Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Качественные реакции на витамин A
Материалы, посуда, реактивы: 33% раствор треххлористой сурьмы в хлороформе (хранят в склянке из темного стекла, пригоден к употреблению через 6-8 часов после приготовления; срок годности – две недели); концентрированная серная кислота; ледяная уксусная кислота, насыщенная сульфатом железа (II); уксусный ангидрид; рыбий жир, медицинский; употребляют только свежий препарат, т.к. старый или прокипяченный рыбий жир практически лишены витамина А;или масляный раствор витамина А; серная кислота, концентрированная (r 20= 1,836); хлороформ; пипетки; сухие пробирки. А) Реакция с треххлористой сурьмой. В сухую пробирку вносят 2-3 капли свежего рыбьего жира или масляного раствора витамина А и добавляют 1 мл раствора треххлористой сурьмы в хлороформе, перемешивают. Появляется синее окрашивание. В связи с тем, что развитию окраски мешает присутствие воды, рекомендуется в реакционную смесь добавить несколько капель уксусного ангидрида.
Б) Реакция с сульфатом железа. В пробирку вносят 1-2 капли рыбьего жира или масляного раствора витамина А, добавляют 5-10 капель ледяной уксусной кислоты, насыщенной сульфатом железа. Появляется голубое окрашивание, переходящее в розово-красное. В) Реакция с серной кислотой. Под воздействием концентрированной серной кислоты растворы витамина А приобретают сине-фиолетовую окраску, возникновение которой связано с водоотнимающим действием реактива. Окраска является нестойкой и быстро сменяется буроватой, вследствие образования липохрома. 1 каплю рыбьего жира растворяют в 20-25 каплях хлороформа, к раствору добавляют 1 каплю концентрированной серной кислоты и встряхивают. Появляется сине-фиолетовое окрашивание, которое вскоре переходит в красновато-бурое и бурое. Лабораторная работа № 2 Определение содержания каротинов В растительных объектах
Каротины экстрагируют ацетоном или этиловым спиртом и выделяют из смеси пигментов на хроматографической бумаге. Каротины элюируют из хроматограммы петролейным эфиром или низкокипящим бензином и их содержание определяют путем колориметрирования.
Материалы, посуда, реактивы: петролейный эфир (температура кипения 60-70° С) или бензин (температура кипения 70-80° С);
ацетон или этиловый спирт, 95-96%; хроматографическая бумага (вес 1 дм 2 = 0,85 г); углекислый натрий или углекислый кальций; азобензол, перекристаллизованный из спирта и высушенный. 145 мг препарата растворяют в 100 мл 96% этилового спирта; из данного основного раствора готовят рабочий, разбавляя его спиртом в 10 раз (в мерной колбе на 100 мл). 1 мл рабочего раствора азобензола соответствует 0,00235 мг каротина; растворы хранят в темном месте; кварцевый песок; концентрационный колориметр или колориметр-нефелометр; стеклянные сосуды цилиндрической формы, высота 25-30 см, диаметр 13-15 см, с притертыми пробками или крышками; ступки фарфоровые; мерные цилиндры на 100 мл с притертыми пробками. А) Экстракция каротинов Навеску растительного материала(1-10 г в зависимости от предполагаемого содержания каротинов) растирают в ступке с ацетоном или 95-96% спиртом, добавив немного кварцевого песка и щепотку углекислого натрия или химически чистого мела (углекислого кальция) для нейтрализации кислот. Ацетон или спирт приливают порциями по 10-15 мл. Экстрагирование повторяют несколько раз. Вытяжки сливают в мерный цилиндр на 100 мл. Извлечение продолжают до получения бесцветного экстракта. Раствор в мерном цилиндре доводят ацетоном или спиртом до определенного объема (50-60-75-100 мл).
Б) Определение каротинов Хроматографическую бумагу нарезают на полоски длиной 25 см и шириной 15 см. 0,5-1 мл ацетонового (или спиртового) раствора пигментов наносят (в виде полосы) на полоску хроматографической бумаги на расстоянии 4 см от ее нижнего края. Бумагу подсушивают на воздухе (лучше всего с помощью фена) в затененном месте и затем сворачивают в однослойную трубку, верхний конец которой сшивают или скрепляют пластмассовой скрепкой. Трубку ставят на дно стеклянного сосуда, куда заранее был налит петролейный эфир или низкокипящий бензин слоем в 2-3 см (он должен быть ниже места нанесения раствора пигментов на бумагу). Через 20-30 мин. бумажную трубку вынимают из сосуда. Вырезают полоску бумаги, окрашенную в желто-оранжевый цвет (она находится сразу же за фронтом подъема растворителя), измельчают ее (нарезают) в стеклянный бюкс или стаканчик и извлекают каротины небольшими порциями (по 1-2 мл) петролейного эфира или бензина, повторяя экстрагирование до получения бесцветного раствора. Раствор каротинов доводят этими же растворителями до определенного объема (например, 10-20 мл) и колориметрируют, употребляя в качестве стандартного рабочий раствор азобензола (14,5 мг в 100 мл). Содержание каротина (в миллиграммах на 100 г продукта) Х рассчитывают по формуле:
где V1 — объем ацетонового (спиртового) экстракта пигментов в мерном цилиндре, мл; V2 — объем ацетонового (спиртового) экстракта, нанесенный на бумагу, мл; V3 — объем раствора каротинов в петролейном эфире или бензине, взятый для колориметрирования, мл; D1 — показания шкалы колориметра для стандартного раствора; D2 — показания шкалы колориметра для исследуемого раствора (среднее из 3-4 определений); n — навеска растительного материала, г.
