Изучение особенностей теста на наличие эндотоксинов

1) Испытуемый препарат: Ацесоль, 200 мл, 400 мл.

Максимальное допустимое количество эндотоксина в препарате – 0,5 ЭЕ/мл

Условия при испытании: t=21,0°С, Влажность=65%

Оборудования: Термостат – AZM002711

Испытание проводилось согласно Аналитическому нормативному документу Республики Казахстан (АНД РК 42-7530-14) и по стандартам Государственной Фармакопеи Республики Казахстан, метод А (ГФ РК, том I, 2.6.14.).

МДР(максимальное допустимое разведение) = раз

Количество бактериального эндотоксина в данном препарате не превышает нормы, так как при проверке тестера в пробирке образования твердого геля или густой смеси не наблюдалось.

 

2) Испытуемый препарат: Натрия хлорид (9%) раствор для инфузионной терапии, СерияА.

Максимальное допустимое количество эндотоксина в препарате – 0,5 ЭЕ/мл

Условия при испытании: t=22°С, Влажность=68%

Оборудования: Термостат – AZM002711

Испытание проводилось согласно Аналитическому нормативному документу Республики Казахстан (АНД РК 42-4645-12) и по стандартам Государственной Фармакопеи Республики Казахстан, метод А (ГФ РК, том I, 2.6.14.).

МДР(максимальное допустимое разведение) = раз

Данный препарат является годным для потребления в медицинских целях, так как количество бактериального эндотоксина в данном препарате не превышает нормы.

 

3) Испытуемый препарат: Натрия хлорид (9%) раствор для инфузионной терапии, СерияА.

Максимальное допустимое количество эндотоксина в препарате – 0,5 ЭЕ/мл

Условия при испытании: t=22°С, Влажность=76%

Оборудования: Термостат – AZM002711

Испытание проводилось согласно Аналитическому нормативному документу Республики Казахстан (АНД РК 42-4645-12) и по стандартам Государственной Фармакопеи Республики Казахстан, метод А (ГФ РК, том I, 2.6.14.).

МДР(максимальное допустимое разведение) = раз

Количество бактериального эндотоксина в данном препарате не превышает нормы,так как при проверке тестера в пробирке образования твердого геля или густой смеси не наблюдалось.

 

 

4) Испытуемый препарат: Раствор глюкозы для инъекции(5%)

Максимальное допустимое количество эндотоксина в препарате – 0,25 ЭЕ/мл

Условия при испытании: t=22°С, Влажность=69%

Оборудования: Термостат – AZM002711

Испытание проводилось согласно Аналитическому нормативному документу Республики Казахстан (АНД РК 42-6717-14) и по стандартам Государственной Фармакопеи Республики Казахстан, метод А (ГФ РК, том I, 2.6.14.).

МДР(максимальное допустимое разведение) = раз

Количество бактериального эндотоксина в данном препарате не превышает нормы,так как при проверке тестера в пробирке образования твердого геля или густой смеси не наблюдалось.

 

5) Испытуемый препарат: Раствор глюкозы для инъекции(10%)

Максимальное допустимое количество эндотоксина в препарате – не более 0,25 ЭЕ/мл

Условия при испытании: t=22°С, Влажность=69%

Оборудования: Термостат – AZM002711

Испытание проводилось согласно Аналитическому нормативному документу Республики Казахстан (АНД РК 42-6717-14) и по стандартам Государственной Фармакопеи Республики Казахстан, метод А (ГФ РК, том I, 2.6.14.).

МДР (максимальное допустимое разведение) = раз

Количество бактериального эндотоксина в данном препарате не превышает нормы,так как при проверке тестера в пробирке образования твердого геля или густой смеси не наблюдалось.

Таким образом, по завершению тестирования было получено достаточное количество информации за небольшой промежуток времени. Все испытания проводились в соответствии с Государственной Фармакопеей Казахстана, использовались оборудования нового поколения, соблюдались все правила техники безопасности.

