Тема: взятие спермы от быка, ее макро - и микроскопическая оценка

Сперму получают в специальном станке, сзади которого площадка 3x3м, покрытая битумом №4 (или аналогичными материалами) или толстым резиновым ковром, чтобы ноги быка при садке не скользили. В станке фиксируют любое здоровое животное, соответствующее быку по росту. Можно использовать чучело. Вагину берут в правую руку, обязательно краником к себе, большой палец впереди краника. До садки нужно находиться несколько в стороне, внимательно наблюдая за быком. Как только бык начинает садку, подойти к нему справа. Правая рука с вагиной располагается около маклока примерно под углом 30^о. Левой рукой быстро взять за препуций, отвести пенис немного в сторону и направить его в отверстие искусственной вагины, не надевая ее на пенис. Как только головка пениса введена в искусственную вагину, бык делает характерное движения вперед (эякуляторный толчок), происходит эякуляция (3-4 сек). После толчка искусственную вагину с пениса не снимать, а опускать вместе с быком, пока он не встанет на четыре конечности. Это позволяет собрать всю сперму. Отняв искусственную вагину, взять ее левой рукой, спермоприемником вниз, открыть краник, выпустить воздух, закрыть краник, дать стечь в спермоприемник всей сперме. Взять вагину подмышку левой руки, удерживать спермоприемник указательным и средним пальцами левой руки, а правой отвести держатель спермоприемника в сторону. Осторожно, без рывка, отделить спермоприемник, накрыть крышкой, передать в лабораторию.

Мытье искусственной вагины.

Вынуть краник из патрубка. Слить воду из вагины. В эмалированный таз наливается горячий (70-80⁰С) раствор соды 2-3%-ной (двууглекислой соды) или 1-1,5% кальцинированной. Моется искусственная вагина с помощью ерша или стерильной поролоновой протиркой до полного удаления вазелина. Затем вагина ополаскивается чистой водой (для удаления остатков соды) и насухо вытирается чистой тряпкой или полотенцем (протаскивать с помощью корнцанга). Кладется на хранение в шкаф до следующего получения спермы. Так же моют вагину после надевания новой камеры на цилиндр.

Подготовка искусственной вагины с балонообразным расширением

такая же, что и образца 1942 г., за исключением того, что в нее не нагнетается воздух, а наливают 1200-1500 мл воды при температуре 50-55. Патрубок закрывается завинчивающейся пробкой. Необходимое давление в ней создается столбом воды при наклонном положении вагины во время получения спермы (35-45°).

Подготовка укороченной искусственной вагины для быка.

Искусственная вагина стерилизуется в автоклаве при температуре 105⁰, 0,3-0,5 атмосферы в течение 15-20 мин или кипятится 30 мин. Предварительно на оба конца надевают колпаки из хлопчатобумажной ткани в виде кисета или закрывают концы пергаментной бумагой, закрепленной резиновыми кольцами, отрезанными от запасной камеры. Из автоклава или стерилизатора вынимают горячие искусственные вагины с помощью специальных пинцетов, кладут на подставку, охлаждают, наливают 300 мл воды при температуре 60-65⁰С, вставляют краник. Снимают один из бумажных (полотняных) колпаков, смазывают стерильным вазелином, нагнетают воздух, снимают бумажный колпак с другого конца, присоединяют одноразовый спермоприемник (стерилизованный ультрафиолетовым излучением), укрепляют его кольцом от камеры, свернутым вдвое, измеряют температуру в вагине. После получения спермы выпускают воздух из вагины, герметизируют взятый эякулят путем термической сварки конца спермоприемника с помощью прибора (например - «Молния -1»). Выше шва отрезают конец спермоприемника с эякулятом и передают в лабораторию.

Подготовка искусственной вагины и получение спермы у барана.

