Сибирская язва. Диагностика.

Сибирская язва — остропротекающая болезнь сельскохозяй­ственных животных многих видов. Болеет и человек. Возбуди­тель — Bacillus anthracis.

При постановке диагноза на сибирскую язву используют весь комплекс диагностических методов — эпизоотологический ана­лиз, клинические, патологоанатомические и лабораторные иссле­дования.

Общий принцип эпизоотологического анализа, или обследовав ния, хозяйства изложен в занятии 6. Возбудитель сибирской язвы может распространяться через секреты и экскреты больных жи­вотных, продукты убоя, трупы, а также посредством кровососу­щих насекомых. Особенно опасны места захоронения трупов жи­вотных и стоячие водоемы.

Если болезнь возникла в период стойлового содержания жи­вотных, выясняют условия их кормления и происхождение кор­мов (споры сибирской язвы могут быть занесены с корнеплодами, сеном и мясокостной мукой); если в пастбищный период — обсле­дуют участки, где паслись животные. Необходимо выяснить, ве­лись ли вблизи фермы или пастбищ земляные работы, и собрать сведения за предельно большой срок о случаях появления си­бирской язвы в данной местности.

Клиническое обследование животных начинают с измерения тем­пературы тела (при сибирской язве она повышена). Болезнь выра­жается также отказом от корма, резким припуханием лимфатичес­ких узлов, отеком подчелюстного пространства, у дойных коров — Маститом. У свиней обнаруживают разлитую отечность тестоватой Консистенции в подчелюстном пространстве.

При патологоанатомическом исследовании отмечают характер­ные для сибирской язвы признаки: отсутствие трупного окоченения, сильное вздутие трупа, отеки в подкожной клетчатке, пенис­то-кровянистые истечения из естественных отверстий, синюшную окраску видимых слизистых оболочек и кровоизлияния на них. Однако следует иметь в виду, что весь комплекс указанных изме­нений наблюдают не всегда, поэтому окончательный диагноз ус­танавливают только после лабораторного исследования.

Лабораторная диагностика при сибирской язве включает в себя микроскопию мазков из исходного патологического материала, выделение чистой культуры посевом на питательные среды, био­пробу. При необходимости ставят реакцию преципитации, иден­тифицируют выделенные культуры культурально-биохимическими методами.

Для исследования на сибирскую язву в лабораторию направля­ют ухо, перевязанное у основания, или мазок крови, взятой из надреза уха; от трупов свиней — участки отечной соединительной ткани и заглоточные, а также другие лимфатические узлы с харак­терными патологоанатомическими изменениями. Если подозре­ние на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки.

Мазки микроскопируют немедленно, результаты срочно сооб­щают в хозяйство, направившее материал. Мазки фиксируют эти­ловым спиртом с добавлением 3 % пероксида водорода, окраши­вают по Граму, на капсулы — по методу Ребигера, Михина, Ольта или Романовского— Гимзы и на споры — по методу Пешкова, Ауески, Трихинелье и Златогорова. Если в лаборатории есть люминесцирующие сыворотки, используют метод флюоресцирую­щих антител.

В мазках, окрашенных по Граму, сибиреязвенные бактерии располагаются короткими цепочками или попарно, концы, обра­щенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы обычно закруглены. При окраске на капсулы мазков из свежего материала сибиреязвенные палочки окружены капсулой, из несвежего —бак­терии несколько увеличены, иногда отмечают «тени», а вместо капсул — слабоокрашенные обрывки. При обработке препаратов люминесцирующими сыворотками в мазке обнаруживают специ­фическое свечение, свидетельствующее о наличии в исследуемой пробе возбудителя сибирской язвы.

Посевы из исходного материала делают в МПБ и на МПА или в бульон и на агар Хоттингера. Посевы инкубируют 18...24 ч при температуре 37 °С, при отсутствии роста выдерживают при той же температуре еще 48 ч.

После суточного роста сибиреязвенных бактерий МПБ остает­ся прозрачным, на дне образуется рыхлый осадок, напоминающий комок ваты. При встряхивании пробирки бульон не мутнеет, оса­док разбивается на мелкие хлопья. Мазки из бульонной культуры окрашивают по Граму и исследуют под микроскопом. В мазках обнаруживают цепочки, состоящие из сибиреязвенных палочек.

На плотных питательных средах возбудитель сибирской язвы образует плоские матово-серые шероховатые колонии. Центр колоний затемнен, периферия бахромчатая, с локонообразными отростками.

Для биопробы используют лабораторных животных, восприим­чивых к сибирской язве: белых мышей, кроликов, морских сви­нок. Исследуемый материал суспендируют в небольшом объеме 0,9%-го раствора хлорида натрия, вводят двум белым мышам в дозе 0,2...0,5 мл под кожу спины ближе к корню хвоста или 0,5...1,0 мл двум морским свинкам подкожно в область живота. За животными, зараженными суспензией из исходного материала или культурой возбудителя, наблюдают в течение 10 сут. Заражен­ные животные гибнут через 1...3 сут, иногда позже. Трупы вскры­вают, делают мазки и посевы на питательные среды из крови серд­ца, селезенки, печени, а также инфильтрата, образовавшегося на месте инъекции исследуемого материала.

Сроки исследований: микроскопического — в день поступле­ния материала, бактериологического—до 3 сут, биологического (биопроба) — 10 сут.

Кожевенное сырье на сибирскую язву исследуют в реакции преципитации (РП). Перед ее постановкой свежий патологичес­кий материал предварительно выдерживают в термостате в тече­ние 18...20 ч, несвежий сразу экстрагируют горячим или холодным способом. При этом следует учитывать, что в экстрактах, получен­ных горячим способом, меньше преципитиногенов.

При горячем способе экстрагирования кусочки исследуемого материала (1...2г) помещают в пробирку или колбу, заливают 0,9%-м раствором хлорида натрия в соотношении 1: 10 и кипятят 30...40 мин на водяной бане. При холодном кусочки материала (1...2г) растирают в ступке с песком, переносят в колбу или ба­ночку, заливают 0,9%-м фенолизированным раствором хлорида натрия в соотношении 1: 10 и оставляют на 16...18 ч при темпера­туре 20 ± 2 °С.

Полученные экстракты фильтруют через асбестовую вату до ' прозрачности, при этом первые капли фильтрата удаляют.

РП ставят методом наслаивания или подслаивания.

При наслаивании в уленгутовскую пробирку наливают 0,2...0,3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем осторожно наслаивают равное количество экстракта так, чтобы между. Компонентами образовалась ясно выраженная граница (тонкая прямая линия). При подслаивании в уленгутовскую пробирку сна­чала вносят 0,2...0,3 мл экстракта, затем под него осторожно пас­теровской пипеткой подслаивают равное количество преципитирующей сыворотки.

Если при соединении компонентов резко выраженная граница между ними отсутствует, опыт повторяют. Одновременно ставят контроль преципитируюшей сибиреязвенной сыворотки со стан­дартным сибиреязвенным антигеном: при положительной реак­ции в течение 1...2 мин после соединения компонентов появляет­ся характерное кольцо.

РП считают положительной, если через 1...2 мин и не позже чем через 15 мин на границе между компонентами появилось тон­кое беловатое кольцо.

При отрицательном результате РП с экстрактом, полученным горячим способом, опыт повторяют с экстрактом, полученным хо­лодным способом.