Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Работа 1. Количественное определение
Пировиноградной кислоты в моче. Пировиноградная кислота является одним из промежуточных продуктов углеводного и аминокислотного обменов. В аэробных условиях пировиноградная кислота подвергается окислительному декарбоксилированию под влиянием комплекса ферментов, которые связаны с митохондриями. В качестве коферментов в этом процессе участвуют ТДФ (ТПФ) и амид липоевой кислоты. В результате окислительного декарбоксилирования пировиноградная кислота превращается в ацетил-КоА. Принцип метода Пировиноградная кислота взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином в щелочной среде, образуя 2,4-динитрофенилгидразоны пировиноградной кислоты желто-оранжевого цвета, интенсивность окрашивания которых пропорциональна концентрации пировиноградной кислоты (рис.). Гидразоны α-кетоглутаровой, щавелевоуксусной, дегидроаскорбиновой кислот в щелочной среде нестойки и быстро разлагаются. Ход работы Контрольная и опытнаяпробы ставятся одновременно, пользуются сухой химпосудой. Берут 2 пробирки: в контрольную наливают 1мл воды в опытную 1 мл мочи. Зачем в обе пробирки приливают по 1 мл 2,5% спиртового раствора КОН, перемешивают в течение 1 минуты, а затем приливают по 0,5мл 0,1 % раствора 2,4-динитрофенилгидразина и оставляют стоять на 15 минут при комнатной температуре. Колориметрируют на ФЭК против контроля на реактивы (проба с водой) в кювете толщиной 5мм с синим светофильтром. Расчеты выполняют по калибровочному графику, при этом находим содержание ПВК в моче в мкг/мл. Найденную величину умножаем на суточный диурез (1500 мл для мужчин и 1200 мл для женщин) и получаем содержание ПВК в суточной моче. В норме экскреция ПВК с мочой составляет 10-25 мг в сутки (113,7-283,9 мкммоль/сут). Увеличение выделения ПВК с мочой наблюдается при авитаминозе и гиповитаминозе В1, т.к. в крови и других тканях, особенно в мозге, накапливается большое ее количество. Содержание ПВК в крови и экскреция с мочой возрастает также при сахарном диабете, сердечной недостаточности, гиперфункции гипофизарно - адреналовой системы. При наркозе содержание ПВК в крови, напротив, снижается. Работа 2. Качественное определение активности Сукцинатдегидрогеназы мышц.
Сукцинатдегидрогеназа окисляет янтарную кислоту в фумаровую. Коферментом СДГ является флавинадениндинуклеотид. В условиях опыта в качестве акцептора водорода при окислении сукцината используется натриевая соль 2,6-дихлорфенолиндофенола.
В водном растворе окисленная форма 2,6-дихлорфенолиндофенола окрашена в синий цвет, восстановленная форма - бесцветна. Активность СДГ мышц определяется при добавлении к мышечной кашице растворов сукцината и натриевой соли окисленной формы 2,6-дихлорфенолиндифенола. Если СДГ активна, то интенсивность синей окраски ослабляется благодаря восстановлению красителя. Ход работы В 2 пробирки отмерить по 3мл фосфатного буфера с рН 7,4. В одну пробирку добавить 5 капель 5% раствора янтарной кислоты и для нейтрализации 5 капель 0.1нраствора едкого калия, в другую прилить 10 капель дистиллированной воды. В обе добавить по 1мл 0,001н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола и по 50 мг хорошо измельченной ткани поперечнополосатой мышечной ткани только что убитого животного. Обе пробирки поместить в термостат на 20 минут при 37°С. Затем сравнить интенсивность окраски в контрольной и опытной пробирках.
Химизм реакции: сукцинат окисленная форма фумарат восстановленная форма 2,6-дихлорфенолиндофенола 2,6-дихлорфенолиндофенола
|
|||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; просмотров: 658; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.223.21.5 (0.006 с.) |