 

 

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

 

Таким образом, исходя из результатов испытаний на кроликах и на ЛАЛ-тестере можно сказать, что абсолютно все испытанные инфузионные растворы являются апирогенными. Но нельзя сказать уверенно, что оба метода коррелируют. Так как количество проверенных препаратов не дает точную достоверность результатов и все растворы принадлежали одной фармацевтической фирме.ЛАЛ-тест имеет более специфические свойства по сравнению с тестами на кроликах. Как было отмечено в первом разделе дипломной работы тут имеет место быть биохимическим реакциям на молекулярном уровне, а вещества в лизате предварительно приготовлены так, чтобы моментально реагировать с исследуемой жидкостью.

При сравнении фармакопей разных стран, включая фармакопею Соединенных Штатов, Европы, Украины, России и Казахстана, не было обнаружено большой разницы, за исключением пункт по уходу за животными. По стандартам у вышеперечисленных стран рацион питания животных - разный. Но в большинстве случаев, как мы можем увидеть по результатам испытания в работе, тестирование на животных дает тот же результат, что и гель-тромб тест. По причине нехватки повторности не удалось установить корреляцию между двумя методами, но ссылаясь на источники, и судя по временным меркам, можно сказать, что ЛАЛ-тест дает быстрый и эффективный результат. Испытания на кроликах по времени составляет в общей сложности 5 часов, а гель-тромб тест занимает всего лишь 1 час. Но учитывая высокую чувствительность гель-тромб теста, специалисту нужно очень постараться делать качественные, точные разведения и работать только под вытяжным шкафом.

 

Выводы:

1) Все испытанные инфузионные растворы апирогенны;

2) Испытание на пирогенностьприменима не только к лекарствам, но и к медицинским оборудованиям и изделиям;

3) Тестирование на наличие бактериальных эндотоксинов высокоспецифичен и наиболее чувствителен по сравнению с испытанием на кроликах;

4) ЛАЛ-тест применяется не только в пунктах проверки лекарственных препаратов и медицинских изделий, с его помощью можно проводить диагностику при инфекционных заболеваниях.

 

 

Список использованных источников:

 

1. https://iosadpiro.wordpress.com/

2. http://humbio.ru/

3. http://medlinks.ru/

4. http://molntekollds.ru/

5. Бондаренко В.М., Лиходед В.Г., Яковлев М.Ю. Определение эндотоксина грамотрицательных бактерий полиморфноядерными лейкоцитами крови человека, 1996. – С.195-201.

6. Яковлев М.Ю. Элементы эндотоксиновой теории физиологии и патологии человека.// Физиология человека, 2003. №4.–С. 154-165.

7. KetchumP.A., ParsannetJ.,StattsL.S. etal. UtilizationofachromogenicLimulusamebocytelysatebloodassayinamulticenterstudyofsepsis// J.Endotox. Res.,1994. No. 1.–P.253-263.

8. Ситников А.Г., Травина Л.А., Багирова В.Л. ЛАЛ-тест. Современные подходы к определению пирогенности. М., 1997. – С. 96.

9. Cohen J. The detection and interpretation of endotoxemia.Intens // CareMed, 2000. V.26 (Suppl. 1).– P.15-56.

10. Аниховская И.А., Опарина О.Н., Яковлева М.М. Кишечный эндотоксин как универсальный фактор адаптации и патогенеза общего адаптационного синдрома // Физиол.человека. 2006. №2. – С.57-62.

11. Е.В. Русанова, А.Г. Ниязматов, И.М. Протас. Роль эндотоксина в развитии гнойно-септических заболеваний и методы его выявлений его в крови. Альманахклиническоймедицины. № 29. 2013. – С. 70-73.

12. HurleyJ.C. Endotoxemia: methodsofdetectionandclinicalcorrelates // Clin. Microbiol. Rev. 1995. No.8. – P.268-292.

13. KetchumP.A., ParsonnetJ.,StottsL.S. etal. Utilization of a chromogenic Limulus amebocyte lysate blood assay in a multicenter study of sepsis // J. Endotox. Res. 1997.No.4. – P.9-16.

