Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
По медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологииСтр 1 из 3Следующая ⇒
Им. С. И. Георгиевского Практические задания По медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии «Морфология и физиология микроорганизмов. Общая вирусология» (учебно-методическое пособие для студентов лечебного факультета) Ф.И.О. ________________________________________________________ Факультет ____________________________________________________ Курс __________________________________________________________ Группа ________________________________________________________ Симферополь – 2015 г. Дата __________________ Занятие №1
Тема: Организация микробиологической лаборатории. Правила работы. Выполнение требований биологической безопасности. Методы микробиологического исследования. Методы микроскопического исследования. Техника микроскопии. Методы окраски. Морфология микробов (бактерий и грибов).
Вопросы для обсуждения:
Практические задания: 1. Ознакомиться с организацией и правилами работы кафедры микробиологии как микробиологической лаборатории. 2. Изучить методы микроскопии и правила работы с иммерсионным объективом. 3. Записать методы микробиологического исследования: _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ 4. Микроскопировать окрашенный препарат Sarcina flava. Зарисовать.
5. Микроскопировать окрашенные препараты с бактериями различной формы: а) кокки (Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes);
б) палочковидные (Escherichia coli, Bacillus anthracis);
в) извитые (Treponema pallidum).
6. Микроскопировать окрашенные препараты дрожжеподобных грибов (Candida spp.) и плесневых грибов (Mucor spp.).
Подпись преподавателя _________________ Дата__________________ Занятие №2
Тема: Прокариоты и эукариоты. Классификация прокариот. Структура бактериальной клетки. Капсулы. Жгутики. Споры. Методы их выявления. Сложные методы окраски. Окраска по Граму.
Вопросы для обсуждения:
Практические задания:
1. Окрасить по Граму фиксированный препарат, приготовленный из смеси бактерий (Escherichia coli и Bacillus cerеus), микроскопировать.
2. Микроскопировать препарат Mycobacterium tuberculosis в мокроте больного, окрашенный по Цилю-Нильсену.
3. Выявить гранулы волютина в окрашенных по Нейссеру/Лёффлеру мазках из Corynebacterium diphtheriae, зарисовать.
4. Приготовить препарат-мазок из культуры Klebsiella pneumoniae, окрасить по Бурри-Гинсу, микроскопировать, зарисовать.
5. Микроскопировать препараты, приготовленные из спорообразующих бактерий (бациллы и клостридии), окрашенных по Пешкову/Ожешко, зарисовать.
6. Наблюдать подвижность микроорганизмов в препарате «раздавленная капля» из сенного настоя.
7. Определить тип строения клеточной стенки и отметить основные её структурные компоненты.
8. Написать обязательные и непостоянные элементы бактериальной клетки:
Обязательные элементы Непостоянные элементы __________________________ ___________________________ __________________________ ___________________________ __________________________ ___________________________ __________________________ ___________________________ __________________________ ___________________________ __________________________ ___________________________ Подпись преподавателя _________________ Дата__________________ Занятие №3
Тема: Физиология прокариот: питание бактерий. Культивирование бактерий. Питательные среды. Методы стерилизации и дезинфекции.
Вопросы для обсуждения:
Практические задания:
1. Изучить питательные среды и их компоненты: а) компоненты питательных сред: пептон, агар-агар, желатин, NaCl и другие; б) питательные среды: мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА), кровяной агар, сывороточный агар, среды Эндо и Плоскирева. 2. Заполнить таблицу: Таблица 1.
Классификация ферментов
3. Ознакомиться с применяемой в микробиологических исследованиях лабораторной посудой (чашки Петри, пипетки, шпатели, колбы, пробирки) и правилами подготовки ее к стерилизации. 4. Ознакомиться с работой парового (автоклава) и сухожарового стерилизаторов, бактериальных фильтров. 5. Ознакомиться с наиболее часто применяемыми дезинфектантами (хлорамин, хлорная известь) и антисептиками (70% этанол, 5% спиртовый раствор йода, растворы калия перманганата, хлоргексидина, мирамистина и другие).