При колориметрировании каротинов пользуются синим светофильтром. Лабораторная работа № 3 Спектрофотометрический метод определения содержания ретинола в рыбьем жире
Материалы, посуда, реактивы: рыбий жир (медицинский); едкое кали, 50% водный раствор; этиловый спирт, 95%, не содержащий альдегидов. Для проверки на альдегиды к 10 мл спирта добавляют 10 мл воды, 1 мл 2 % раствора азотнокислого серебра и (по каплям) раствор аммиака до исчезновения образующегося вначале осадка; смесь ставят в темное место на 12 часов; она должна оставаться бесцветной и прозрачной; этиловый спирт абсолютный, 99,8% (по объему). Для получения его к 95% спирту-ректификату прибавляют негашеную известь в таком количестве, чтобы куски ее выступали над поверхностью жидкости в колбе. Соединяют колбу с обратным холодильником, снабженным хлоркальциевой трубкой с негашеной известью, осторожно нагревают на водяной бане (при температуре не выше 75° С) в течение часа и затем оставляют стоять на два дня. Через два дня отгоняют спирт в колбу Бунзена, которую плотно соединяют с холодильником. Отводную трубку колбы соединяют с хлоркальциевой трубкой. Концентрация такого спирта составляет около 99,5%. Для более полного удаления влаги к 99,5% спирту добавляют твердый едкий натр или едкое кали (10 г на 1 л) и перегоняют, отбрасывая начальную и конечную фракции; диэтиловый эфир; сернокислый натрий, прокаленный, сохраняют в сосуде с притертой пробкой; спектрофотометр; делительные воронки; колбы конические емкостью 100 мл; колбы для отгонки; баня водяная; баллон с азотом. Ход работы: В конической колбе емкостью 100 мл отвешивают на аналитических весах около 1 г жира, прибавляют 30 мл этилового спирта, не содержащего альдегидов, и 3 мл 50% раствора едкого кали. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и ставят на 30 мин. в горячую водяную баню (85-90° С). После омыления колбу охлаждают, добавляют 50 мл воды и содержимое переносят в делительную воронку. Неомыляемую фракцию три раза экстрагируют диэтиловым эфиром, при этом первый раз берут 50 мл его, а во второй и третий – по 30 мл. Все эфирные вытяжки сливают в другую делительную воронку и несколько раз промывают водой до полного удаления остатков щелочи (проба с фенолфталеином). Для обезвоживания к промытой эфирной вытяжке добавляют 8 г прокаленного сернокислого натра и ставят на 30 мин. в темное место, время от времени встряхивая, после чего фильтруют через сухой бумажный фильтр в колбу для перегонки. Сернокислый натрий на фильтре несколько раз промывают диэтиловым эфиром (берут каждый раз по 10 мл), который фильтруют в ту же колбу. Эфир отгоняют на водяной бане при температуре до 40° С (если отгонку ведут в токе азота, температуру бани можно повысить до 47-50° С).
Примечание. Отгонку эфира рекомендуется вести в токе азота, учитывая легкую окисляемость ретинола; в студенческой работе, рассчитанной на ознакомление с методом, отгонку допускается проводить на воздухе (под тягой!), соблюдая противопожарные мероприятия. После отгонки эфира неомыляемый остаток растворяют в абсолютном этиловом спирте до получения раствора, содержащего в 1 мл 8 международных единиц (ME) витамина А (при изготовлении раствора учитывают, что в 1 г невитаминизированного рыбьего жира должно содержаться не менее 350 ME витамина А; в 1 г витаминизированного рыбьего жира содержится 1000 ME ретинола). Изменяют оптическую плотность раствора на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длинах волн 311, 324,5 и 334 нм. Содержание витамина А в международных единицах х в 1 г жира вычисляют по формуле: , где D испр = 7 D 324,5 – 2,912 D 311 – 4,088 D 334 ; D 324,5, D 311, D 334– оптические плотности раствора при длинах волн 324,5, 311 и 334 нм соответственно; V — разведение, мл; Q — навеска жира, г; 1850 — коэффициент перевода в международные единицы. Одна международная единица витамина А равна 0,3 мкг. Лабораторная работа № 4
|
|||||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-02-17; просмотров: 678; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.22.181.209 (0.016 с.) |