14. Shuster C. N., Barlow R. B., Brockmann H. J., The American horseshoe crab, Harvard University Press, 2003. – P. 427.

15. Botton M. L., Loveland R. E. Reproductive risk: high mortality associated with spawning by horseshoe crabs (Limulus polyphemus) in Delaware Bay, USA. Marine Biology, 1989.vol. 101, №2. – Р. 143-151.

16. Schuster C. N. Observations on the natural history of the American horseshoe crab, Limulus polyphemus. 3rd Report.Investigations of Methods of Improving the Shellfish Resources of Massachusetts, Woods Hole Oceanographic Institute Contribution, 1950.№. 564. – P. 18-23.

17. Рупперт Э. Э., Фокс Р. С., Барнс Р. Д. Зоология беспозвоночных. Т. 3: Членистоногие. — М.: «Академия», 2008. – C.289-303.

18. Зоология беспозвоночных, Т. 1: от простейших до моллюсков и артропод, под ред. В. Вестхайде и Р. Ригера. — М.: Т-во научных изданий КМК, 2008.–C. 564-602.

19. DehusO., HartungT., HermannC.J. EndotoxinevaluationofelevenlipopolysaccharidesbywholebloodassaydoesnotalwayscorrelatewithLimulusamebocytelysateassay // EndotoxinRes. 2006. V.12, No.3. –P.171-180.

20. http://www.ngpedia.ru/id617366p2.html

21. Малая медицинская энциклопедия. — М.: Медицинская энциклопедия. 1991—96 гг. 2. Первая медицинская помощь. — М.: Большая Российская Энциклопедия, 1994. – С.785.

22. Березовская И.В. Тест на безопасность // Фарматека. – 1994. - № 3. – С. 6.

23. Побережная З.Н., Каграманова К.А., Кивман Г.Я. К вопросу о причинах пирогенности лекарственных средств и их контроля по этому показателю Тез.докл. III съезда фармацевтов Украинской ССР. - Харьков. – 1997. – С. 209.

24. BangF.B. // Bull. John. Horkins Hosp. – 1956. – V. 98, No. 5. – P. 325-337.

25.Grandics, P. (2000): Pyrogens in Parenteral Pharmaceuticals, Pharmaceutical Technology, 2000. –Р. 26-32.

26. Hochstein H.D. // Pharmaceutical Technology. – 1987. – V. II, No. 6. – P. 158-163.

27. 2.6.14. Bacterial Endotoxins // European Pharmacopoeia, 4rd Ed. – 2002 – P. 145-147. 28. ДержавнаФармакопеяУкраїни / Державнепідприємство “Науково-експертнийфармакопейнийцентр”. – 1-евид. – Харків: РІРЕГ, 2001. – С. 127-138. 6.

29. Bacterial Endotoxins Test // The United States Pharmacopoeia (USP-24). – 2000. - P.1828-1831.

30. Cooper J. F. Validation of bacterial endotoxin test methods // LAL Times. - 1999. – V. 6, No. 2. – P. 1-5.

31. Cooper J. F. LAL interference screening of in-process materials and finished products // LAL Times. - 1998. – V. 5, No. 1. – P. 1-5.

32. Ситников А. Г., Травина Л.А., Кивман Г.Я. и др. ЛАЛтест: механизмы реакции, использование, перспективы развития // Лекарственные средства. Экономика, технология и перспективы развития: Обзор.информ. – М.: ВНИИСЭНТИ, 1989. – Вып. 3. – 44 с.

33. KakinumaA. // Biochem. Biophys.Res. Commun. – 1981. – V. 101, No. 2. – P. 434-439.

34. ElinR. J., WolffS. M. // J. Infect. Dis. – 1973. – V. 128, No. 3. – P. 349-352.

35. Novitsky T. “Dear LAL User…”// LAL Update. – 1990. - V. 8, No. 2, - P. 1

36. Novitsky T. Reactivity of Limulus Amebocyte Lysate (LAL) to glucans //LAL Update. - 1990. - V. 8, No. 2. - P. 2-3.

37. ДержавнаФармакопеяУкраїни / Державнепідприємство “Науково-експертнийфармакопейнийцентр”. – 1-евид. – Харків: РІРЕГ, 2001. – 556 с.