6. Заполнить таблицу: Таблица 2.
Стерилизация - __________________________________________________ ________________________________________________________________ Дезинфекция - ___________________________________________________ ________________________________________________________________ Асептика - ______________________________________________________
________________________________________________________________ Антисептика - ___________________________________________________ ________________________________________________________________
Подпись преподавателя ________________ Дата__________________ Занятие №4
Тема: Дыхание, размножение и рост бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (1-й день исследования). Вопросы для обсуждения: 1. Дыхание бактерий, сущность процесса. 2. Типы дыхания бактерий. 3. Ферменты и структуры клетки, принимающие участие в процессе дыхания. 4. Рост и способы размножения бактерий. 5. Механизм деления бактериальной клетки. 6. Фазы размножения культуры бактерий в стационарных условиях. 7. Культивирование аэробных бактерий. Факторы, влияющие на рост и размножение бактерий. 8. Бактериологический метод исследования, его этапы.
Практические задания: 1. Заполнить таблицу:
2. Изучить технику посева исследуемого материала на плотные и в жидкие питательные среды. 3. Приготовить мазок из исследуемого материала (смесь бактерий), окрасить по Граму и микроскопировать. 4. Посеять исследуемый материал в чашку Петри с мясо-пептонным агаром. 5. Поставить посевы в термостат. 6. Оформить протокол исследования культуры аэробных бактерий (1-ый день). Протокол Занятие №5
Тема: Факторы влияющие на рост и размножение бактерий. Выделение чистой культуры аэробных бактерий (2 и 3-й дни исследования).
Вопросы для обсуждения: 1. Охарактеризивать вид, подвид, штамм, клон бактерий. 2. Культуральные свойства бактерий и способы их изучения. 3. Чистая и смешанная культура бактерий. 4. Оценка чистоты культур аэробных бактерий на 2 этапе бактериологического исследования. Практические задания: 1. Ознакомиться с характером роста бактерий разных видов на плотных и в жидких питательных средах. 2. Изучить культуральные свойства бактерий, входящих в состав бактериальной смеси, посеянной на предыдущем занятии на чашки Петри с МПА (см. протокол, занятие № 4). 3. Выделить изолированные колонии двух типов (№1 и № 2), приготовить из них мазки, окрасить по Граму, микроскопировать. 4. Пересеять колонии культур №1 и №2 на скошенный мясо-пептонный агар (МПА).
5. Исследовать характер роста культур №1 и №2 на скошенном МПА и определить чистоту культур. 6. Пересеять чистые культуры №1 и №2 со скошенного МПА на дифференциально-диагностические среды. 7. Оформить протокол исследования культур аэробных бактерий (2 и 3 дни).
Протокол Занятие №6 Тема: Ферменты бактерий. Идентификация чистых культур бактерий. Анаэробные бактерии. Выделение чистой культуры и идентификация анаэробных бактерий. Особенности культивирования и идентификации грибов.
Вопросы для обсуждения:
Практические задания: 1. Произвести учет ферментативных свойств культур №1 и №2. 2. Определить вид выделенных бактерий с помощью дифференциально-диагностических таблиц. 3. Закончить оформление протокола бактериологического исследования аэробных бактерий. Таблица 1. Дифференциально-диагностические свойства некоторых видов бактерий рода Bacillus
Таблица 2. Характеристика некоторых свойств Escherichia сoli
Протокол Занятие №7
Тема: Вирусы. Классификация. Морфология и строение вирионов. Взаимодействие вируса с клеткой.
Вопросы для обсуждения:
Практические задания: 1. Изучить классификацию вирусов, морфологию и строение вирионов с помощью таблиц. 2. Зарисовать структуру простого и сложного вириона.
Рис. 1. Схема строения простого Рис. 2. Схема строения сложного вириона. вириона.
3. Подписать типы симметрии капсидов:
5. Изучить стадии взаимодействия вируса с клеткой.
