Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Аспартат- и аланин-аминотрансфераз в сыворотке крови.
Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови имеет важное значение для диагностики болезней печени (гепатитов). Аланинаминотрансфераза повышается весьма рано. При затяжном течении болезни наблюдается длительная гиперферментемия. При инфаркте миокарда в 95% случаях в сыворотке повышается активность аспартатаминотрансферазы. Изменения аминотрансфераз наблюдаются и при некоторых других заболеваниях. В сыворотке здоровых людей содержание аспартатаминотрансферазы (АсАТ) колеблется в пределах 10-40 МЕ/л, а содержание аланинаминотрансферазы (АлАТ) - в пределах 7-40 МЕ/л. Принцип метода В результате переаминирования, происходящего под действием АсАТ и АлАТ, образуются соответственно щавелевоуксусная (ЩУК, оксалоацетат) и пировиноградная (ПВК) кислоты: СООН СООН СООН СООН ç ç ç ç СН-NН2 + С=О ® С=О + СН-NН2 ç ç АсАт ç ç СН2 (СН2)2 СН2 (СН2)2 ç ç ç ç СООН СООН СООН СООН аспартат a-кетоглутарат оксалоацетат глутамат СООН СООН СООН СООН ç ç ç ç СН-NН2 + С=О ® С=О + СН-NН2 ç ç АлАт ç ç СН3 (СН2)2 СН3 (СН2)2 ç ç СООН СООН аланин a-кетоглутарат пируват глутамат
В процессе другой ферментативной реакции (декарбоксилирования) ЩУК превращается в ПВК. При добавлении кислого 2,4-динитрофенилгидразина энзиматический процесс останав-ливается и образуется гидразон пировиноградной кислоты. Последний в щелочной среде дает окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоты и определяется с помощью фотоэлектроколориметра. Ход работы Определение АсАТ. Одновременно готовят опытную и контрольную пробы. Опытная проба. В пробирку вносят 0,5 мл субстратного раствора (29,2 мг а-кетоглутаровой кислоты и 2,66 г D,L-аспарагиновой кислоты в 100 мл 0,1 М фосфатного буфера, рН 7,4), добавляют 0,1 мл сыворотки и пробирку помещают в термостат при температуре 37° С на 1 час. Затем прибавляют 0,5 мл динитрофенилгидразинового раствора (19,8 мг 2,4-динитро-фенилгидразина в 100 мл 1 н. раствора НС1) и пробу выдерживают 20 мин при комнатной температуре для развития реакции. Затем приливают 5 мл 0,4 н NаОН, тщательно перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 мин для развития окраски. Оптическую плотность измеряют на ФЭКе с зеленым светофильтром в кювете на 10 мм против контроля.
Контрольная проба. Содержит все ингредиенты опытной пробы за исключением сыворотки крови. Вместо нее берут 0,1 мл дистиллированной воды и инкубируют в тех же условиях, что и опытную. Определение АлАТ. Одновременно готовят опытную и контрольную пробы. Опытная проба. В пробирку вносят 0,5 мл субстратного раствора для определения АлАТ (29,2 мг a-кетоглутаровой кислоты и 1,78 г D,L-аланина в 100 мл 0,1 М фосфатного буфера, рН 7,4), затем добавляют 0,1 мл испытуемой сыворотки и помещают в термостат на 30 мин при 37° С. Дальнейший ход анализа такой же, как при определении АсАТ. Контрольная проба. В контрольную пробу вместо сыворотки крови берут 0,1 мл дистиллированной воды. Расчет активности ферментовпроизводят по калибровочному графику, показывающему зависимость оптической плотности от содержания ПВК с учетом времени инкубации. Эталоны ответов на тесты
1.1. – Д 1.2. – В 2.1. – 1–Б,В,Д,Е; 2–А,Г; 3–Б,Д,Е 2.2. – 1-Д, 2-А, 3-Г, 4-В 3.1. – 1,3 3.2. – 1,2,3 4.1. – Е (- - -) 4.2. – С (+ - -) Эталоны ответов на ситуационные задачи Задача 1. Дезаминирование аланина через переаминирование с последующим участием НАД-дегидрогеназы в дыхательной цепи будет сопровождаться синтезом трех молей АТФ на моль аминокислоты. Образовавшаяся пировиноградная кислота пройдет обычный путь окисления: окислительное декарбоксилирование с образованием ацетил-КоА и распадом ацетила в ЦТК. Подсчитайте энергетический эффект окисления пировиноградной кислоты и прибавьте 3 моля АТФ, синтезированных за счет энергии, высвободившейся при окислительном дезаминировании аланина. (18 АТФ). Задача 2. Принцип решения тот же, что и в задаче 1: дезаминирование глутаминовой кислоты осуществляется при участии НАД-дегидрогеназы, а образующаяся при этом α-кетоглутаровая кислота сгорает в ЦТК. Подсчитайте ее энергоотдачу и прибавьте 3 моля АТФ. Для подсчета энергоотдачи необходимо написать частные реакции ЦТК. (12 АТФ).
|
|||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; просмотров: 284; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.17.128.129 (0.004 с.) |