38. United States Pharmacopeia. The National Formulary, XXIV ed. - Rockville, 2000. – P. 285-312.

39. European Phamacopoeia, 4rd ed. - 2002.

40. ГосударственнаяФармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР. – 11-е изд., доп. – М.: Медицина, 1987. – 336 с.

Государственная Фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. – 11-е изд., доп. – М.: Медицина, 1989. – 400 с.

41. Варченко В., Кравчук С. Інфузійнірозчини: минуле та сучасне // Вісникфармакології та фармації. – 2002. - № 2. – С. 28-37.

42. Крылов Ю.Ф., Кивман Г.Я. Биологический контроль безопасности лекарственных средств. – М., 1985. - 143 с.

43. Ситников А.Г., Травина Л.А., Багирова В.Л. ЛАЛ-тест. Современные подходы к определению пирогенности. – М., 1997. –C. 95.

44. Чайка Л.О., Хованська Н.П., Гомон О.М., Меркулова Ю.В. Пірогени. Проект загальноїстаттіДержавноїФармакопеїУкраїни // Фармаком. – 2001. - № 2. – С. 18-25.

45. Долгова Г.В., Кивман Г.Я., Неугодова Н.П., Рыков А.С., Еникеева З.Н. Испытание на пирогенность (проект общей статьи для Фармакопеи ХII) // Фарматека. - 1999. № 3. - С. 30-34.

46. Долгова Г.В., Кивман Г.Я., Рыков А.С., Неугодова Н.П., Еникеева З.Н. Новый подход к оценке результатов испытаний лекарственных средств на пирогенность, проводимых по схеме Европейской Фармакопеи // Химико-фармацевтический журнал. – 1999. - № 2. - С. 4855.

47. Кивман Г.Я., Еникеева З.Н. Калинина Н.А. Испытание лекарственных средств на пирогенность. I. Препараты, дозы, способы введения // Хим.-фарм. журнал. – 1980. - № 6. – С. 102-106.

48. Еникеева З.Н., Кивман Г.Я. Испытание лекарственных средств на пирогенность. II. Целесообразность и границы унификации дозы препарата // Хим.-фарм. журнал. – 1981. – № 11. – С. 122-125.

49. Побережная З.Н., Каграманова К.А., Кивман Г.Я. К вопросу о причинах пирогенности лекарственных средств и их контроля по этому показателю / Тез.докл. III съезда фармацевтов Украинской ССР. – Харьков, 1997. – С. 209.

50. CooperT.F.Acceptanceofthelimulustestasanalternativepyrogentestforradiopharmaceuticalandintrathecaldrugs // Progr. Clin. Biol. Res., 1979. - V. 29. – P. 345-352.

51. Harrison S.J., Tsuji K., Enzinger R.M. Application of LAL for detection of endotoxin in antibiotic preparations // Progr. Clin.Biol. Res., 1979. - V. 29. –P. 353-365.

52. Березовская И.В. Тест на безопасность // Фарматека, 1994. - № 3. – С. 6.

53. Березовская И.В. Испытания на содержание веществ депрессорного действия // Фарматека,1994. - № 4. – С. 3-4.

54. Березовская И.В. Испытание на содержание гистамина // Фарматека,1994. - № 4. – С. 5.

55. Cooper, J. F., J. Levin, and H. N. Wagner..Quantitative comparison ofin vitro and in vivo methods for the detection ofendotoxin. J. Lab. Clin. Med., 1971.– P.138-148.

56. Elin, R. J., and S. M. Wolf. Nonspecificity of the limulus amebocyte lysate test: positive reactions with polynucleotides and proteins. J. Infect. Dis.,1973. – P. 349-352.

