Твердофазный иммуноферментный анализ

Твердофазный иммуноферментный анализ – один из самых многофункциональных серологических методов диагностики инфекционных заболеваний, который применяют для определения с равной эффективностью как антигенов, так и антител. Принцип метода показан на рис. 1.18. Он основан на связывании антигена антителами, иммобилизованными на поверхности пластиковой лунки. Связавшийся антиген затем определяют с помощью второго антитела. Комплекс антитело-антиген-антитело затем определяют с помощью антииммуноглобулина, меченого ферментом. Существует множество вариантов этой схемы.

Главное преимущество метода – усиление, так как каждое антитело с ферментной меткой способно реагировать со многими молекулами субстрата с образованием окрашенного продукта. Это дешевый и надежный метод, который может найти разнообразное применение. Главный недостаток твердофазного иммуноферментного анализа – в том, что реакции происходят в жидкой фазе, и, следовательно, требуется аккуратно отмеривать растворы. Перекрестная контаминация между лунками может иметь катастрофические последствия. По этим причинам твердофазный иммуноферментный анализ выполняется только в специализированных лабораториях опытными специалистами. Созданы тест-системы для практического использования (так называемые CITE тесты). В большинстве случаев твердая лунка заменена специальной мембраной. Так как реакция происходит в жидкой фазе, важно следить за тем, чтобы мембрана не высыхала.

 

Иммуноиммиграционный экспресс-анализ

Иммуноиммиграционный экспресс-анализ (рис. 1.19) имеет много общего с твердофазным иммуноферментным анализом и CITE. Доказано, что этот метод подходит для использования на практике; в настоящее время он очень популярен для диагностики многих вирусных инфекций или для определения серологической конверсии, вызванной возбудителем. Метод основан на связывании частиц коллоидного золота или латекса, покрытых антителами, с вирусными белками или сывороточными антителами (рис. 1.19). Комплекс диффундирует вдоль мембраны, пока не достигнет полосы специфичных антител к определяемому белку. Комплекс коллоид-белок-антитело образует агрегаты вдоль этой линии, что приводит к изменению цвета полосы. Имеется также контрольная полоса, показывающая, что тест проведен правильно и комплексы коллоид-белок-антитело диффундировали достаточно далеко (рис. 1.19). Если контрольная полоса не появилась, тест недействителен. В таком случае образец нужно послать в лабораторию для дальнейшего исследования.

 

Подпись к рисунку.

Рис. 1.19: пример иммуноиммиграционного экспресс-теста

А) Кровь или плазма, содержащая антиген Б) Тестовая полоска В) Контрольная полоска Г) Мембрана Д) После нанесения крови на фильтр частицы коллоидного золота, импрегнированные антителами, связываются с антигеном и мигрируют вдоль мембраны. Е) Антитела к определяемому антигену Ж) Антитела к коллоидному золоту З) Кровь или плазма Фильтр И) При положительной реакции появляется видимая полоса преципитата антител. К) Результатом контрольной реакции является видимая полоса преципитата.

Рис. 1.20: Принцип иммуноиммиграционного экспресс-метода

 

ЛИТЕРАТУРА И ДАЛЬНЕЙШЕЕ ЧТЕНИЕ

 

Глава 2

Антимикробная и антипаразитарная терапия

Джонатан Эллиот

 

ПЛАН.

Введение

    Механизм действия

    Избирательная токсичность

    Гибель микроорганизмов или торможение их роста

    Синергические и антагонистические реакции

    Резистентность

Антибактериальные препараты

    Спектр действия

    Определение чувствительности микроорганизмов

    Сочетания препаратов

    Фармакокинетика

    Метод введения и скорость всасывания

    Распределение в области инфекции

    Выведение из организма

    Правила дозирования

    Ингибиторы действия антибактериальных препаратов

Побочное действие

    Устранение побочных эффектов:

    Обсуждение фармакодинамики

    Отбор в сторону устойчивости в бактериальной популяции

Антивирусные препараты

    Ацикловир

    Трифлуридин

Препараты против ретровирусов

    Цидовудин

    Другие препараты против ретровирусов

Антигрибковые препараты

    Терапевтическая классификация антигрибковых препаратов

    Антигрибковые препараты при систематическом применении

Антипаразитарные препараты

    Эндопаразитоциды

    Спектр действия и фармакокинетика

       Токсичность

Эктопаразитоциды

       Спектр действия и фармакокинетика

       Нежелательные эффекты

Антипротозойные препараты

_________________________________________________________________________________

 

ВВЕДЕНИЕ.

Антимикробные и антипаразитарные препараты настолько широко используются для лечения мелких домашних животных, что кажется, их можно применять бесконтрольно. Логический подход к выбору этих важных препаратов необходим по двум причинам:

· Большое разнообразие в продаже антимикробных и антипаразитарных препаратов для лечения мелких животных затрудняет выбор

· Назначение препаратов ветеринарными врачами необходимо тщательно контролировать, иначе возможно развитие резистентности к антибиотикам у возбудителей заболеваний человека.

 

Подходящий препарат подбирают с учетом условий, которые можно разделить на три группы:

· Патоген

- Вызваны ли клинические проявления микроорганизмом?

- Какие патогены могут вызвать процесс?

- Какова чувствительность патогена к антибиотикам?

· Хозяин

- Каковы естественные защитные силы организма хозяина против патогена?

- Какие барьеры в организме хозяина могут помешать препарату достичь патогена?

- Какова будет реакция на препарат со стороны ослабленного организма хозяина?

· Препарат

- Каково действие препарата на патоген?

- Какая доза потребуется, и каким курсом нужно давать препарат?

- Каково побочное действие препарата на организм хозяина?

Отношения между хозяином, патогеном и препаратом можно изобразить в виде «терапевтического треугольника» (рис. 2.1.)

А) организм-хозяин Б) препарат В) патоген Г) фармакокинетика, токсичность Е) фармакокинетика, спектр действия Д) иммунитет, факторы вирулентности

Рис. 2.1: терапевтический треугольник

 

Механизм действия

Понимание механизма действия антимикробных и антипаразитарных препаратов помогает объяснить их важные клинические свойства. Механизмы действия основных групп этих препаратов представлены на рисунках 2.2–2.4. Зная механизм действия препарата, можно прогнозировать:

· Степень избирательной токсичности, достигаемая при его применении

· Действие на патоген (-«цидное» или –«статическое»)

· Будет ли препарат взаимодействовать с другими как синергетик, антагонист, или дополнять их действие

· Развивается ли резистентность

 

Избирательная токсичность.

Избирательная токсичность является целью антимикробной и антипаразитарной терапии и основана на использовании различий между микроорганизмом и организмом млекопитающего во время лечения. Препарат обладает полной избирательной токсичностью, если при концентрации в тканях хозяина он повреждает патоген, но оставляет незатронутыми клетки организма. Чем меньше физиологических связей между возбудителями и организмом хозяина, тем труднее достичь полной избирательности. Например, вирусы используют многие ферменты хозяина для собственной репликации, и, следовательно, найти способ остановить их репликацию без повреждения клеток хозяина очень сложно.