Порядок подготовки точно такой же, как и искусственной вагины для быка. Воды заливают 150-180 мл при температуре 50-55⁰С. Следует учитывать температуру воздуха при получении спермы. Если применяется одностенный спермоприемник, эта температура должна быть не ниже +18°, иначе возникает температурный шок спермы. Технология получения спермы та же, что и у быка, только приходится приседать на корточки с правой стороны от животного, зафиксированного в станке, и придерживать спермоприемник указательным пальцем (двустенный) или удержать его между указательным и средним (одностенный).

Подготовка резиновой искусственной вагины для хряка.

Осуществляется по тем же правилам, что и искусственная вагина для быка. Только воды наливается 300-400 мл при температуре 50-55⁰С. Спермоприемник (банка) обеззараживается сухим жаром, а резиновая муфта для фиксации - спиртом.

Подготовленная искусственная вагина вставляется в чучело, на которое затем осуществляется садка хряка.

Подготовка электровагины для хряка.

Отличается тем, что кроме спирта, можно стерилизовать текучим паром и наливать воды 1200 мл при температуре 45⁰С. Резиновая камера смазывается вазелином. Пластмассовый спермоприемник обеззараживается вливанием в него 25-30 мл 96%-ного спирта и ополаскивается 1-2 мин. Затем спермоприемник 5-6 раз промывается 1%-ным раствором хлорида натрия. Муфта переходная, обеззараживается спиртом. В чучело вкладывают собранную электровагину, соединяют с водяным манометром, с помощью которого регулируется давление в ней и подключают к электросети на 2-3 минуты, чтобы нагреть воду до нужной температуры. Создав давление (40-50 мл водяного столба) и измерив температуру, подпускают к чучелу хряка. Во время осадки осторожно, через препуций направляют пенис в искусственную вагину. Во время выделения основной массы спермы хвост хряка закручиваются к верху и остается почти неподвижным, по окончании эякуляции спермоприемник передают в лабораторию.

 

ПОДГОТОВКА ИСКУССТВЕННОЙ ВАГИНЫ И ПОЛУЧЕНИЕ СПЕРМЫ ОТ ЖЕРЕБЦА

Правила подготовки те же, за исключением нагнетания воздуха. Давление в искусственной вагине создается за счет столба воды (1500-2000 мл) при наклонном ее положении в момент получения спермы.

Садку жеребца допускают на кобылу в охоте. На кобылу надевают случную шлейку и бинтуют хвост от репицы до половины. Жеребца подводят за повод. В момент садки подготовленную вагину, держа за ручку правой рукой, прижимают к крупу кобылы по направлению пениса, а пенис левой рукой направляют в искусственную вагину (не брать за головку). После введения пениса искусственную вагину под углом 30-35⁰C обеими руками прижимают к крупу кобылы, причем правой рукой приходится сильно упираться в спермоприемник.

Во время совокупительного рефлекса выпустить из вагины часть лишнего воздуха, повернув на пол-оборота гайку патрубка. После выхода воздуха гайку опять плотно завинтить. Если воздух не выпустить, камера может сорваться или лопнуть. Эякуляция длится 1-2 мин. о чем судят по дрожанию хвоста. В конце эякуляции, когда жеребец начинает медленно «сползать», наклонять постепенно искусственную вагину спермоприемником вниз и осторожно снять, когда жеребец встанет на все четыре ноги, отделить спермоприемник и передать в лабораторию, где сперму нужно тут же профильтровать.

 

ОРГАНОЛЕПТИЧЕСКАЯ И МИКРОСКОПИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА СПЕРМЫ

 

Свежеполученная сперма, особенно баранов, при быстром охлаждении подвержена температурному шоку уже при + 17⁰С, поэтому работать с этой спермой надо при оптимальной температуре + 25⁰С. Каждый взятый эякулят у производителей подвергается оценке.

Первым этапом определения качества спермы является визуальная оценка ее по объему, цвету, запаху, консистенции. Объем спермы быка и барана измеряют с помощью смесителя, градуированного спермоприемника, а жеребца и хряка - мензуркой. Нормальный цвет спермы быка и барана - белый или желтоватым оттенком. Жеребца и хряка - белый или с сероватым оттенком. Не допускается к осеменению эякулят при присутствии в нем белых хлопьев, что говорит о воспалении придаточных половых желез, чаще пузырьковидных; розово-красного цвета - попадание свежей крови, бурого - наличие застарелой травмы, примесь свернувшейся крови; зеленого цвета - примесь мочи, гноя, кала, темного цвета - попадание грязи.

