Витаминов методом тонкослойной хроматографии

Материалы для исследования: раствор смеси витаминов: В₁, В₂, В₅, В₆, С в 50 % растворе этанола.

Оборудование: хроматографическая камера, силуфоловые пластинки, капилляры, УФ лампа.

Реактивы: 1) подвижная фаза 1 (бензол – этанол - уксусная кислота – ацетон, 70:20:5:5); 2) подвижная фаза 2 (бензол – этанол – уксусная кислота – ацетон, 55:35:5:5).

 

Ход работы

В угол силуфоловой пластинки на расстоянии 2 см от каждой стороны наносят раствор смеси витаминов. Проводят двухмерную хроматографию. Для первого направления используют подвижную фазу 1, затем подсушивают и проводят разделение в перпендикулярном направлении подвижной фазой 2. Затем пластины высушивают и выявляют пятна в УФ свете. Для выявления витаминов используют значения R_f с подвижной фазой 1: В₁ – 0.00, В₆ – 0.17, В₂ – 0.48, В₅ – 0.53, С – 0.68; с подвижной фазой 2: В₁ – 0.00, В₆ – 0.60, В₂ – 0.16, В₅ – 0.22, С – 0.44.

 

 

Работа 12 Количественное определение витамина Р (рутина) в черном и зеленом чае

Количественное определение рутина основано на его способности окисляться перманганатом калия. В качестве индикатора применяется индигокармин, который вступает в реакцию с перманганатом калия, после того как окисляется весь рутин. Экспериментально установлено, что 1 мл 0.05 н. раствора перманганата калия окисляет 3.2 мкг (0.00506 мкмоль) рутина. В черном чае содержится 300-500 мг/кг (474-790 мкмоль/кг) рутина, в зеленом – несколько больше.

 

Материал для исследования: различные сорта черного и зеленого чая.

Оборудование: весы, разновесы, 4 конические колбы на 50 мл, пинцет, мерный цилиндр, бюретки для титрования.

Реактивы: 1) 0,05 н. раствор KMnO₄; 3) индикатор индигокармин.

 

Ход работы

К 0,1 г черного и зеленого чая приливают по 50 мл горячей дистил­лированной воды и проводят экстрагирование (перевод одного или нескольких компонентов из твердого пористого тала в жидкую фазу с помощью избирательного растворителя) в течение 5 мин. Отмерива­ют в конические колбочки по 10 мл экстракта, добавляют по 10 мл дистиллированной воды и 10 капель индигокармина. Титруют раствором перманганата калия до появления устойчивой желтой окраски. Расчеты производят по формуле

 

(мкг(мкмоль)/кг),

 

где 3,2(0,00506) – количество рутина (мкг, мкмоль), соответствую­щее 1 мл 0,05 н. раствора перманганата калия; а – количество 0,05 н. раствора перманганата калия, израсходованное на титрование, мл; 10 – количество вытяжки, взятое для титрования, мл; 50 – общий объем экстракта, мл; 0,1 – масса сухого вещества, мг; 1000 – коэффици­ент пересчета на 1 кг сухого вещества.

 

 

Работа 13 Количественное определение витами­на

С методом йодометрического титро­вания

Аскорбиновая кислота является сильным восстано­вителем и может быть определена йодометрически при определенном значении рН раствора (например рН = 7). При титровании йодом аскорбиновая кислота окисляет­ся, образуя дегидроаскорбиновую кислоту.

 

Материал для исследования: капуста, картофель, лимон, яблоко.

Оборудование: 4 конические колбы на 50-100 мл, бюретка для титрования, терка, ступка с пестиком, фильтр, воронка для фильтрования, вата, толченое стекло или песок.

Реактивы: 2 % раствор НС1, 0,5 % раствор крахмала, 0,003 н. раство­р I₂.

 

Ход работы

Подготовка экстракта из пищевых продуктов для определения витамина С.

2 г капусты или картофеля натереть на терке в чаш­ке Петри или мелко порезать и растереть в ступке с не­большим количеством толченого стекла или песка. Затем, если измельчали на терке, собрать массу из чашки Петри в стаканчик, если в ступке — прямо в ступку добавить 10 мл раствора НС1. Хорошо перемешанную массу отфильтровать через стеклянную воронку с ватой в коническую колбу на 50-100 мл. Массу на ватном фильтре промыть несколькими каплями воды. В фильтрат прилить 1 мл раствора крахмала и титровать рабочим раство­ром I₂ до появления синего окрашивания.

При расчете содержания витамина С в продукте ис­пользовать формулу определения массы при помощи тит­ра по определяемому веществу

 

(г),

 

где н - молярная концентрация эквивалента йода; Э - молярная масса эквивалента аскорбиновой кисло­ты в г, равная в данном случае 88 г; V — объем пошедшего на титрование йода, в мл.

Для пересчета на содержание витамина С в 100 г про­дукта следует использовать формулу

 

(г).

 

Полученный результат сравнить с нормой: содержа­ние витамина С в капусте 45 мг, в картофеле – 20 мг (на 100 г растения).

 

 

Тема 5

НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ

(4 ч)

 

 

Работа 14 Выделение дезоксирибонуклеопротеина из