Алгоритм лабораторної роботи 1

1 Готують 8 пробірок, маркують їх по порядку від 1 до 8.

2 У всі пробірки вносять субстрат і активатор амілази.

3 У першу пробірку вносять амілазу (яка міститься в сечі) і розводять фермент у геометричній прогресії.

4 Пробірки інкубують 30 хв. при t⁰ = 38⁰C.

5 Активність амілази визначають за якісною реакцією з йодом.

Методика проведення експерименту.

Визначення активності амілази в сечі за методом Вольгемута

Принцип методу: метод ґрунтується на визначенні мінімальної кількості амілази, яка здатна розщепити задану кількість крохмалю протягом певного часу за стандартних умов. За одиницю активності діастази взята кількість, мл, 0,1% розчи-ну крохмалю, яку може розщепити амілаза в 1 мл сечі при 37⁰С за 30 хв.

Хід роботи: у 8 пробірок вносять по 1 мл 0,85% розчину NаСl. У першу пробірку додають 1 мл сечі, перемішують, відбирають 1 мл цієї суміші і переносять у другу пробірку. Вміст другої пробірки також перемішують, відбирають 1 мл суміші і переносять у третю пробірку і т.д. З останньої пробірки 1 мл суміші виливають для зрівняння об΄ємів у всіх пробірках. Отримують ряд розведень сечі, де концентрація ферменту в кожній наступній пробірці вдвічі менша, ніж у попередній (розведення сечі у 2, 4, 8, 16 і т.д. разів). Далі у кожну пробірку додають по 2 мл розчину крохмалю, перемішують і ставлять на 30 хв. у термостат при 37⁰С. Після інкубації у кожній пробірці проводять реакцію з йодом. Позначають останню пробірку у ряду, де спостерігається жовте забарвлення з йодом (тобто крохмаль розщепився).

Результати записують у таблицю.

Показник	Пробірка
Розведення сечі
Кількість 0,1% розчину крохмалю
Результат йодної проби

Розрахунок проводять за формулою

Х = 1· 2 · розведення сечі,

де1 – кількість сечі, мл;

2 – кількість 0,1% розчину крохмалю.

Клініко-діагностичне значення. Визначення активності α-амілази крові й сечі широко використовується у клінічній практиці з метою діагностики захворювань підшлункової залози. Амілаза – один із екскреторних ферментів, які всмоктуються в кров з тонкого кишечника і виділяються із сечею як низькомолекулярні білки. У нормі активність амілази в крові дорівнює 12-30 мг/мл·год (або г/л·год). Нормальні значення активності α-амілази сечі (діастази), яка визначена за Вольгемутом, варіюють у межах 16-64 одиниць. Цей показник широко використовується в клінічній практиці з діагностичною метою.

При гострих панкреатитах діастаза зростає в 10-30 разів, особливо у першу добу, потім поступово нормалізується. Хронічний панкреатит, рак підшлункової залози не супроводжу-ються різким підвищенням активності діастази. Деяке зростання активності амілази може супроводжувати паротит у дітей. При нирковій недостатності амілаза в сечі відсутня.

 

Після проведення експериментальної частини ви повинні оформити протокол лабораторної роботи.

 

Виконайте завдання та перевірте правильність їх розв’язання з еталоном відповіді.

Завдання 1

У відділення реанімації прийнятий хворий 47 років з діагнозом інфаркт міокарда. Яка з фракцій лактатдегідрогенази (ЛДГ) буде переважати в сироватці крові протягом перших двох діб?

А. ЛДГ 4.

В. ЛДГ 2.

С. ЛДГ 3.

Д. ЛДГ 1.

Е. ЛДГ 5.

Еталон відповіді: Д.

Завдання 2

При ентеробіозі призначають акрихін - структурний аналог вітаміну В₂. Порушення синтезу яких ферментів у мікроорганізмів спричиняє цей препарат?

А Цитохромоксидаз.

В ФАД-залежних дегідрогеназ.

С Пептидаз.

Д НАД-залежних дегідрогеназ.

Е Амінотрансфераз.

Еталон відповіді: В.

Завдання 3

При підвищенні температури вище 50⁰С швидкість ферментативної реакції:

А Значно збільшується.

В Незначно збільшується.

С Не змінюється.

Д Незначно зменшується.

Е Різко зменшується.

Еталон відповіді: Е.

 

 

Завдання 4

При якому значенні рН аргіназа максимально активна?

А 1-2.

В 5-6.

С 7.

Д 6-8.

Е 10-11.

Еталон відповіді: Е.

Завдання 5

Діагностичним тестом при гострих панкреатитах є визначення в сечі активності такого ферменту:

А. Амілази.

В. Лактатдегідрогенази.

С. Креатинкінази.

Д. Альдолази.

Е. Аланін-амінопептидази.

Еталон відповіді: А.

 

Завдання 6

При вивченні властивостей ферменту до системи фермент-субстрат було додано невідому речовину. В результаті константа Міхаеліса збільшилася в 2 рази. Яке явище мало місце?

А. Конкурентне інгібування.

В. Неконкурентне інгібування.

С. Безконкурентне інгібування.

Д. Алостерична активація.

Е. Незворотне інгібування.

Еталон відповіді: А.

Короткі методичні вказівки до роботи студентів на практичному занятті

Заняття починається з вирішення навчальних задач, після чого необхідно виконати лабораторний дослід.

У кінці заняття проводяться тестовий контроль, аналіз результатів роботи, в яких беруть участь всі студенти під керівництвом викладача.