Нормальная сперма запаха не имеет или имеет запах жиропота. Не допускается к осеменению эякулят с запахом мочи, кала или гнилостным.

Консистенция спермы быка - сливкообразная, барана - сметанообразная, хряка и жеребца - молокообразная.

Второй этап - глазомерная оценка качества спермы осуществляется под микроскопом при увеличении 120-300 раз и температуре 38-40⁰С, что достигается помещением на предметный столик микроскопа обогревательного столика. На чистое предметное стекло стерильной стеклянной палочкой, предварительно нагретой трением о стерильную марлевую салфетку (во избежание температурного шока спермиев в спермоприемнике), наносят каплю спермы и покрывают чистым покровным стеклом. Капля должна быть такой величины, чтобы пространство между предметным и покровным стеклом было заполнено спермой, но не столь большой, когда покровное стекло по ней плавает. Подготовленную разбавленную каплю помещают на обогревательный столик, стоящий на микроскопе, и рассматривают при неярком освещении (полуприкрыта диафрагма и опущен конденсатор). Раздавленная капля дает возможность определить густоту и активность спермы.

Неразбавленная сперма по густоте в зависимости от концентрации спермиев в 1 мл может иметь следующие оценки: густая (Г), средняя (С) и редкая (Р).

Сперма быков и баранов. Сперма густая - все поле зрения заполнено спермиями и между ними почти нет промежутков. У быков в густой сперме содержится свыше 1 млрд, у баранов свыше 2 млрд спермиев в 1 мл.

Сперма редкая - в поле зрения микроскопа спермии размещаются с большими незаполненными промежутками, содержится у быков не менее 0,5 млрд, у баранов не менее 1 млрд спермиев в 1 мл.

Сперма хряков и жеребцов в сравнении со спермой быков и баранов под микроскопом всегда выглядит как редкая, поэтому ее густота может быть оценена только путем подсчета в счетной камере.

Сперма хряков считается густой при наличии 210 млн и больше спермиев в 1 мл профильтрованной спермы, средней - от 110 до 210 млн и редкой - менее 110 млн в 1 мл спермы.

Сперма жеребцов считается густой при наличии свыше 250 млн спермиев в 1 мл спермы, средней - от 100 до 250 млн, и редкой - меньше 100 млн в 1 мл.

Различают несколько видов движения спермиев.

Поступательное - спермии движутся только по прямой линии вперед.

Колебательное - спермии не перемещаются, а только изгибаются на одном месте.

Манежное движение происходит по кругу небольшого диаметра, а не по прямой.

Неподвижные спермии (условно «некроспермия»).

Каждый эякулят имеет в той или иной степени все три формы движения. Оценке подвергаются спермии только с поступательным движением. Активность (подвижность) спермиев оценивают по десятибалльной шкале. Высшую оценку 10 баллов получает сперма, в которой практически все (100%) спермии имеют прямолинейно-поступательное движение. При оценке 9 баллов - примерно 9 спермиев из каждых десяти (т.е. 90%), при оценке 8 баллов - 8 спермиев из десяти (80%), при оценке 7 баллов (70%) из десяти и т.д. до 1 (10%) балла, когда только один спермий из десяти движется прямолинейно-поступательно.

Визуальная и глазомерная оценка обозначается двумя знаками: например Г-10, С-8, Г-7 и т.д. Если спермий в эякуляте совершенно отсутствуют, то такую сперму обозначают буквой «А» - аспермия. Если один спермий с прямолинейно- поступательным движением приходится на несколько десятков неактивных (мертвых, с манежным и колебательным движениями) активность обозначают буквой «Е» (единичные). Когда наблюдаются колебательные движения, такую сперму обозначают буквой «К» (колебательные). Неподвижную сперму обозначают буквой «Н» - (некроспермия). Все эякуляты с буквенной оценкой безусловно бракуются.

