Форменные элементы крови. Свертывание крови.

Функциональные системы

 

Учебно-исследовательская цель занятия:

1. Изучить строение и функции эритроцитов и лейкоцитов.

2. Изучить физиологию свертывающей и антисвертывающей систем.

3. Сформировать представление о возможности клинической оценки гемостаза.

4. Познакомиться с методами определения количества эритроцитов, лейкоцитов в крови, СОЭ.

5. Научиться давать заключение о состоянии системы крови по клиническому анализу.

Вопросы для самоподготовки

1. Эритроциты, их строение, количество, физиологическое значение.

2. Цветной показатель крови и его клиническое значение.

3. Скорость оседания эритроцитов, факторы на нее влияющие. Клиническое значение СОЭ.

4. Лейкоциты, количество их в крови. Виды лейкоцитов.

5. Функции различных видов лейкоцитов.

6. Лейкоцитарная формула. Особенности лейкоцитарной формулы у детей.

7. Понятие об иммунитете.

8. Неспецифические механизмы защиты организма (клеточные, гуморальные).

9. Специфические механизмы защиты (Т- и В- лимфоцитарные звенья иммунитета).

10. Регуляция эритропоэза, лейкопоэза.

11. Физиологическое понятие гемостаза.

12. Сущность и значение свертывания крови.

13. Основные функциональные звенья и структурные элементы системы гемостаза.

14. Строение, количество и функции тромбоцитов. Основные тромбоцитарные факторы.

15. Этапы тромбоцитарно-сосудистого гемостаза.

16. Коагуляционный гемостаз и его стадии.

17. Фибринолиз и его физиологическое значение. Виды фибринолиза.

18. Физиологическое значение противосвертывающей системы. Первичные и вторичные антикоагулянты.

19. Регуляция свертывания крови.

 

ДЕМОНСТРАЦИИ

Учебные видеофильмы: «Форменные элементы крови», «Клетки крови», «Скорость свертывания крови», «Скорость оседания эритроцитов», «Механизм свертывания крови», «Иммунитет», «Гемостаз».

Плакаты: Камера подсчета форменных элементов крови. Гематологические показатели у здоровых людей. Регуляция эритропоэза. Лейкоцитарная формула у детей. Схема свертывания крови. Схема тромбоцитарно-сосудистого гемостаза. Схема фибринолиза. Антикоагулянты. Регуляция эритропоэза.

Электронные учебники: Физиология крови (клетки крови, гемостаз). Эритроциты. Эритропоэз. Моноцитопоэз. Тромбоцитоз.

 

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

 

РАБОТА № 1

Знакомство с принципами подсчета форменных элементов крови

Необходимо: испытуемый, микроскоп с окуляром «15» и объективом «8», счетная камера, покровное стекло, смесители для эритроцитов и лейкоцитов, спирт, эфир, йод, вата, дистиллированная вода, реактив Тюрка, 3% раствор поваренной соли, маленькие тигельки для растворов, резиновая груша.

Учебно-исследовательская цель работы: ознакомиться с устройством счетной камеры с сеткой Горяева. Подсчитать количество лейкоцитов и эритроцитов и исследуемой крови.

Ход работы

Основной принцип подсчета форменных элементов крови заключается в следующем:

1. Надо точно отмерить небольшое количество крови.

2. Равномерно развести ее определенным количеством жидкости.

3. Поместить в камеру. Произвести подсчет.

Счетная камера – предметное стекло, на котором имеются 3 поперечные плоские площадки (их называют пластинками), отделенные друг от друга желобками (рис. 23, 1 и 2). Средняя площадка продольным желобком разделена на две, каждая из них имеет выгравированную сетку. Средняя пластинка ниже крайних на 0,1 мм. После притирания покровного стекла к крайним пластинкам высота между покровным стеклом и средней пластинкой – 0,1 мм.

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15 рядов по 15 квадратов в каждом), из которых 25 разделены на 16 малых квадратов (рис. 23, 3). Сторона малого квадрата – 0,05´0,05 мм, объем пространства камеры под малым квадратом – 1/4000 мм³ (0,00025 мм³ или 0,25 мкл).

Разведение крови производят с помощью смесителя (меланжера), который состоит из градуированной капиллярной трубочки с яйцевидным расширением (ампулой) (рис. 23, 4). В ампулу помещена стеклянная бусинка для лучшего размешивания крови. Имеются смесители для подсчета красных и белых кровяных телец. В смесителях для эритроцитов бусинка внутри ампулы окрашена в красный цвет, а для лейкоцитов – в белый. На капилляре смесителей имеются метки 0,5 и 1,0; они обозначают половину или целый объем капилляра. Выше яйцевидного расширения метка 101 в смесителе для эритроцитов означает, что полость расширения (ампулы) имеет объем в 100 раз больший, чем объем полости капилляра. На смесителе для лейкоцитов имеется метка 11, свидетельствующая о том, что полость ампулы в 10 раз больше полного объема капилляра. Когда в смеситель для эритроцитов набирают кровь до метки 0,5, а затем разбавляют ее до метки 101, кровь будет разведена в 200 раз. Когда в смеситель для лейкоцитов набирают кровь до метки 0,5, а затем разбавляют ее до метки 11, кровь будет разведена в 20 раз.

