Наблюдения за актиномицетами

Псевдоколонии актиномицетов вокруг почвенной частицы отличаются от обычного роста их на питательных средах меньшими размерами, слаборазвитым субстратным мицелием, меньшим числом спороносцев. Спороносцы располагаются в виде клубка или дерновины либо на самой почвенной частичке, либо на некотором расстоянии от нее в виде кольца или нескольких колец.

Метод трудоемок и требует навыка.

 

Работа 26. Изучение микрофлоры почвы методом упрощенных педоскопов

По методу Н. Т. Холодного в исследуемую почву закапывают стерильные предметные стекла и оставляют их там на несколько недель. Поверхность стекла покрывается тонким слоем почвенного раствора, и на ней поселяются микроорганизмы, формирующие микропейзажи, характерные для данной почвы. Однако при выкапывании стекол из почвы и дальнейшей их обработке микропейзажи могут легко повреждаться. Б. В. Перфильев (1959), рассматривая подводные группы и почвы как проточные капиллярные системы, предложил для изучения ми

Рис. 18. Капилярный педоскоп упрощенной конструкции: / — вертикальное направление ячеек; 2 ~» горизонтальное направление ячеек.

крофлоры специальное устройство — педоскоп. Педоскоп представляет собой набор капиллярных ячеек, закрепленных в пазах держателя. Изготовление педоскопов требует специальных навыков стеклотехники. Упрощенная конструкция педоскопа предложена Е. А. Мятликовой (1976) (рис. 18). На предметное стекло клеем БФ-6 наклеивают 2—3 покровных стекла, по краю которых прокладывают узкие полоски кальки, что обеспечивает необходимую глубину капилляра педоскопа (30—40мкм). Методика капиллярного педоскопа позволяет изучать активную микрофлору почвы в ее естественной обстановке в отличие от потенциальной микрофлоры, выделяющейся при высеве почвенной взвеси на питательные среды. Микробные пейзажи выявляют природные формы роста микроорганизмов, взаимоотношение между членами микробосообщества, сезонные изменения микрофлоры, а также новые и редкие формы микроорганизмов.

Материалы и оборудование.

Стерильные предметные и покровные стекла, клей БФ-6, калька, вата, спиртовка, пинцет, садовый нож, карболовый эритрозин, 96%-ный этанол.

Ход работы

Соблюдая стерильность, клеем БФ-6 склеивают упрощенные капиллярные педоскопы вертикальным или горизонтальным направлением ячеек. На предметное стекло приклеивают тонкие полоски кальки на расстоянии, равном размеру ширины покровных стекол. Полоски кальки осторожно смазывают клеем и накладывают на них стерильные покровные стекла (рис. 18). Клей не должен выходить за пределы полоски кальки, внутрь ячейки, под покровное стекло. Готовые педоскопы закапывают в почву или вегетационные сосуды. Садовым ножом, предварительно простерилизованным, делают разрез в почве и в него вводят педоскоп так, чтобы капилляры располагались вертикально, т. е. в направлении движения почвенного раствора. Время экспозиции педоскопов в почве 1,0—2,5 мес. По окончании срока экспозиции педоскопы вынимают из почвы, наружную поверхность осторожно вытирают ватой и немедленно во избежание подсыхания микроскопируют пейзажи на изучение подвижных форм. Для более детального изучения микробных пейзажей педоскопы помещают в чашки Петри и фиксируют их парами 2%-ной осмиевой кислоты 2—4 мин либо парами 40%-ного формалина несколько секунд. Зафиксированные педоскопы окрашивают, погружая стекла в стаканы с 5%-ным карболовым эритрозином на 12—24 ч, промывают водой, подсушивают, микроскопируют.

Задача исследования заключается в детальном описании микробного пейзажа, сформировавшегося в капиллярах педоскопа. При микроскопировании отмечают характер микрофлоры, плотность обрастания, доминирующие формы, отношения, сложившиеся между членами микробного ценоза.