В зависимости от вида допускаются к осеменению сперма со следующими показателями не ниже: бык Г, С - 8, баран Г - 8, хряк - Г, С - 7. Жеребец Г, С - 6. «Средняя» сперма баранов, редкая сперма быков, баранов, хряков и жеребцов к осеменению не допускается.

 

ТЕМА: ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ СПЕРМИЕВ (ПОДСЧЕТ СПЕРМИЕВ). ВЛИЯНИЕ НА СПЕРМУ ВНЕШНИХ ФАКТОРОВ

Подсчет спермиев производится в счетных камерах, применяемых для подсчета форменных элементов крови (камерах Горяева, Тома-Цейса, Бюркера, и Ключарева-Предтеченского).

Эритроцитарный меланжер (смеситель) употребляют для спермы быков и баранов, а лейкоцитарный - для спермы жеребца, хряка, собаки и кролика.

Меланжер промывают сначала чистой водой, потом 96%-ным спиртом и наконец, эфиром. Остатки эфира удаляются продуванием воздуха через меланжер.

В чистый, сухой эритроцитарный меланжер набирают сперму быка до метки 1,0, а барана - до 0,5, затем дистиллированную воду до метки 101; в лейкоцитарный меланжер сперму жеребца, хряка, кобеля, кролика набирают до метки 0,5, а дистиллированную воду - до метки 11. Зажимают пальцами оба конца меланжера и встряхивают его 1 -2 мин.

Первые три капли выбрасывают, а затем помещают каплю на счетную камеру, с покровным стеклом предварительно притертым до появления радужных колец.

На камере Горяева средняя пластинка разделена поперечным желобком на две половины, на каждой из которых нанесено по сетке. Вся сетка имеет площадь равную 9 мм и состоит из 15 горизонтальных и вертикальных полос, пересечением которых образовано 225 крупных квадратов. Ширина полосы, т.е. стороны большого квадрата, равна 1/5мм (3 мм - длина стороны сетки, разделенная на 15, т.е. 3/15=1/5 мм). Каждая третья вертикальная и горизонтальная полосы разделены на 4 узких полоски шириной 1/20 мм (1/5:4=1/20). При пересечении этих полос большие квадраты разделяются на 16 маленьких. Площадь одного маленького квадратика равна 1/400 мм (1/20x1/20). Глубина камеры равна 0,1 мм. Таким образом, объем одного маленького квадратика составляет 1/4000mm (1/400 мм х 1/10 мм). Во всей сетке имеется 25 разделенных больших квадратов, в каждом из которых имеется 16 маленьких. Всего маленьких, таким образом, 400 квадратов.

Подсчет ведут при малом увеличении, чтобы в поле зрения помещался один большой квадрат. Подсчитывают спермин в 5-ти больших квадратах по диагонали или же в 4-х по углам и в одном - где-нибудь в середине. В каждом большом квадрате спермин пересчитываются последовательно в 16 малых, причем лежащие на линии спермин считают в том случае, если головки их лежат на верхней или левой черте квадрата.

Таким образом, подсчитывают спермин в 80 малых квадратах (16x5). Вначале узнают, сколько спермиев приходится на один малый квадрат, для чего полученное число спермиев делят на 80. Так как объем одного малого квадрата в 4000 раз меньше 1 мм, то для определения спермиев в 1мм, полученное число умножают на 4000 и на степень разбавления спермы в меланжере.

Таким образом, используется следующая формула для определения

концентрации:

 

где с - концентрация спермиев в 1мм³; Н - число подсчитанных спермиев; Д - степень разбавления спермы в меланжере (для быка 100 раз, барана - 200, жеребца, хряка - 20 раз); п - число мелких квадратов (обычно 80); 4000 число перевода в 1 мм. Для определения количества спермиев в 1 мл полученное число С надо умножить на 1000 (ибо 1 мл = 1000 мм).