачивает нижний конец бумаги, и фронт растворителя постепенно поднимается вверх, обеспечивая разделение анализируемых соединений. В нисходящей хроматографии растворитель заливают в специальную лодочку, помещаемую в верхней части камеры. Один из концов бумаги погружают в растворитель и закрепляют придавив, например, стеклянной палочкой, помещенной на дно лодочки. Остальная часть хроматографической бумаги свободно свисает в камере, и растворитель постепенно смачивает ее сверху вниз. Хроматографическая камера плотно закрывается для удержания паров растворителя, которые препятствуют высыханию бумаги. С этой же целью на дно камеры наливают небольшое количество растворителя для усиления испарения.
По окончании хроматографии полоску бумаги, смоченную растворителем, извлекают из камеры, высушивают и обрабатывают определенным образом, для проявления разделяемых соединений. При разделении аминокислот бумагу обрабатывают 0.5% раствором нингидрина в ацетоне с последующим прогреванием в течение нескольких минут при 90-110°С. Для разделения аминокислот используют полярные растворители в виде бинарных, тройных и более сложных смесей воды, спиртов, кислот и оснований. Более полярные компоненты растворителя ассоциируют с целлюлозой и образуют стационарную фазу, а менее полярные составляют подвижную фазу. Поэтому разделение аминокислот на бумаге представляет собой вариант распределительной хроматографии. Аминокислоты с объемными неполярными боковыми цепями (Leu, Ile, Phe, Trp, Val, Met) перемещаются быстрее, чем аминокислоты с более короткими неполярными боковыми цепями (Pro, Ala, Gly) или с полярными боковыми цепями (Thr, Glu, Arg, Ser, Asp, His, Lys, Cys). Это обусловлено большей растворимостью полярных молекул в гидрофильной стационарной фазе и неполярных – в органических растворителях. Отметим, что в ряду неполярных аминокислот (Gly, Ala, Val, Leu) при увеличении длины неполярной боковой цепи, увеличивается и подвижность аминокислоты. Отношение расстояния, на которое перемещается данная аминокислота, к расстоянию, пройденному фронтом растворителя (обе величины определяют от линии старта), называют подвижностью и обозначают символом Rf. Значение Rf для каждой аминокислоты зависит от условий разделения, например, от типа растворителя. Рекомендуется одновременно с неизвестной смесью аминокислот проводить хроматографирование стандартов. В этом случае подвижности компонентов исследуемой смеси можно сравнить с подвижностями стандартов.
Для количественного определения каждое пятно вырезают и аминокислоту элюируют (вымывают) подходящим растворителем; затем после добавления нингидрина измеряют оптическую плотность раствора. В другом случае бумагу обрабатывают нингидрином и интенсивность окрашивания пятен измеряют с помощью специального фотометра (денситометра) в проходящем или отраженном свете. При разделении смесей аминокислот часто используют двухмерную хроматографию. В этом случае смесь наносят в один из углов квадратного листа бумаги и проводят разделение в одной системе растворителей. Затем лист извлекают, высушивают, разворачивают его на 90° и хроматографируют в другом растворителе. Данный метод получил наибольшее распространение именно для разделения аминокислот, так как при одномерной хроматографии не всегда удается достичь полного разделения вследствие близких значений Rf у некоторых аминокислот.
Пептиды
Пептиды – это органические молекулы, в состав которых входит несколько аминокислотных остатков, связанных пептидной связью. В зависимости от количества остатков аминокислот и молекулярной массы различают: низкомолекулярные пептиды (состоящие из двух – десяти остатков аминокислот – ди-, три-, тетра-, пентапептиды и т. д.), пептиды со средней молекулярной массой (от 500 до 5000 дальтон, так называемые «средние молекулы») и высокомолекулярные пептиды (с молекулярной массой от 5000 до 16000 дальтон).
|
||||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-03-09; просмотров: 74; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.21.154.20 (0.006 с.) |