6. Заполнить таблицу:
Пример заполнения таблицы:
Подпись преподавателя ________________ Дата__________________ Занятие №8
Тема: Методы культивирования вирусов. Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе. Вирусы бактерий (фаги). Идентификация бактерий с помощью фагов.
Вопросы для обсуждения: 1. Вирусологический метод исследования, его этапы. 2. Методы культивирования вирусов. 3. Получение и приготовление первичных, перевиваемых и полуперевиваемых культур клеток. 4. Что представляют собой однослойные, суспензионные и органные культуры клеток? 5. Способы заражения куриного эмбриона. 6. Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе. 7. Культивирование вирусов в организме лабораторных животных (биологический метод исследования). 8. Ультраструктура и морфологические типы вирусов бактерий. 9. Взаимодействие вирулентного фага с бактериальной клеткой. 10. Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой и результат этого процесса. 11. Отличия лизогенных бактерий от нелизогенных. Фаговая конверсия. 12. Практическое использование вирусов бактерий. 13. Тесты на фагочувствительность и фаготипирование бактерий. Практические задания:
1. Ознакомиться с методами приготовления клеточных культур и назначением сред (199, Игла), солевых растворов (раствор Хенкса, раствор фосфатного буфера с антибиотиками), специальных реактивов (трипсин, версен). 2. Изучить методы заражения и вскрытия куриного эмбриона. Подписать способы заражения, применяемые для накопления различных вирусов. 3. Микроскопировать клеточную культуру Hela, зараженную энтеровирусами, с целью обнаружения цитопатического действия вирусов. 4. Выявить цитопатическое действие энтеровирусов по образованию бляшек в культуре клеток под бентонитовым покрытием. 5. Поставить реакцию гемагглютинации с аллантоисной жидкостью куриного эмбриона, зараженного вирусом гриппа, по схеме. 6. Учесть результат реакции гемагглютинации (РГА) и определить гемагглютинационный титр вируса. Данные внести в таблицу.
Таблица 1. Схема постановки реакции гемагглютинации для определения титра вируса
Условные обозначения: (+) - полная агглютинация эритроцитов, имеет вид зонтика (-) - компактный осадок эритроцитов, как в контроле, имеет вид «пуговки» 7. Зарисовать видимые проявления РГА: Лунки полистиролового планшета
Контроль Занятие №9
Контрольное занятие №1.
Тема: «Морфология, структура и культивирование микроорганизмов».
1. Принципы микроскопии. Основные методы микроскопирования. Методы окраски. Изучение морфологии и отдельных структур микроорганизмов. 2. Систематика микроорганизмов (прокариоты, грибы, простейшие, вирусы). Принципы классификации. Понятие о виде как основной таксономической единице. Таксономические категории. Номенклатура. Основные отличия прокариотов от эукариотов. 3. Строение и химический состав клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. Бактерии с дефектом синтеза клеточной стенки: протопласты, сферопласты, L – формы. 4. Капсулы. Жгутики. Пили. Химический состав и функциональное значение этих образований у бактерий. Методы выявления. Патогенные представители. 5. Споры и спорообразование. Химический состав и функциональное значение спор. Методы выявления. Патогенные представители. 6. Метаболизм бактерий. Ферменты бактерий и их роль в обмене веществ. Конститутивные и индуцибельные, экзо- и эндо- ферменты. Практическое использование биохимической активности бактерий. 7. Типы и механизмы питания бактерий. Транспорт питательных веществ в клетку. 8. Дыхание бактерий. Основные типы биологического окисления субстрата. Аэробы, анаэробы, факультативные анаэробы, микроаэрофилы. 9. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения популяции бактерий в стационарных условиях. Периодическое культивирование. Непрерывное культивирование, его значение в биотехнологии. 