Что такое титр вир и принцип его опред-ия по инфекц-му д-ию вир.

Титр – это кол-во вируса, содер в ед объема материала.Вир м титровать по инфекц-му д-ию.

Титр по эф-ти их д-ия,те какой эф-т вир оказ-ет на ту или иную жив сист..Эф-ть д-ия вир выр-ся в эффект-х дозах(ЭД). За 1ЭД₅₀ прин-ем такую дозу вир,кот при введ гр живых сист.выз-ет эф-т в 50% случаев(не мене 4 жив систем). Инфекц Титр вируса-кол-во эффект-х доз его в ед V(чаще в 1мл) 1ЭД м обозн-ся по-разному,в зав-ти от эффекта и от той живой сист,на кот мы титруем вирус: 1)Гибель: ЛД₅₀ (летальная доза)-лаб жив, ЭЛД₅₀(эмбр лет доза)-кур эмбр, кк-нет гиб 2)Видимые изменения(клиника,пат изм):

ИД₅₀(инфекц доза)-лаб жив,ЭИД₅₀ (эмбр инф доза) и ООЕ(оспообр-ие вир ед-вир оспы голубей)-кур эмбрионы,ЦПД₅₀ (цитопат доза) и БОЕ(бляшкообраз-ие ед- под ТВ питат средой)-кк.

Берем неск-ко пробирок(напр 5),размор-ем вирус.В кажд проб-ку по 9мл физ р-ра. Затем в 1 проб из бутыли с вир переносим 1мл вир(пипетку в физ р-р),размешать. Затем из сод-го 1й во 2 1мл смеси,из 2й в 3ю и тд…из последний не выливаем.

Каждым развед-ем мы зар-ем четное число биол систем(не менее 4х)-4 кур эмбриона.Ставим в термостат,затем учитываем.

Положит-й эф-т(+)-гибель

1(1:10)++++

2(1:100)++++

3(1:1000)++--

4(1:10000)----

5(1:100000)----

В развед 1:1000-50% эф-т =>в этом развед сод-ся 1ЭД₅₀ =1 ЭЛД₅₀

Титр вир=числу(во сколько раз надо развести исх-й вир,чтобы пол-сь 1ЭД₅₀)

Тв=1000 ЭЛД_50/0,2=5*10³ ЭЛД_50/мл

0,2-кол-во мл,каким зар эмбрион.

Если эф-т не виден,то подсчёт инфекц титра проводят по методу Кербера или методу Рида и Менча.

Формула Кербера: lgЛД50=lgD+lgd/2-lg∑r/n

D-наибольшее развед вир,кот дает еще 100% эф-т d-коэф-т разведения(=10);r-кол-во (+)-павших;n-кол-во живых систем,зар-х каждым разведением(со 2-го развед,тк в 1-м они и так погибнут).

 

 

Что такое титр вир и принцип его опред по гемаглютинир-му д-ию.(Тга)

Титр – это кол-во вируса, содер в ед объема материала.Вир имеют белок- гемагглютинин.Они склеивают эр. Титр опред-ют по эф-ту гемагглютинации.Выр-ся ГАЕ(гемагл ед). 1ГАЕ-наибольшее развед вир,кот еще выз-ет агглют-ию эр на «++»

РГА Мб качественной(для индикации (обнаруж)вируса-капельная РГА) и колич-й(Тга).

Р-ция пров-ся в плестеглазовых (пласти-ковых) планшетах.Не треб-ся стирильн условий

1)Готовят последов-ое 2х кратное развед вир(1:2,1:4,1:8…)

2)В каждое развед доб-ют равный V 1% взвеси эритр-в опред-го вида и оставл-ют на контакт

3)Уч-т рез-т РГА в крестах:

ГА(100-75%эр)-«+++» - полный зонтик

ГА(50%эр)-«++» - неполн зонтик (пол эр обр-ют взвсь,а др пол осела на дно)

ГА(25%)-«+»- маленький зонтик

ГА-«-»-пуговка(все эр оседают)

4)Опред-ют гемаглют-й титр(Тга):снач узнают в каком развед нах-ся 1ГАЕ.

Тга-то число,во сколько раз был разведен вирус,чтоб в получ-м развед сод-сь 1ГАЕ

Берем 6 пробирок,6-контроль(эр+физ р-р): 1)(1:2)0,2мл физ р-ра(разбавитель)+0,2мл вир БН+0,2мл 1%взвеси эр-в петуха;2)(1:4)0,2мл из пред-й проб-ки+0,2физ р-ра+0,2 1%взвеси и тд до 5-й.Оставляем на контакт на 30 мин при комн-й темпер-ре.

От чего зав-т р-ия ГА:

1)от наличия вир гемагглютинирующего

2)исп-ся эр опред-го вида хозяина(ВБН-эр кур и петухов);

3)опред усл для постан р-ции:буф-й р-р (физ р-р,карбонатный,фосфатный буфер); рН(нейтр),комн темп,время конт(30мин)

Учет нач-ем с того мом-та как сраб контроль:

6)контроль-все эр осели «-»

5)пуговка «-»

4)неполный зонтик «++»(1ГАЕ) =>эф 50%

3,1 и 2)полн зонтик «+++»=>2,4 и 8 ГАЕ

=> Тга=16ГАЕ-во сколько раз разведение(в 16 раз в 4 лунке)

 

Использование куриных эмбрионов в вирусологии.

Куриный эмбрион развивается 21 день. Заражение вирусом производится с 5-го по 12-й день.

 

Топография куриного эмбриона (продольный разрез, 12 дней)

 

1. Скорлупа

2. Подскорлупная оболочка

3. Воздушная камера

4. Аллантоисная полость

5. Желточный мешок

6. Альбуминный мешок

7. ХАО – хорион-аллантоисная оболочка

8. Амниотическая полость

9. Эмбрион

10. Канатик (соединение желточного мешка с пуповиной)

 

Для заражения выбирают здоровые эмбрионы. Для этого проводят овоскопию. На скорлупе делают пометки карандашом – границы воздушной камеры и местоположение зародыша.

 

 

I. Заражение в аллантоисную полость.

 

Все операции проводят асептично с горящей газовой горелкой. Место введения обрабатывают 2% йодированным спиртом, вводят 0,1-0,2 мл жидкости. Отверстие закрывают каплей расплавленного парафина. На скорлупе пишут:

- название вируса

- дату

- фамилию