Тема 30. Вирусы и вирусные инфекции. Морфология и физиология вирусов. Методы лабораторной диагностики.

Задача №1.  

Для выделения вирусов в культуре клеток тканей используются раствор трипсина, раствор Хенкса, среда 199, бычья сыворотка, Игла.

Вопросы:

1. Какие питательные среды должны входить в состав ростовой питательной среды для культивирования культур тканей и клеток?

2. Назначение питательных сред и солевых растворов в вирусологии?

3. Как получают первичные культуры клеток?

Ответ:

1. В состав ростовой среды обязательно помимо синтетической или полусинтетической питательной среды должно входить 5-10% естественной (нормальной сыворотки крови, эмбриональный экстракт, амниотическая или асцитическая жидкость).

2. Солевые растворы и питательные среды обеспечивают сохранение, рост и размножение эукариотических клеток.

3. В основе получения первичных культур лежит обработка кусочков тканей (эмбриональных, опухолевых или нормальных) протеолитическими ферментами, например, трипсином, который разрушает межклеточные связи в тканях и органах с образованием изолированных клеток.

 

Задача №2.

Проведено заражение куриного эмбриона для выделения вируса гриппа. После инкубации в термостате зараженного эмбриона отмечается его гибель.

1. Назовите оптимальные методы заражения куриного эмбриона исследуемым материалом для выделения вируса при диагностике гриппа и натуральной оспы.

2. Назовите методы индикации вирусов в курином эмбрионе.

3. Какие вирусы можно культивировать на данной биологической модели?

4. Оценить данный результат.

Ответ:

1. При диагностике гриппа для выделения вируса наиболее оптимальным является заражение исследуемым материалом КЭ в полость амниона, при диагностике натуральной оспы - хорион-аллантоисную полость или на ее оболочку.

2. О репродукции вируса в курином эмбрионе свидетельствуют: специфические поражения оболочек и тела эмбриона, гибель эмбриона, положительная РГА.

3. Вирусы гриппа, натуральной оспы, герпеса.

4. Гибель куриного эмбриона подтверждает наличие вируса.

Задача №3.

Проведено заражение культуры клеток вируссодержащим материалом.

1. Назовите методы индикации вируса в культуре клеток.

2. Назовите виды культур клеток тканей в зависимости от числа жизнеспособных генераций.

3. Какие вирусы можно обнаружить по внутриклеточным включениям?

Ответ:

1. Выявление ЦПД вирусов; обнаружение внутриклеточных включений вируса; цветная проба; реакция гемагглютинации и гемадсорбции, выявление бляшек;

2. Первичные, перевиваемые, полуперевиваемые;

3. Вирус натуральной оспы (тельца Гварниери), вирус бешенства (тельца Бабеша-Негри), вирус герпеса и аденовирусы по внутриядерным включениям.

Автор: Николаева Л. И.

Задача №4.

Проведена цветная проба на культуре клеток ткани, зараженной материалом от больных «А» и «В» с подозрением на заболевание вирусной этиологии. Результаты ЦП: контрольная незараженная культура клеток ткани желтого цвета, опыт «А» - красный, «В» - желтый цвет.

2. Цель цветной пробы?

3. Назовите критерий достоверности полученных результатов.

4. Учтите и оцените результаты ЦП

Ответы:

1. Индикация вирусов;

2. Контрольная незараженная культура;

3. У обследуемого «А» подтверждена вирусная этиология заболевания, так как цветная проба положительна: среда сохранила первоначальный цвет, вирусы ингибируют клеточный метаболизм. У обследуемого «В» ЦП отрицательна, вирусная этиология заболевания не подтверждена.

Задача №5.

При микроскопии препарата из содержимого везикул, окрашенного по Морозову, отмечается наличие темно-коричневых, почти черных частиц на светло- коричневом фоне.

1. Сделать заключение по данной микроскопической картине;

2. Какие вирусы можно увидеть в обычном микроскопе при специальных методах окраски?

3. Значение определения элементарных телец?

Ответы:

1. В препарате обнаружены элементарные тельца Пашена, что характерно для вируса натуральной оспы;

2. Крупные вирусы размером более 200 мкм;

Обнаружение элементарных телец имеет диагностическое значение и используется для индикации вирусов.