10. Основные принципы и методы культивирования бактерий. Факторы, влияющие на рост и размножение. Классификация питательных сред и требования, предъявляемые к ним. 11. Бактериологический метод исследования, его этапы. Выделение чистых культур аэробных бактерий. Изучаемые свойства. Ключевые признаки в идентификации вида. 12. Методы выделения чистых культур анаэробных бактерий. Изучаемые свойства. Ключевые признаки в идентификации вида. 13. Царство вирусов. Классификация. Морфология и строение вирионов. Химический состав, функции структурных элементов. Прионы. Вироиды. Работы Д.И. Ивановского. 14. Механизмы взаимодействия вирусов с соматической клеткой. Продуктивная и интегративная формы. Особенности репродукции РНК- и ДНК – содержащих вирусов. 15. Методы культивирования вирусов в культурах клеток, курином эмбрионе, в организме лабораторных животных. Классификация и характеристика клеточных культур. Среды № 199, Игла, их назначение. 16. Методы индикации вирусной репродукции в клеточных культурах и курином эмбрионе. Сущность реакций вирусной гемадсорбции и гемагглютинации, их применение. 17. Морфология и ультраструктура вирусов бактерий - бактериофагов. Стадии взаимодействия вирулентного и умеренного фага с бактериальной клеткой. Лизогения. Фаговая конверсия. Практическое применение фагов. 18. Патогенные грибы. Морфология, структура, культивирование.
Дата__________________ Занятие №10
Тема: Генетика микроорганизмов. Структура генетического аппарата у бактерий и вирусов. Модификации. Мутации. Генетические рекомбинации. Генетика вирусов. Особенности изменчивости у вирусов. Вопросы для обсуждения: 1. Организация генетического материала бактерий и вирусов. Генотип и фенотип. 2. Внехромосомные факторы наследственности бактерий: IS-последовательности, транспозоны, плазмиды, вирусы. 3. F – плазмида, её функция. Конъюгативные и неконъюгативные плазмиды. 4. R – плазмида, её значение. Методы выявления чувствительности бактерий к антибиотикам. 5. Плазмиды бактериоциногенности. Определение бактериоциновара и бактериоциногеновара. 6. Плазмиды, кодирующие признаки патогенности. 7. Сущность модификационной изменчивости. 8. Мутации. Молекулярный механизм мутаций. Репарации. 9. Генетические рекомбинации: трансформация, трансдукция, коньюгация. 10. Основы генетической инженерии и биотехнологии.
Практические задания: 1. Выявить изменчивость морфологических свойств бактерий под воздействием:
а) фенола (микроскопировать мазки из колоний Proteus vulgaris, образованных на обычном МПА и на 0,1% феноловом МПА, окрашенных фуксином Пфейффера).
Рис. 1. Proteus vulgaris в препарате Рис. 2. Proteus vulgaris в препарате из колонии на МПА из колонии на 0,1% феноловом МПА
б) пенициллина (микроскопировать мазки из колоний Bacillus аnthracis, образованных на МПА с пенициллином, окрашенных метиленовым синим - «жемчужное ожерелье»).
Рис. 3. B. anthracis в препарате Рис. 4. B. anthracis в препарате из из колоний на МПА колоний на МПА с пенициллином («жемчужное ожерелье»)
2. Изучить изменчивость культуральных свойств: S- и R- формы колоний эшерихий. 3. Определить фенотипические проявления R-плазмиды бактерий (множественная устойчивость к антибиотикам) методом стандартных дисков. 4. Ознакомиться с фенотипическими проявлениями Col-плазмиды с помощью методов колицинотипирования и колициногенотипирования.
Рис. 5. Метод колицинотипирования Рис. 6. Метод колициногенотипирования
5. Ознакомиться с фенотипическими проявлениями Hly-плазмиды (продукция гемолизина) у E. coli на кровяном агаре.
6. Выявить и изучить ауксотрофные мутанты эшерихий, полученные под воздействием ультрафиолетовых лучей:
а) сравнить результаты посева методом реплик облученной УФ-лучами культуры на полноценной (МПА) и минимальной средах;
б) установить потребности выделенных ауксотрофных мутантов в метаболите на селективной среде, содержащей аминокислоты.