57. Food and Drug Administration..Limulus amebocyte lysate, additional standards. Code of Federal Regulations 21 CFR part 273. Fed.Regist.,

1973. – P.130-132.

58. Kraft, A. R., R. B. Jones, L. D. Homer, B. E. Morecki, and C. M. Herman. Detection of detoxified endotoxin by the Limulus lysate assay. Surg. Forum,1973. – P.68-70.

59. Rudbach, J. A., F. I. Akiya, R. J. Elin, H. D. Hochstein, M. K. Luoma, E. C. B. Milner, K. C. Milner, and K. R. Thomas. Preparation and properties of a national reference endotoxin. J. Clin. Microbiol.,1976. – P. 21-25.

60. Thye Yin, E., C. Galanos, S. Kinsky, R. A. Bradshaw, S. Weeler, 0. Leuderitz, and M. E. Sarmiento..Picogram-sensitivity assay for endotoxin: gelation of Limulus polyphenus blood cell lysate induced by purified lipopolysaccharides and lipid A from gram-negative bacteria. Biochim.Biophys.Acta.,1972. – P.284-289.

61. Swarbrick, J. Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, Volume 1,Third edition,, Informa Health care, 2007. – Р. 3052- 3053

62. United States Pharmacopeia XIX. United States Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md.,1975. –P. 356.

63. Van Noordwijk, J., and Y. deJong.. Comparison of the Limulus test for endotoxin with the rabbit test for pyrogens of the European Pharmacopeia.J. Biol. Stand.,1976. – P.131-139.

64. Lachman, L. and Lieberman, L.A.The Theory and Practice of industrial Pharmacy, Special Indian Edition, 2009.–Р. 641.

65. R.E. Wachtel, K. Tsuji.. Comparison of limulus amebocyte lysates and correlation with the United States Pharmacopeial pyrogen test, 1992.Р. – 385-393.

66. M. Daneshiana, A. Guenthera, A.Wendela, T. Hartunga, S. Aulocka.. In vitro pyrogen test for toxic or immunomodulatory drugs, Journal of Immunological Methods, 2006. – P. 37.

67. S. Solati, L. Aarden, S. Zeerleder, D. Wouters.An improved monocyte activation test using cryopreserved pooled human mononuclear cells. Journal Innate Immunity,2015. – P. 677-684.

68. Lourenço FR, BotelhoTde S, Pinto Tde J.. How pH, Temperature, and Time of Incubation Affect False-Positive Responses and Uncertainty of the LAL Gel-Clot Test. PDA Journal Pharmaceutical Science and Technology, 2012. – P. 70-72.

69. Ostronoff CS., Lourenço FR. Measurement Uncertainty of Chromogenic LAL Assays: Reaction Time and Proportion of Endotoxin and LAL Reagent Affect Release of p-Nitroaniline. Journal of AOAC International,2015. – Р. 98-102.

70. R. Blechova, D. Pivodova..LIMULUS AMOEBOCYTE LYSATE (LAL) test – an alternative method for detection of bacterial endotoxins. ACTA VET. BRNO 2001,Р. 291–296.

71. G. Glorieux, E. Schepers, R. Schindler, H.D. Lemke, F. Verbeke, A. Dhondt, N. Lameir, R. Vanholder. A novel bio-assay increases the detection yield of microbiological impurity of dialysis fluid, in comparison to the LAL-test. PublishedbyOxfordUniversityPress., 2008. P. 548-554.

 

СПИСОКСОКРАЩЕНИЙ

АНД – аналитический нормативный документ

ГФ – государственнаяфармакопея

КДО – 2-кето-3-дезоксиоктоноваякислота

ЛАЛ –limulusamebocytelysate

ЛПС – липополисахарид

МПД – минимальная пирогенная доза

ПКЭ – предельная концентрация эндотоксина

ЭДТА – этилендиаминтетрауксуснаякислота

GMP – goodmanufacturingpractice

USP – unitedstatespharmacopoeia