Рис. 23. Счетная камера Горяева: 1 – вид сверху; 2 – вид сбоку;

3 – сетка Горяева; 4 – смеситель

Подсчет лейкоцитов:

1. В тигелек наливают раствор Тюрка (раствор метиленовой сини в 3%-ной уксусной кислоте).

2. Притирают покровное стекло к счетной камере. Для этого берут счетную камеру в руки, придавливают покровное стекло большими пальцами к боковым пластинкам и легко смещают его вверх и вниз. Доказательством плотности прилегания покровного стекла служит появление так называемых колец Ньютона (радужного рисунка). Притирание необходимо для равномерного расположения покровного стекла по отношению к камере Горяева.

3. После соответствующей обработки кожи берут из пальца кровь в смеситель для лейкоцитов до отметки 0,5 (в силу капиллярности кровь из капли легко заходит в смеситель, и дополнительных усилий прилагать не следует), обтирают ваткой кончик капилляра, опускают его в чашку с реактивом Тюрка и набирают с помощью резиновой груши этот раствор до отметки 11.

Примечание: при смешивании крови с жидкостью не допускать образования пузырьков воздуха, так как этим нарушается правильность разведения. Как только раствор достигнет метки 11, смеситель переводят в горизонтальное положение, снимают резиновую трубку и помещают его между большим и средним пальцами, встряхивают 2–3 минуты для перемешивания содержимого. Раствор Тюрка необходим для гемолиза и окрашивания лейкоцитов.

4. Первые 2–3 капли смесителя удаляют (поскольку в капиллярной части смесителя находится неперемешанный раствор), выступающую новую каплю подводят к щели камеры (под покровное стекло средней пластинки), жидкость из смесителя стекает, и камера легко заполняется.

5. При слабом увеличении подсчитывают количество лейкоцитов в 100 больших квадратах (в 25 учетверенных квадратах без горизонтальной и вертикальной исчерченности). Считают лейкоциты, лежащие внутри квадрата и на двух пограничных сторонах – левой и верхней. Вычисление содержания лейкоцитов производится по формуле:

,

где Х – количество лейкоцитов в 1 мм³ исследуемой крови; А – количество лейкоцитов во всех подсчитанных больших квадратах; 1600 – количество малых квадратов в 100 больших; В – степень разведения крови; 4000 – во столько раз 1 мм³ больше, чем объем маленького квадрата.

Нормальное содержание лейкоцитов в крови: у детей до 3-х лет – 6–11 тысяч на 1 мкл, у детей 3–10 лет – 6–11 тысяч на 1 мкл, у взрослого человека 4–9 тысяч на 1 мкл.

 

Подсчет эритроцитов:

1. Наливают в тигелек 3% раствор поваренной соли.

2. Притирают покровное стекло к камере.

3. Забирают кровь в смеситель для эритроцитов до метки 0,5.

4. Кровь разводят гипертоническим раствором (3% раствор поваренной соли) до метки 101. В гипертоническом растворе эритроциты сморщиваются и становятся отчетливо видны в микроскоп.

5. Перемешивают кровь с растворителем в течение 2–3 минут.

6. Вносят разведенную кровь в счетную камеру. Для этого первую и вторую капли из смесителя удаляют на ватку, а третью помещают на центральную площадку камеры.

7. Подсчитывают эритроциты в малых квадратах, находящихся в 5 больших, причем берут те большие квадраты, которые лежат по диагонали сетки. Предварительно в тетради чертят 5 больших квадратов с 16 малыми в каждом. В последующем в них записывают подсчитанные эритроциты.

Правила подсчета эритроцитов:

В каждом большом квадрате эритроциты считают по рядам «малых квадратов». В первом ряду счет ведется слева-направо, во втором справа-налево (правило «змейки»). Чтобы дважды не подсчитывать одни и те же клетки, лежащие на границе «малых квадратов», считают все эритроциты внутри квадрата и на пограничных линиях, но последние – только если они больше половины заходят внутрь данного квадрата, клетки же, пересеченные пограничной чертой ровно пополам, считают на верхней и левой границах квадрата (правило Егорова).

8. Суммируя общее количество эритроцитов в 5 больших квадратах, вычисляют содержимое эритроцитов в 1 мм³ исследуемой крови, пользуясь формулой:

,

где Х – количество эритроцитов в 1 мм³ исследуемой крови; А – сумма эритроцитов в 5 больших квадратах; 80 – количество подсчитанных малых квадратов; 4000 – во столько раз 1 мм³ больше, чем объем малого квадрата; В – разведение крови.

9. В отчете зарисовывают счетную камеру, сетку Горяева и смеситель для эритроцитов и лейкоцитов. Необходимо отразить ход работы по определению числа лейкоцитов и эритроцитов. В выводах оценивают полученные результаты, сравнивая их с содержанием эритроцитов и лейкоцитов в норме. При получении отклонений объяснить, какие причины могли бы лежать в основе этих сдвигов.

Нормальное содержание эритроцитов в крови: у детей до 2-х месячного возраста – 3,9–5,5 миллионов на мкл, у детей в 2-х месячном возрасте – 2,7–4,9 миллионов на мкл, у детей от 6 до 12 лет – 4,0–5,2 миллионов на мкл, у мужчин – 4,0–5,5 миллионов на мкл, у женщин – 3,7–4,7 миллионов на мкл.

РАБОТА № 2