Вывод: ______________________________________________________
7. Учесть результаты опыта конъюгации между E. coli F+, прототроф, Str s и E. coli F-, ауксотроф по метионину, Str r. Определить признак, приобретенный рекомбинантом, образующим колонии на минимальной плотной среде, содержащей стрептомицин 1000 мкг/мл.
Записать результаты опыта конъюгации. Донор E. coli F+, Str s х Реципиент E. coli F-, Met -, Str r
Селективная среда: минимальная плотная среда, содержащая стрептомицин 1000мкг/мл.
Выявлены колонии рекомбинантов на селективной среде в результате постановки опыта конъюгации.
Донор ____________________________________________________________ Реципиент ________________________________________________________ Рекомбинант ______________________________________________________ Вывод: ___________________________________________________________
Подпись преподавателя ________________ Дата__________________ Занятие №11
Тема: Генетические методы исследования в диагностике инфекционных болезней. Полимеразная цепная реакция. Гибридизация нуклеиновых кислот. Основы генной инженерии и биотехнологии. Вопросы для обсуждения:
Практические задания: 1. Изучить схемы постановки: а) метода молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот; б) полимеразной цепной реакции. 2. Учесть результаты ПЦР на агарозном геле после разделения продуктов амплификации ДНК микроорганизмов методом электрофореза и окрашивания этидием бромида. Выявить геномные фрагменты и сопоставить их с контрольным образцом. 3. Дорисовать схему постановки метода молекулярной гибридизации.
Рис. 1. Схема постановки метода молекулярной гибридизации.
4. Дорисовать схему постановки метода молекулярной ПЦР.
Ингредиенты для постановки ПЦР: праймеры, азотистые основания, термостабильная ДНК-полимераза.
Повторные циклы приводят к накоплению последовательности ДНК, ограниченной праймерами. Детекция двуцепочечных ДНК.
Рис. 2. Схема постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР)
Подпись преподавателя ________________ Дата__________________ Занятие №12
Тема: Антимикробные препараты. Антибиотики. Врожденная и приобретенная резистентность бактерий к антибиотикам.Определение чувствительности бактерий к антибиотикам. Антимикотики. Антивирусные препараты. Вопросы для обсуждения: 1. Определение понятия «антибиотики». 2. Избирательная активность антибактериальных препаратов. 3. Классификация антибиотиков (происхождение, химический состав, спектр действия, механизм действия). 4. Основные группы антибиотиков и механизмы их противомикробного действия. 5. Механизмы устойчивости микроорганизмов к антибиотикам. 6. Генетические основы резистентности микроорганизмов к антибиотикам. 7. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (метод дисков, метод серийных разведений, геноиндикация – ПЦР). 8. Применение автоматизированных анализаторов для определения чувствительности бактерий к антибиотикам. 9. Измерение эффективности действия антибиотиков: минимальная ингибирующая (подавляющая) концентрация (МИК, МПК). Минимальная бактерицидная концентрация (МБК). 10. Пути преодоления устойчивости микроорганизмов к антибиотикам. 11. Лечебные химиотерапевтические противогрибковые препараты. 12. Противовирусные химиотерапевтические препараты (общие понятия). 13. Классификация противовирусных химиопрепаратов в зависимости от механизма действия, мишени для действия препаратов: § ингибиторы депротеинизации (ремантадин); § ингибиторы синтеза нуклеиновых кислот (рибавирин); § ингибиторы обратной транскриптазы ретровирусов (азидотимидин, зидовудин); § ингибиторы вирусных протеаз (саквинавир).
Практические задания: 1. Определить чувствительность S. aureus к антибиотикам методом стандартных дисков и оценить полученные результаты. __________________________________ __________________________________ __________________________________ __________________________________ __________________________________
Таблица 1.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-07-11; просмотров: 345; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.238.5.144 (0.284 с.) |